孫瑞卿, 王 霞, 李晉棟, 秦 曙

(山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西功能農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)中心,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室 (太原),山西 太原 030031)

農(nóng)藥殘留試驗(yàn)開(kāi)展過(guò)程中,因外地試驗(yàn)樣品寄送過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng),樣品無(wú)法保證在完全冷凍狀態(tài)下運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室,因?qū)嶒?yàn)室人力、資源限制無(wú)法及時(shí)處理或檢測(cè)試驗(yàn)樣品[1-2]的情況也偶有發(fā)生,有研究證實(shí)農(nóng)藥本身性質(zhì)[3]、環(huán)境溫度[4]、儲(chǔ)存時(shí)間、基質(zhì)差異[5]等因素均可能對(duì)樣品基質(zhì)中待測(cè)農(nóng)藥的穩(wěn)定性產(chǎn)生影響,從而不能真實(shí)、客觀、準(zhǔn)確的反映待測(cè)農(nóng)藥的含量[6-7]。因此,研究農(nóng)藥在儲(chǔ)藏、運(yùn)輸、檢測(cè)過(guò)程中的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性[8]顯得尤為重要。

聯(lián)苯肼酯是美國(guó)科聚亞公司研制的產(chǎn)品,于2008年在我國(guó)獲得登記,主要用于防治蘋果和葡萄上的紅蜘蛛和二斑葉螨,也用于防治觀賞植物上的二斑葉螨。聯(lián)苯肼酯是一種新型選擇性葉面噴霧用殺螨劑[9],其作用機(jī)理為對(duì)螨類的線粒體電子傳遞鏈復(fù)合體III抑制劑的獨(dú)特作用,其對(duì)螨的各個(gè)生活階段有效,具有殺卵活性和對(duì)成螨的擊倒活性(48～72 h),且持效期長(zhǎng),持效期14 d左右,推薦使用劑量范圍內(nèi)對(duì)作物安全,對(duì)寄生蜂、捕食螨、草蛉低風(fēng)險(xiǎn)[10]。農(nóng)藥殘留聯(lián)席會(huì)議 (JMPR) 2006年的殘留試驗(yàn)報(bào)告顯示,聯(lián)苯肼酯風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估定義為聯(lián)苯肼酯及聯(lián)苯肼酯-二氮烯之和,以聯(lián)苯肼酯表示[11]。

為了明確聯(lián)苯肼酯及其代謝物在蘋果基質(zhì)中的穩(wěn)定性,本研究通過(guò)建立高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-MS/MS)分析測(cè)定蘋果中聯(lián)苯肼酯及其代謝物,探討了聯(lián)苯肼酯及其代謝物在蘋果殘留試驗(yàn)樣品中冷凍條件下的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性、模擬運(yùn)輸過(guò)程中的穩(wěn)定性及樣品提取液的穩(wěn)定性,以期為蘋果中聯(lián)苯肼酯及其代謝物的殘留檢測(cè)分析及準(zhǔn)確定量分析提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗(yàn)樣品均采自試驗(yàn)基地。標(biāo)準(zhǔn)品聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯二氮烯生產(chǎn)廠家為Dr. Ehrenstorfer GmbH,甲酸(LC-MS,>99.0%)、乙酸(HPLC,>99.7%)和乙腈(LC-MS,>99.9%)均購(gòu)自賽默飛世爾有限公司,乙腈(HPLC,<99.5%)購(gòu)自天地有限公司,甲醇(LC-MS,>99.9%)購(gòu)自默克股份有限公司,凈化管購(gòu)自島津技邇有限公司,乙酸銨(色譜純,>99.0%)和抗壞血酸(A.R.,≥99.7%)購(gòu)自天津光復(fù)有限公司,氯化鈉(A.R.,≥99.5%)購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器設(shè)備

UPLC-MS/MS(美國(guó)沃特世有限公司),超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),電子天平(美國(guó)奧豪斯上海有限公司),離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf有限公司),刀式研磨儀(德國(guó)Retsch有限公司),渦旋混合儀(萊普特儀器有限公司)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品制備

稱取13份10 g蘋果空白樣品于離心管中,取4份添加聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)溶液,另取4份添加聯(lián)苯肼酯-二氮烯標(biāo)準(zhǔn)溶液,添加濃度均為0.1 mg/kg,混勻后作為模擬運(yùn)輸過(guò)程穩(wěn)定性試驗(yàn)和樣品提取液穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品,其余樣品作空白樣品,于≤-18 ℃冰箱中冷凍保存。

1.3.2 取樣分析

模擬運(yùn)輸過(guò)程穩(wěn)定性試驗(yàn)：在檢測(cè)的前一天,各取2份聯(lián)苯肼酯、2份聯(lián)苯肼酯-二氮烯的樣品,放置于冷藏冰箱(1～5 ℃)儲(chǔ)藏24 h后,與冷凍的各2份樣品一起進(jìn)行提取檢測(cè)。冷藏樣品作為模擬運(yùn)輸過(guò)程中的樣品,通過(guò)對(duì)比冷藏樣品相對(duì)于冷凍樣品的降解率模擬分析樣品在運(yùn)輸過(guò)程中的穩(wěn)定性。

樣品提取液穩(wěn)定性試驗(yàn)：取1份聯(lián)苯肼酯、1份聯(lián)苯肼酯-二氮烯的添加樣品進(jìn)行提取,提取液分為4份于進(jìn)樣小瓶中,2份當(dāng)天檢測(cè),另外2份置于≤-18 ℃冷凍冰箱中保存,48 h后取出檢測(cè),分析測(cè)定提取液儲(chǔ)藏期間的穩(wěn)定性。

1.3.3 樣品處理方法

稱取粉碎的蘋果樣品10 g于離心管中,加入10 mL乙腈,渦旋提取10 min后加入5.0 g氯化鈉,繼續(xù)渦旋5 min,5 000 r/min離心3 min,取上清液加入盛有150 mg無(wú)水硫酸鎂和25 mg C18的凈化管中,2 500 r/min渦旋3 min,5 000 r/min離心2 min,上清液過(guò)膜后進(jìn)UPLC-MS/MS分析聯(lián)苯肼酯。另取1 mL上清液加入1 mL0.5%抗壞血酸水溶液,超聲15 min,過(guò)膜后進(jìn)UPLC-MS/MS分析聯(lián)苯肼酯及聯(lián)苯肼酯-二氮烯之和(以聯(lián)苯肼酯計(jì))。

2 結(jié)果與分析

2.1 儲(chǔ)藏穩(wěn)定性結(jié)果

經(jīng)查詢,JMPR于2006年對(duì)聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性進(jìn)行了評(píng)估,評(píng)估結(jié)果見(jiàn)表1。評(píng)估結(jié)果顯示,于蘋果空白樣品中分別添加0.1 mg·kg-1聯(lián)苯肼脂和聯(lián)苯肼脂-二氮烯標(biāo)準(zhǔn)溶液,0 d時(shí)剩余殘留量分別為0.090 mg·kg-1和0.076 mg·kg-1,第224天時(shí)聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果中的殘留量在冷凍條件(-24～-20 ℃)下仍是穩(wěn)定的。因此,聯(lián)苯肼酯在蘋果上的殘留試驗(yàn)樣品從采集到檢測(cè)的最長(zhǎng)儲(chǔ)藏時(shí)間為224 d,若沒(méi)有超過(guò)有效儲(chǔ)藏期,儲(chǔ)藏期間不會(huì)對(duì)樣品的殘留量產(chǎn)生影響。

表1 蘋果中聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯殘留冷凍(-24～-20℃)儲(chǔ)藏穩(wěn)定性結(jié)果

2.2 模擬運(yùn)輸過(guò)程中儲(chǔ)藏穩(wěn)定性結(jié)果

聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果中模擬運(yùn)輸過(guò)程儲(chǔ)藏穩(wěn)定性數(shù)據(jù)結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明,在1～5 ℃下儲(chǔ)藏24 h,蘋果中聯(lián)苯肼酯的降解率為0,聯(lián)苯肼酯-二氮烯的降解率為12.0%,均小于30%,說(shuō)明此條件下殘留量是穩(wěn)定的。

表2 聯(lián)苯肼酯及聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果中模擬運(yùn)輸過(guò)程儲(chǔ)藏穩(wěn)定性結(jié)果

2.3 樣品提取液穩(wěn)定性結(jié)果

聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果中樣品提取液穩(wěn)定性數(shù)據(jù)結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果顯示,蘋果樣品的提取液置于-24～-20 ℃冰箱中冷凍保存48 h,聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯的降解率分別為8.3%和8.0%,說(shuō)明此條件下殘留量是穩(wěn)定的。

表3 聯(lián)苯肼酯及聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果提取液的儲(chǔ)藏穩(wěn)定性結(jié)果

3 結(jié)論

本研究表明,儲(chǔ)藏時(shí)間、儲(chǔ)藏溫度均會(huì)對(duì)聯(lián)苯肼酯及其代謝物在蘋果中的殘留量產(chǎn)生影響。根據(jù)JMPR 2006年報(bào)告,-24～-20 ℃冷凍條件下聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯-二氮烯在蘋果中的殘留量在224 d內(nèi)是穩(wěn)定的,在模擬運(yùn)輸過(guò)程中1～5 ℃的儲(chǔ)藏條件下24 h之內(nèi)是穩(wěn)定的,樣品提取液在-24～-20 ℃的儲(chǔ)藏條件下儲(chǔ)藏48 h是穩(wěn)定的。因此,蘋果聯(lián)苯肼酯農(nóng)藥殘留試驗(yàn)樣品從采集到檢測(cè)的儲(chǔ)藏時(shí)間最長(zhǎng)不能超過(guò)224 d,所有樣品運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室時(shí)溫度需控制在5 ℃以下,樣品提取液須在48 h之內(nèi)完成檢測(cè),可確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。