孫鐵鋒,王平,2,丁相龍,丁立鈞,姜其寶,王金國

(1.山東省中醫(yī)藥研究院,山東 濟(jì)南 250014;2.天津大學(xué)精密測試技術(shù)及儀器國家重點實驗室,天津 300072;3.青島市黃島區(qū)第二中醫(yī)醫(yī)院,山東 青島 266400;4.日照市中醫(yī)醫(yī)院,山東 日照 276800;5.山東中醫(yī)藥大學(xué),山東 濟(jì)南 250355)

多肽(polypeptide)是α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物,是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物。由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫作二肽,同理類推還有三肽、四肽、五肽等。通常由10～100個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽[1]。它的分子結(jié)構(gòu)是氨基酸和蛋白質(zhì)之間的化合物[2-3]。許多中藥中都存在著多肽成分,對于多肽成分的研究日益受到重視,迫切需要一種有效的方法來篩選和鑒定中藥原料中的多肽有效成分,包括薄層色譜(thin-layer chromatography,TLC)、高效液相色譜(high performance liquid chromatography,HPLC)、氣相色譜(gas chromatography,GC)等方法。已有研究[10]采用高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對幾種阿膠塊的特征肽進(jìn)行了鑒定,鑒定結(jié)果準(zhǔn)確,但過程較為復(fù)雜。最近,細(xì)胞膜色譜(cell membrane chromatography,CMC)技術(shù)的蓬勃發(fā)展為篩選和鑒定多肽提供了新思路、新方法。

細(xì)胞膜色譜是一種利用小分子配體和受體、酶和底物、抗原和抗體之間的高度特異性相互作用,或通過氫鍵、離子、疏水和親水相互作用的分子結(jié)合能力來模擬體內(nèi)藥物之間相互作用的仿生色譜方法。近年來細(xì)胞膜色譜方法應(yīng)用于藥物受體相互作用的研究和復(fù)雜樣品中有效或有害成分的篩選[14]越來越普遍,細(xì)胞膜色譜在高表達(dá)受體、工程細(xì)胞培養(yǎng)等方面取得重大成果,大大提高了藥物成分的篩選速度。本文擬將近幾年關(guān)于細(xì)胞膜色譜的原理及特點、分類以及在多肽類藥物成分的篩選方面的研究做個總結(jié)。

1 細(xì)胞膜色譜的原理及特點

在細(xì)胞膜的表面,存在著一個活性的受體和一個離子通道,它們能夠與一些藥物相結(jié)合,對第二個或者第三個信號分子起到一定的作用,引發(fā)一些生物學(xué)效應(yīng),達(dá)到藥理作用。細(xì)胞膜色譜以硅膠作為載體,將具有靶向作用的細(xì)胞膜固定在硅膠載體上,利用硅膠表面的硅羥基不可逆地強(qiáng)大的吸附作用和吸附的細(xì)胞膜之間的融合作用,從而使硅膠表面被細(xì)胞膜所覆蓋,形成具有生物活性的細(xì)胞膜固定相[15],將緩沖溶液作為流動相,將中藥物質(zhì)添加到緩沖溶液中,經(jīng)過一段時間,中藥活性物質(zhì)被保留在固定相中,無效成分經(jīng)過洗脫流出色譜柱,完成篩選過程。

細(xì)胞膜色譜技術(shù)可以使細(xì)胞膜保持完整性和酶活性,從而使得細(xì)胞膜色譜具有色譜分離、活性檢測和藥物鑒定等作用[16],可以將每味中藥的活性成分形成化學(xué)庫,一個細(xì)胞膜色譜柱形成一種高通量篩選系統(tǒng),多類細(xì)胞膜色譜柱從而形成中藥的高通量篩選系統(tǒng)[17],可以進(jìn)行定性和定量分析,具有簡便性、穩(wěn)定性等特點[18]。

2 細(xì)胞膜色譜的分類及應(yīng)用

根據(jù)所選細(xì)胞膜是否固定在色譜載體上,細(xì)胞膜色譜技術(shù)可分為細(xì)胞膜生物親和色譜技術(shù)和細(xì)胞膜固相色譜技術(shù)[19]。

細(xì)胞膜生物親和色譜法使用各種生物活性物質(zhì)(如酶、載體蛋白、細(xì)胞膜等)作為固定相。由于這種生物活性固定相可以特異性地結(jié)合參與人類生活的不同生物活性物質(zhì),生物色譜法可以用來分離和制備具有不同生物活性的物質(zhì)。目前,生物色譜法主要使用固定在色譜支架上的活性生物分子、活性細(xì)胞膜(或仿生膜)、活細(xì)胞、植物細(xì)胞(或細(xì)胞壁)[20]。

細(xì)胞膜固相色譜法是利用色譜學(xué)技術(shù)研究流動相中藥物與受體相互作用規(guī)律的受體動力學(xué)新方法[21],因細(xì)胞膜固相色譜的細(xì)胞膜上有許多不同的受體,利用親和性的生物大分子,可以特異性地選擇性地與作用組分結(jié)合,并與其進(jìn)行特殊的結(jié)合和分離,具有結(jié)合、高效、穩(wěn)定的特性,從而模擬藥物與靶點之間的相互作用,并將特定的組分釋放到細(xì)胞膜的靶點上[22]。

2.1 細(xì)胞膜固相色譜法將特定的活性細(xì)胞與植物的浸提物在合適的培養(yǎng)液中進(jìn)行混合培養(yǎng),使其與細(xì)胞膜受體特異地結(jié)合,通過洗滌、解離等方法將其釋放,然后利用層析技術(shù)對解離液中的有效組分進(jìn)行分離。這種方法能有效地減少許多非特定成分的干擾,為中藥的活性成分研究提供了一種新的途徑[23]。主要流程包括:①親和孵育;②洗脫;③提取;④色譜分離、分析、比較。

李翠芹等[24]用兔白細(xì)胞膜(WBCM)制成了WB-CMC模型,并對其在 WBCM、TLR4的作用部位進(jìn)行了研究。同時,利用正相色譜法和反相柱色譜法對白術(shù)進(jìn)行了超臨界萃取,結(jié)果表明,白術(shù)中抗炎癥作用的主要化學(xué)成分是白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和烷烴。

樊宏偉等[25]通過建立血小板細(xì)胞膜色譜模型,對丹參與血小板間的相互作用進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)此系統(tǒng)中殘余組分與其藥效關(guān)系密切。結(jié)果顯示,血小板液-固相色譜中,主要的反應(yīng)物質(zhì)與受體、通道、 淀粉樣前體蛋白(amyloid precursor protein,APP)等分子間的交互作用,其他成分與其藥效有明顯的關(guān)系。朱建梁等[26]以腎小球系膜細(xì)胞膜固相色譜法測定丹皮中的作用組分,并以其為固定相,選擇性地將其與腎系膜細(xì)胞結(jié)合,由此推測,丹皮酚是其作用部位。

2.2 細(xì)胞膜生物親和色譜[27]通過將一種特殊的細(xì)胞膜與一種特殊的載體結(jié)合,從而形成一種與特定的活性組分相結(jié)合的細(xì)胞膜固定相,從而能夠動態(tài)地模擬出體外藥物與體內(nèi)靶基因的相互作用,并對其合成機(jī)理進(jìn)行了深入的研究。主要過程是:①分離活性細(xì)胞膜;②固定活性細(xì)胞膜;③制備細(xì)胞膜色譜柱;④細(xì)胞膜色譜和分析[28]。

Gu等[29]用骨髓單個核細(xì)胞膜色譜法篩選黃芩抗骨質(zhì)疏松成分,提高了篩選效率。Li等[30]以硅膠為載體,以昆明種小鼠腹腔巨噬制備細(xì)胞膜固定相,通過對魚腥草進(jìn)行體外抗氧化劑的篩選,并與氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)進(jìn)行比較,分析表明,甲基正壬酮是魚腥草中主要的抗氧化劑(MNK)。Hou等[31]制備了以硅膠為載體的MDA -MB - 231細(xì)胞膜固定相,并用2D LC - MS(二維液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀)分析技術(shù),篩選厚樸中抗乳腺癌成分,結(jié)果顯示,和厚樸酚和厚樸酚為其主要抗乳腺癌成分。

Sun等[32]以硅膠為載體,在人胚胎腎細(xì)胞(human embryonic kidney 293,HEK293)細(xì)胞膜上高表達(dá)表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)的士的寧中篩選抗EGFR成分,發(fā)現(xiàn)馬錢子的主要活性成分為馬錢子堿和士的寧。多種細(xì)胞膜模型用于篩選中藥或化合物的活性成分,如丹參、四川牡丹和當(dāng)歸。

3 細(xì)胞膜色譜在多肽類成分中的應(yīng)用

多肽(polypeptide)是一類新興生物活性有效成分,其相對分子質(zhì)量介于大分子蛋白/抗體類成分和小分子化學(xué)成分之間[33]。隨著多肽篩選技術(shù)的不斷發(fā)展,已開發(fā)出更多的多肽藥物,用于疾病的診斷、治療和預(yù)防[34]。多肽的研發(fā)已在許多系統(tǒng)疾病中顯示出多肽的藥效和潛在的商業(yè)價值,其應(yīng)用范圍包括:抗菌肽、抗氧化肽、抗腫瘤肽等。利用小分子化合物調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)間的交互作用,從而干擾細(xì)胞的信號傳導(dǎo)通路,從而調(diào)節(jié)機(jī)體的生命活動,從而達(dá)到抑制腫瘤生長的目的。多肽能通過干擾腫瘤細(xì)胞的信號傳導(dǎo)途徑,抑制腫瘤細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡[35]。其中,抗體藥物具有較高的價格、較大的分子量和復(fù)雜的生物結(jié)構(gòu),并可通過非特異性的吸收而導(dǎo)致肝臟的損害,從而限制了其臨床應(yīng)用[36]。多肽藥物易降解,細(xì)胞膜滲透性差,是當(dāng)前亟待解決的問題。由于該技術(shù)具有在線、高通量、自動化等優(yōu)點,是一種高效的組分篩選技術(shù)。

3.1 細(xì)胞膜色譜法在抗菌多肽方面的應(yīng)用抗菌肽又被稱為抗微生物肽,對細(xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲、腫瘤細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗菌作用,其本身的穩(wěn)定性和抗性很低,是一種能夠抵御微生物侵襲的高質(zhì)量的多肽。自身穩(wěn)定性較高并且產(chǎn)生抗藥性的概率相對較低,在具體的構(gòu)建過程中,是機(jī)體抵抗病原微生物侵襲、具有優(yōu)質(zhì)的抵抗微生物活性的小分子多肽[37]。大多數(shù)的抗菌肽對革蘭陰性菌和革蘭陽性菌均有效,某些種類的抗菌肽還對真菌、病毒、寄生蟲等也具有殺滅作用。有研究表明,有些類型的抗菌肽具有抗DNA、RNA病毒的作用[38]?？咕姆肿雍苄?可以在很短的時間內(nèi)生成,而且它的反應(yīng)速度和傳播速度要比人體內(nèi)的免疫細(xì)胞快得多。由于其特殊的機(jī)制,能夠形成不耐菌的特點,成為新型的抗菌藥物。抗菌肽是一種免疫調(diào)節(jié)物質(zhì),它可以參與到宿主自身免疫系統(tǒng)中的其他反應(yīng)中,增強(qiáng)免疫細(xì)胞的增殖和吞噬能力,調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)及相關(guān)免疫因子的活性,從而激活和調(diào)整免疫系統(tǒng),增強(qiáng)人體的免疫力。但是,抗菌肽在生產(chǎn)中也面臨著諸多問題:①抗菌肽種類繁多,殺菌效果和功能不盡相同;②抗菌肽在體內(nèi)的作用機(jī)制還不明朗;③大部分的天然抗菌肽還存在著活性低、毒性大等問題;④抗菌肽在酶的作用下會喪失生物活性,穩(wěn)定性較差。綜上可知,目前抗菌肽應(yīng)用還處于試驗探索階段,今后還需付出諸多努力解決上述問題,為抗菌肽的應(yīng)用打下堅實基礎(chǔ)。利用細(xì)胞膜色譜技術(shù)可以更好地發(fā)現(xiàn)廣譜的抗菌肽,探討抗菌肽的作用機(jī)理。

王改玲[39]以草魚為研究對象,利用細(xì)胞膜層析技術(shù),將抗菌蛋白從體表黏液中分離出來,并對其氨基酸成分進(jìn)行了質(zhì)譜分析。通過構(gòu)建真核表達(dá)載體,對鯉魚上皮細(xì)胞進(jìn)行抗菌、抗病毒、抗菌活性的研究,結(jié)果表明,用細(xì)胞膜色譜技術(shù)制備抗菌肽是可行的。

肖建輝[40]以麻瘋樹種子粉為起始材料,建立了擴(kuò)散-分層色譜法,并以解毒的麻瘋樹種子粉及其蛋白水解物改進(jìn)了擴(kuò)散-分層色譜法。通過引進(jìn)研究抗菌機(jī)制的工具和優(yōu)化現(xiàn)有篩選方法的組合和設(shè)計,快速、準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)和制備麻瘋樹的抗菌肽。研究表明,通過細(xì)胞膜親和色譜法可以分離麻瘋樹抗菌肽,細(xì)胞壁膜是抗菌肽(JCpep7和JCpep8)的主要抗菌目標(biāo)。

唐文婷[41]用細(xì)胞膜色譜法制備了模擬磷脂的涂布細(xì)胞膜固定相,并從卵白蛋白胃蛋白酶的水解產(chǎn)物中成功分離出一種新型的抗菌肽。采用模擬細(xì)胞膜的磷脂固相萃取與HPLC技術(shù),結(jié)果表明細(xì)胞膜固相萃取與HPLC技術(shù)適用于抗菌肽的分離。

范華寧[42]利用酪蛋白水解酶,結(jié)合固相親和萃取和高效液相色譜法構(gòu)建了細(xì)胞膜色譜柱,研究了抗菌肽的抗菌性和穩(wěn)定性,以及抗菌肽對金黃色葡萄球菌生長曲線和細(xì)胞膜組成的影響。結(jié)果表明,通過CMC分離酪蛋白衍生的抗菌肽得到的抗菌肽對革蘭陽性和陰性細(xì)菌均有抑制作用,具有一定的熱穩(wěn)定性,能耐受一定的離子強(qiáng)度,而且酪蛋白衍生的抗菌肽能破壞細(xì)菌壁膜結(jié)構(gòu),導(dǎo)致細(xì)菌死亡。

3.2 細(xì)胞膜色譜法應(yīng)用于抗氧化肽活性成分篩選抗氧化肽是一種結(jié)構(gòu)簡單、易吸收、穩(wěn)定性好、無免疫反應(yīng)性的天然抗氧化劑,它不僅具有很好的抗氧化作用,還能起到降低血壓、抗腫瘤的作用,因此在食品、醫(yī)藥、保健食品等方面得到了廣泛的應(yīng)用[43]。不同來源的抗氧化肽對人體的健康起到了積極的作用,在食品、藥學(xué)、生物等方面有著廣泛的應(yīng)用前景。然而,在抗氧化肽作為天然抗氧化劑大規(guī)模地應(yīng)用到人類營養(yǎng)和健康領(lǐng)域之前,仍有許多科學(xué)和技術(shù)問題亟須解決[44]:①酶解制備的許多小肽具有相似的分子量,因此,如何有效地分離、提純目的抗氧化肽是目前亟待解決的問題;②雖然在某些體內(nèi)和體外實驗中,抗氧化肽具有很好的抗氧化作用。然而,目前還沒有標(biāo)準(zhǔn)化的方法來評價多肽的抗氧化性;③抗氧化肽的不穩(wěn)定性是制約其廣泛應(yīng)用于食品和醫(yī)藥領(lǐng)域的重要因素。

玉米蛋白粉中含豐富抗氧化肽,為探究玉米蛋白粉中的抗氧化肽,姜源[46]通過生成完整的極化差分單層結(jié)構(gòu)Caco-2細(xì)胞膜模型,以AGI/LPM和HAI/LGA結(jié)構(gòu)鑒定為研究對象,分離純化了玉米抗氧化肽,事實證明,玉米衍生的五肽AGLPM(丙氨酸—甘氨酸—亮氨酸—脯氨酸—甲硫氨酸(Ala-Gly-Leu-Pro-Met)的抗氧化活性最強(qiáng)。在其(非C端或N端)肽序列中,Leu-肽的抗氧化活性可能大于Ile-肽的抗氧化活性;與非螺旋弧相比,α螺旋結(jié)構(gòu)可能在肽的抗氧化活性中發(fā)揮更大作用。

3.3 細(xì)胞膜色譜應(yīng)用于腫瘤靶向多肽的篩選小分子抗癌肽高度多樣化,其結(jié)構(gòu)多樣性決定了抗癌途徑和機(jī)制的多樣性[47]。肽化合物可以直接或間接作用于腫瘤細(xì)胞,以調(diào)節(jié)其生長和凋亡,抑制腫瘤相關(guān)的物質(zhì)或信號,并促進(jìn)凋亡相關(guān)的物質(zhì)或信號。研究發(fā)現(xiàn)[48],蛋白肽可以增加巨噬細(xì)胞的吞噬能力,促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖。從植物和微生物中分離和合成的多肽可以通過生物或化學(xué)合成來誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和抑制腫瘤發(fā)展。肽具有高度的針對性,不良影響少,而且容易分離和修改,今后分離、修飾和合成新的抗癌肽藥物是有很大希望的。對多肽抗癌機(jī)制的研究還不夠全面,缺乏相關(guān)的臨床和藥理研究,其固有的免疫和適應(yīng)性免疫機(jī)制也沒有得到很好的闡釋,因此需要進(jìn)一步研究,為開發(fā)新的抗癌藥物奠定基礎(chǔ)。

納米醫(yī)學(xué)輸送系統(tǒng)面臨的兩個問題是對腫瘤組織的靶向性差和滲透性差。傳統(tǒng)理論認(rèn)為,納米藥物可以通過實體瘤的高通透性和滯留效應(yīng)(enhanced permeability and retention effect,EPR)效應(yīng)在腫瘤中富集,但最近的研究表明,基于EPR的富集率只有0.7%。特別值得關(guān)注的是通過細(xì)胞膜色譜法篩選腫瘤靶向肽,Lv等[49]開發(fā)了一種基于偽細(xì)胞膜色譜法的腫瘤靶向肽的篩選方法,根據(jù)靶標(biāo)能與細(xì)胞膜表面的受體特異性結(jié)合的原則篩選靶標(biāo)肽序列。通過固相合成法合成了大量的隨機(jī)多肽庫,通過固相萃取法對合成的多肽庫進(jìn)行方便快捷的篩選,并對保留在細(xì)胞膜表面的多肽序列進(jìn)行測序,最終得到目標(biāo)多肽。

Chen等[50]建立了一種新穎的二維比較細(xì)胞膜色譜系統(tǒng)用于篩選復(fù)雜的中草藥中與肝癌相關(guān)的特異性靶向多肽受體結(jié)合的配體。在構(gòu)建高表達(dá)磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican-3,GPC3))的肝癌細(xì)胞株SK-Hep1-GPC3的基礎(chǔ)上,負(fù)載SK-Hep1-GPC3/CMC柱。黏多糖I被保留SK-Hep1-GPC3/CMC色譜柱上,經(jīng)表面等離子體共振檢測,與GPC3的親和力為4.33 μmol·L-1。在細(xì)胞增殖實驗中,黏液蛋白酶I對SK-Hep1-GPC3細(xì)胞的IC為18.01 μmol·L-1,從而根據(jù)柱上的保留行為篩選黃芩抗腫瘤的多肽成分。

溫浙盛等[51]建立了腫瘤脂質(zhì)體細(xì)胞膜色譜模型。通過建立可直接用于體外表達(dá)多肽的DNA文庫,用核糖體表達(dá)法篩選特異性抗腫瘤肽,并用MTT法檢測所篩選肽的體外抗腫瘤作用。結(jié)果表明,通過體外核糖體表達(dá)和脂質(zhì)體從設(shè)計的肽庫中成功地篩選出了部分肽。

4 總結(jié)

CMC技術(shù)自誕生以來,從一維到多維,從脫機(jī)到在線,再從多靶點轉(zhuǎn)成特異性靶點[52],與傳統(tǒng)方法相比,CMC克服了“分離-評價”模式的缺點,在復(fù)雜樣品中目標(biāo)組分的高通量篩選方面具有獨特的優(yōu)勢。采用CMC技術(shù)與HPLC、 MS技術(shù)相結(jié)合,可以有效地篩選和鑒別有效組分。CMC技術(shù)具有在線、高通量和自動化等特點,是一種新型的有效組分篩選技術(shù)。已被廣泛應(yīng)用于抗腫瘤、抗心血管疾病、抗前列腺增生等活性成分的篩選[53-54],篩選準(zhǔn)確度逐漸提高,提高了篩選的效率。

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展如大腸桿菌和哺乳動物細(xì)胞,已被用于在體外過表達(dá)受體蛋白,從而能夠構(gòu)建具有高水平表達(dá)特異性受體的細(xì)胞系。近年來,研究人員利用現(xiàn)代分子生物學(xué)工具構(gòu)建了穩(wěn)定且高表達(dá)的重組HEK293細(xì)胞系,其受體包括表皮生長因子受體(EGFR)、血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR2)、成纖維細(xì)胞生長因子受體-1(FGFR1)和FGFR4 。利用相應(yīng)受體的選擇性拮抗劑作為對照樣品,成功建立了高表達(dá)的CMC模型,發(fā)現(xiàn)了苦參、當(dāng)歸、蓼、黃芪、烏頭和黃葉的活性成分。高表達(dá)細(xì)胞系的構(gòu)建可以實現(xiàn)CMSP類型具有更強(qiáng)的特異性和選擇性的無限擴(kuò)展,從而大大提高了該方法的靈敏度和準(zhǔn)確性。

傳統(tǒng)篩選方法在分析通量、分析效率、分析內(nèi)涵上均存在重大缺陷,嚴(yán)重制約了從復(fù)雜體系中篩選多肽類活性成分的發(fā)展,而CMC作為一種高通量篩選系統(tǒng)可從成千上萬的多肽類成分中快速篩選出具有特殊生物活性的化合物。將組合化學(xué)技術(shù)與藥物高通量篩選技術(shù)相結(jié)合,可使一次合成成千上萬的多肽成為可能,這也將是多肽類藥物開發(fā)的重要途徑。一般多肽的濃度較低,成分復(fù)雜,尤其是雜質(zhì)的理化性質(zhì)和目標(biāo)多肽十分相似,分離純化比較困難,CMC細(xì)胞膜表面的特異性受體可高選擇性地與作用組分結(jié)合,從而達(dá)到理想的分離純化效果。利用新興肽類技術(shù)將被CMC篩選純化出的多肽類活性成分應(yīng)用到制藥中,包括多功能肽、細(xì)胞穿透肽和多肽偶聯(lián)藥物,將大大拓展治療性多肽藥物的應(yīng)用范圍。

細(xì)胞膜色譜存在一定的缺陷,因其是在離體的條件下篩選中藥活性物質(zhì),因此不能模擬活性物質(zhì)在體內(nèi)的結(jié)合情況,不能排除非特異性現(xiàn)象[55];細(xì)胞膜色譜是以受體學(xué)說為原理的,只對于一些有特定靶點的藥物有篩選作用,存在一定的限制。在篩選不同的活性物質(zhì)時需要更換不同的細(xì)胞膜固定相,固定相的制備比較煩瑣,且保存時間不長,實驗的精密度欠缺,難以得到推廣。由于CMC柱的受體容量有限,高含量/親和性化合物可能會導(dǎo)致柱超載,從而導(dǎo)致忽略其他陽性候選物[56]。為克服上述效應(yīng),充分發(fā)掘生物活性物質(zhì),采用了基于化學(xué)成分的二維CMC技術(shù)和化學(xué)成分敲除技術(shù),具有良好選擇性、穩(wěn)定性和再現(xiàn)性,結(jié)合組分敲除方法,克服了色譜柱過載問題,提高了篩選效率。天然植物藥中成分復(fù)雜,應(yīng)用天然藥物分離提取方法篩選其中特定的有效成分周期長,命中率相對較低,而CMC法不經(jīng)分離步驟,直接在模型上確定藥物的某種活性成分,具有方法快速、簡捷、命中率高的特點。因此,細(xì)胞膜色譜法可作為一種高通量的藥物篩選方法用于從中藥復(fù)雜體系中篩選出藥物的活性成分。