徐頻頻 閆俊杰 陳勇 付海標(biāo)

慢性牙周炎是指由細(xì)菌引起的一種慢性感染性疾病，主要表現(xiàn)為牙周組織附著喪失和牙槽骨吸收破壞，患者早期多無明顯癥狀，隨著炎癥進(jìn)一步加重，逐漸出現(xiàn)牙周溢膿、牙齒松動(dòng)等臨床表現(xiàn)，最終可導(dǎo)致牙齒脫落、牙列丟失[1]。研究認(rèn)為，慢性牙周炎會(huì)增加患者發(fā)生心腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)，慢性牙周炎患者早期診斷和病情評(píng)估有重要意義[2]。臨床通過抗生素治療和手術(shù)能夠降低牙周組織破壞程度，但難以完全清除病原菌。因此，明確牙周炎發(fā)病的分子機(jī)制對(duì)指導(dǎo)治療有積極意義。多種細(xì)胞因子參與牙周炎的發(fā)生、發(fā)展，牙周致病菌通過激活免疫活性細(xì)胞，可啟動(dòng)宿主免疫應(yīng)答，促使炎癥因子釋放，加重牙周組織損傷。巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子（macrophage migration inhibitory factor，MIF）是一種多功能蛋白，是炎癥反應(yīng)的主要調(diào)節(jié)因子，參與多種炎癥疾病的進(jìn)展?，F(xiàn)有研究已在牙周炎患者齦溝液中檢測(cè)到MIF 表達(dá)[3]，但關(guān)于其水平高低與牙周炎疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)報(bào)道較少。近年來，Wnt通路中蛋白及抑制因子與牙周炎的相關(guān)研究逐漸受到臨床關(guān)注，β-連環(huán)蛋白（β-catenin）是Wnt 信號(hào)通路中的關(guān)鍵調(diào)控因子，其表達(dá)是激活該通路的重要環(huán)節(jié)，具有介導(dǎo)細(xì)胞間黏附和參與基因表達(dá)的功能[4]?；诖?，本研究探討慢性牙周炎患者齦溝液MIF、β-catenin 的表達(dá)與疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取2019 年1 月至2021 年1 月麗水市人民醫(yī)院口腔科就診的慢性牙周炎患者80 例，參照《2018 年牙周病和植體周病國(guó)際新分類簡(jiǎn)介》中關(guān)于牙周炎嚴(yán)重程度分類標(biāo)準(zhǔn)[5]分為輕中度牙周炎組36例、重度牙周炎組44 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者符合《牙周病診療指南》[6]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）近期未使用過藥物治療口腔疾病者；（3）意識(shí)清晰、認(rèn)知正常者。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）患有惡性腫瘤者；（2）合并高血壓、糖尿病、冠心病者；（3）伴有肝、腎功能障礙者。另選取同期來本院口腔科就診的40 名牙周組織健康者作為對(duì)照組。輕中度牙周炎組男23 例，女13 例；年齡20～65（41.14±7.35）歲。重度牙周炎組男27 例，女17 例；年齡20～65（42.21±7.50）歲。對(duì)照組男22 名，女18 名；年齡20～65（40.91±7.35）歲。3 組研究對(duì)象性別、年齡比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批件號(hào)：LLW-FO-403）。

1.2 方法 所有研究對(duì)象均于治療前采集齦溝液樣本，具體方法：將濾紙條置于牙周袋底停留30 s，獲取齦溝液，將濾紙條放入加有1 ml PBS的試管中，3 000 r/min離心5 min，取上清液，-20 ℃環(huán)境下保存待檢。

1.2.1 齦溝液MIF 表達(dá)水平檢測(cè) 采用ELISA 法檢測(cè)齦溝液MIF 表達(dá)水平，試劑盒為上?？道噬锟萍加邢薰井a(chǎn)品，按照說明書進(jìn)行操作。

1.2.2 齦溝液β-catenin 表達(dá)水平檢測(cè) 采用TRIzol試劑提取齦溝液總RNA，測(cè)定其純度和濃度，鑒定合格后行逆轉(zhuǎn)錄，試劑盒為天根生物有限公司產(chǎn)品，按照說明書進(jìn)行操作。采用RT-qPCR 法檢測(cè)齦溝液βcatenin 表達(dá)，正向引物：5'-CTCTGAGAAACTTGTCCGATG-3'，反向引物：5'-GTGACCACATTTATATCATCAGAAC-3'。引物由華大基因公司合成，擴(kuò)增體系：2 μl cDNA、0.4 μl 正向引物、0.4 μl 反向引物、7.2 μl 過氧化氫溶液、10 μl SYBR 熒光染料。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性15 min，95 ℃變性15 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸30 s，共35 個(gè)循環(huán)。

1.3 觀察指標(biāo) （1）比較重度牙周炎組、輕中度牙周炎組、對(duì)照組齦溝液MIF、β-catenin 表達(dá)水平。（2）分析齦溝液MIF、β-catenin 表達(dá)水平與慢性牙周炎疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性。（3）分析齦溝液MIF、β-catenin 表達(dá)水平對(duì)慢性牙周炎的診斷價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1 重度牙周炎組、輕中度牙周炎組、對(duì)照組齦溝液MIF、β-catenin 表達(dá)水平比較 重度牙周炎組、輕中度牙周炎組、對(duì)照組齦溝液MIF、β-catenin 表達(dá)水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），且重度牙周炎組齦溝液MIF、β-catenin 表達(dá)水平＞輕中度牙周炎組＞對(duì)照組（均P＜0.05），見表1。

表1 重度牙周炎組、輕中度牙周炎組、對(duì)照組齦溝液MIF、β-catenin 表達(dá)水平比較

2.2 齦溝液MIF、β-catenin 表達(dá)水平與慢性牙周炎疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析 Spearman 等級(jí)相關(guān)分析顯示，齦溝液MIF、β-catenin 表達(dá)水平與慢性牙周炎疾病嚴(yán)重程度均呈正相關(guān)（rs=0.744、0.808，均P＜0.05）。

2.3 齦溝液MIF、β-catenin 表達(dá)水平對(duì)慢性牙周炎的診斷價(jià)值分析 ROC 曲線分析顯示，齦溝液MIF、βcatenin 表達(dá)水平診斷慢性牙周炎的最佳截?cái)嘀捣謩e為11.930 ng/ml、1.500 g/L，靈敏度均為0.900，特異度分別為0.950、0.990，均有較高的診斷價(jià)值（均P＜0.05）。見圖1、表2。

表2 齦溝液MIF、β-catenin 表達(dá)水平對(duì)慢性牙周炎的診斷價(jià)值分析

圖1 齦溝液MIF、β-catenin表達(dá)水平診斷慢性牙周炎的ROC曲線

3 討論

慢性牙周炎主要由牙菌斑作用在牙面上，對(duì)牙周組織進(jìn)行刺激而形成，主要表現(xiàn)為牙齦炎癥、牙周袋形成、附著喪失、牙槽骨松動(dòng)等[7]。據(jù)報(bào)道，齦溝液中富含微生物、營(yíng)養(yǎng)素、血清蛋白、炎癥因子、生長(zhǎng)因子等，為維持口腔環(huán)境提供條件，并參與疾病的發(fā)生、發(fā)展，因此，檢測(cè)齦溝液中細(xì)胞因子水平對(duì)于診斷慢性牙周炎具有重要意義[8]。

慢性牙周炎的發(fā)展主要在于致病菌與宿主間的相互作用，多項(xiàng)研究認(rèn)為，在牙周致病菌及其產(chǎn)物的持續(xù)作用下，機(jī)體免疫系統(tǒng)受到刺激，無法正常清除病原微生物，造成牙周組織炎癥反應(yīng)持續(xù)加強(qiáng)，牙齦上皮細(xì)胞釋放多種炎癥因子，影響牙周組織生長(zhǎng)代謝，加重牙周組織損傷程度[9]。MIF 主要表達(dá)于T 淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞中，在先天性免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，參與多種炎性疾病的發(fā)生、發(fā)展，可通過激活下游激酶，活化胞質(zhì)內(nèi)蛋白，引發(fā)炎癥反應(yīng)[10]。Wnt 通路參與機(jī)體骨質(zhì)代謝、免疫調(diào)節(jié)等過程，該通路激活后能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)，在維持牙周穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用，研究指出，βcatenin 是激活該通路的重要環(huán)節(jié)，廣泛存在于內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞中，參與牙周炎癥及免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)[11]。孫欣彤等[12]研究發(fā)現(xiàn)，β-catenin 在慢性牙周炎患者齦溝液和牙齦組織中表達(dá)增加，且水平變化與牙周炎嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，提示β-catenin 對(duì)炎癥環(huán)境起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。龐曉霞等[13]研究發(fā)現(xiàn)，慢性牙周炎患者血清MIF 水平高于健康對(duì)照組人群，提示慢性牙周炎患者存在嚴(yán)重炎癥反應(yīng)。本研究結(jié)果顯示，輕中度牙周炎組、重度牙周炎組齦溝液MIF、β-catenin 表達(dá)水平均高于對(duì)照組，且重度牙周炎組高于輕中度牙周炎組；同時(shí)，Spearman 等級(jí)相關(guān)分析顯示，齦溝液MIF、βcatenin 表達(dá)水平與慢性牙周炎疾病嚴(yán)重程度均呈正相關(guān)。這說明隨著疾病進(jìn)展，慢性牙周炎患者齦溝液MIF、β-catenin 表達(dá)水平均升高，該兩項(xiàng)指標(biāo)能夠較好地反映慢性牙周炎的疾病嚴(yán)重程度。

此外，本研究結(jié)果還顯示經(jīng)ROC 曲線分析，齦溝液MIF、β-catenin 表達(dá)水平對(duì)慢性牙周炎有較高的診斷價(jià)值。筆者分析，MIF 作為一種促炎因子，在機(jī)體發(fā)生感染、應(yīng)激、炎癥時(shí)迅速增高，表現(xiàn)在慢性牙周炎患者中，牙周致病菌可刺激免疫細(xì)胞釋放多種促炎因子，促使齦溝液MIF表達(dá)水平增高，加重病情；Wnt通路可發(fā)揮抗炎和促炎的雙重作用，一方面，Wnt 通路激活后能夠抑制中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的遷移，進(jìn)而抑制炎癥反應(yīng)；另一方面，Wnt 通路還參與調(diào)節(jié)輔助性T 細(xì)胞的分化，β-catenin 表達(dá)可通過NF-κB 信號(hào)通路影響炎癥因子釋放，炎癥反應(yīng)持續(xù)發(fā)生，參與慢性牙周炎患者牙槽骨破壞和牙骨質(zhì)吸收過程，進(jìn)一步加重病情[14-15]。

綜上所述，慢性牙周炎患者齦溝液MIF、β-catenin表達(dá)水平均升高，且與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。該兩項(xiàng)指標(biāo)可用于評(píng)估疾病嚴(yán)重程度，且有較高的診斷價(jià)值，或可為治療方案的選擇提供參考。