陳會琴，胡 青,2，孔令富,2，嚴 暉,2，趙 耀，畢保良,2

(1.云南農業(yè)大學動物科學技術學院，高原漁業(yè)學院，昆明650201；2.云南農業(yè)大學高原漁業(yè)資源保護與可持續(xù)利用重點實驗室，昆明650201)

鱘作為魚類中最原始的群體，是迄今為止發(fā)現(xiàn)起源最早的脊椎動物之一。目前世界上大約有鱘2科6屬27種，其中大部分野生種類瀕臨滅絕，屬世界性保護物種[1]。多年來，鱘被大量捕撈以獲取魚子，鱘魚子在國際市場上享有“黑珍珠”之稱，是國際上經(jīng)久不衰的名貴高檔食品[2]。但因過度捕撈、種質退化和棲息地的喪失，導致許多鱘產(chǎn)業(yè)的衰退。因此，通過對人工鱘養(yǎng)殖條件的研究，能減少人類對野生資源的開發(fā)和利用，進而推動我國鱘產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

西雜鱘(Acipenserbaerii♀×A.schrenckii♂)作為廣鹽性魚類，環(huán)境鹽度變化會引起多種生理應激反應。有研究表明鹽度變化會對水產(chǎn)動物的血清生化指標[3]及血清激素水平[4-5]等造成重要影響，而水產(chǎn)動物可以通過改變血清離子濃度[6-7]以及鰓、腎和腸的Na+-K+-ATP酶活性[8]來適應環(huán)境鹽度的改變，進而調節(jié)體內滲透壓的平衡。此外，魚類的內分泌活動，包括皮質醇、甲狀腺激素(triiodothyronine,T3)、胰島素樣生長因子1(insulinlike growth factor,igf-Ⅰ)和性腺發(fā)育相關基因等[9]都在滲透調節(jié)過程中起著重要作用。鹽度應激對免疫反應也有雙向影響，它可能抑制或增強某些免疫參數(shù)，具體取決于暴露的劑量和持續(xù)時間[10]。應激不僅影響先天免疫反應，而且影響炎癥、獲得性免疫相關基因的表達。例如，谷胱甘肽巰基轉移酶(GST)在多種內源性和外源性化合物的細胞解毒過程中起著非常重要的作用，hsp70和hsp27則介導應激過程中變性蛋白的修復[11]。因此，鹽度是影響廣鹽性魚類生長發(fā)育的重要因子。然而，目前研究鹽度變化對魚類的生長發(fā)育、離子調節(jié)、應激和免疫相關基因等眾多參數(shù)的聯(lián)合分析仍然缺乏。因此，本研究旨在通過測定血清生化指標、激素水平、生長發(fā)育和免疫相關基因的表達水平，研究低鹽馴化對西雜鱘幼魚的影響，以期在低鹽環(huán)境下獲得生長快、疾病少、適應能力強、經(jīng)濟價值高的西雜鱘，同時豐富西雜鱘的相關研究數(shù)據(jù)，為西雜鱘生產(chǎn)養(yǎng)殖過程中的低鹽馴化養(yǎng)殖模式的推廣提供基礎數(shù)據(jù)和理論借鑒。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

西雜鱘幼魚購自云南省會澤縣滇澤水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，在云南農業(yè)大學水產(chǎn)實驗室暫養(yǎng)7 d，水溫10～12 ℃，每天定時投喂，日投餌量為魚體質量的2%～3%，日換水率為50%。選擇90條體質量為(8.1±0.1) g、健康活潑的個體用于低鹽馴化實驗。

1.2 實驗設計

實驗設置3個鹽度組(0‰、4‰、8‰)，分別記為S0、S4、S8，每個鹽度組設置3個平行，每個平行10條魚。S0為對照組，S4處理組,每1d增加1個鹽度，S8處理組每1d增加2個鹽度，逐漸升高水體鹽度，在同一時間內升到最終設定鹽度，并馴養(yǎng)15 d。每日10：00和19：00飼喂商品日糧(粗蛋白質42%，粗脂肪12%，粗纖維6.0%，由昆明恒大飼料有限公司提供)2次，每天喂食前換1/3～2/3水，并補充相應鹽度的水。S4和S8處理組用水由實驗用水與海水晶配置而成，并用鹽度計(LYT-610，上海淋譽貿易有限公司)進行校正和檢測水體鹽度。水質參數(shù)：pH值(7～8.5)，氨氮<0.5 mg/L，亞硝酸鹽<0.1 mg/L，溶解氧>6 mg/L。實驗期間，觀察和記錄實驗魚的日常行為，并用鹽度計監(jiān)測水體，使鹽度始終維持在設定的范圍內。

1.3 樣本采集

采樣前禁食24 h，MS222(100 mg/L)麻醉后稱重(g)、測量體長(cm)和全長(cm)。用一次性無菌注射器從尾動脈取血，置于1.5 mL離心管中，靜置一段時間后，離心(1 500 r/min，30 min)取上清，于-80 ℃保存，用于血清生化指標、抗氧化指標及激素的測定。打開腹腔及鰓蓋，采集鰓、腎、腸組織，于-80 ℃保存，用于Na+-K+-ATP酶活性的測定。另外，采集肝臟和腦組織，放入2.0 mL RNase-free離心管中，于-80 ℃保存，用于基因表達量的測定。

1.4 血清生化指標測定

甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、血糖(GLU)、過氧化氫酶(CAT)、還原型谷胱甘肽(GSH)、總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)的測定根據(jù)北京盒子生工科技有限公司試劑盒說明書進行。總蛋白(TP)的測定根據(jù)北京酷來博科技有限公司試劑盒說明書進行。血清Na+、Cl-的測定根據(jù)南京建成生物工程研究所有限公司試劑盒說明書進行。甲狀腺激素分別為三碘甲腺原氨酸(T3)、游離三碘甲腺原氨酸(FT3)的測定根據(jù)北京北方生物技術研究所有限公司試劑盒說明書進行。皮質醇的測定根據(jù)上海酶聯(lián)生物科技有限公司試劑盒說明書進行。

1.5 Na+-K+-ATP酶活性的測定

稱取西雜鱘幼魚鰓、腎、腸組織各0.1 g，生理鹽水潤洗后，測定步驟根據(jù)北京盒子生工科技有限公司試劑盒說明書進行。

1.6 基因表達量的測定

按照Total RNA Isolation Reagent Kit(biosharp)說明書提取肝臟和腦組織總RNA。用超微量分光光度計(NanoPhotometer NP 80 Touch，德國)檢測總RNA濃度和純度，D260 nm/D280 nm處于1.8～2.0之間。采用GoldenstarTMRT6 cDNA Synthesis Kit反轉錄試劑盒(擎科生物科技有限公司)將1 μg總RNA反轉錄為cDNA，-20 ℃保存，用于基因表達量的測定。

實時熒光定量在CFX ConnectTM Optics Module(Bio-Rad，美國)下進行，以18S RNA為內參，引物序列見表1。qPCR反應體系為20 μL：2×T5 Fast qPCR mix(SYBP Green I)(擎科生物科技有限公司)10 μL，正、反引物各1 μL，cDNA模板2 μL，無菌水6 μL。每個處理設置3個重復，每個基因均設陰性對照(不含cDNA)。反應條件為：95 ℃預變性3 min；然后95 ℃變性20 s，退火20 s(退火溫度見表1)，72 ℃延伸20 s，循環(huán)40次，最后72 ℃延伸10 min。用2-△△Ct計算每個基因的相對表達量[12]。

表1 本試驗所用引物

1.7 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS16.0進行分析，并采用單因素方差分析(One-way ANOVA)Tukey法檢驗，P<0.05為差異顯著，P>0.05為差異不顯著。數(shù)值均采用平均值±標準偏差(mean±SD)表示。根據(jù)結果使用Prism軟件繪圖。

2 結果分析

2.1 低鹽馴化對西雜鱘幼魚生長的影響

低鹽馴化對西雜鱘幼魚生長的影響如圖1所示，鱘幼魚在3個不同鹽度水體中馴養(yǎng)15 d后其體質量(g)，體長(cm)和全長(cm)，組間均無顯著差異。

圖1 低鹽馴化對西雜鱘幼魚體長、全長、體質量的影響

2.2 低鹽馴化對西雜鱘幼魚血清生化指標及抗氧化指標的影響

低鹽馴化對西雜鱘幼魚血清生化指標及抗氧化指標的影響如表2所示，3個鹽度組西雜鱘幼魚其血糖、總蛋白、總膽固醇、甘油三酯、過氧化氫酶、還原型谷胱甘肽、總抗氧化能力和丙二醛，均無顯著差異。

表2 低鹽馴化對西雜鱘幼魚血清生化指標及抗氧化指標的影響

2.3 低鹽馴化對西雜鱘幼魚血清激素水平的影響

2.3.1 低鹽馴化對西雜鱘幼魚血清T3、FT3含量的影響

低鹽馴化對西雜鱘幼魚血清T3、FT3含量的影響如圖2所示，隨著鹽度的升高，西雜鱘血清T3、FT3含量呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢，但不同處理組與對照組之間均無顯著性差異。

圖2 低鹽馴化對西雜鱘幼魚血清T3、FT3含量的影響

2.3.2 低鹽馴化對西雜鱘幼魚血清皮質醇含量的影響

低鹽馴化對西雜鱘幼魚血清皮質醇含量的影響如圖3所示，隨著鹽度的升高，西雜鱘血清皮質醇含量呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢，但不同處理組與對照組之間血清皮質醇含量無顯著性差異。

圖3 低鹽馴化對西雜鱘幼魚血漿皮質醇含量的影響

2.4 低鹽馴化對西雜鱘幼魚Na+-K+-ATP酶活性的影響

低鹽馴化對西雜鱘幼魚鰓Na+-K+-ATP酶活性的影響見圖4a，隨著鹽度的升高，西雜鱘幼魚鰓Na+-K+-ATP酶活性呈現(xiàn)波動式的上升，S8處理組鰓Na+-K+-ATP酶活性達到最高，顯著高于S4處理組，但不同鹽度處理組與對照組相比無顯著差異。低鹽馴化對西雜鱘幼魚腎Na+-K+-ATP酶活性的影響見圖4b，隨鹽度的升高，西雜鱘幼魚腎Na+-K+-ATP酶活性在不同鹽度處理組與對照組之間無顯著差異。低鹽馴化對西雜鱘幼魚腸Na+-K+-ATP酶活性的影響見圖4c，隨鹽度的升高，西雜鱘幼魚腸Na+-K+-ATP酶活性逐漸上升，但不同處理組與對照組之間無顯著差異。

圖4 低鹽馴化對西雜鱘幼魚鰓、腎、腸Na+-K+-ATP酶活性的影響

2.5 低鹽馴化對西雜鱘幼魚血清Na+、Cl-含量的影響

低鹽馴化對西雜鱘幼魚血清Na+、Cl-含量的影響如圖5所示，隨著鹽度的升高，血清Na+含量變化差異不顯著；西雜鱘幼魚血清Cl-含量先下降后升高，S4處理組血清Cl-含量顯著低于對照組，當鹽度升高到8時，血清Cl-含量恢復至對照組水平。

圖5 低鹽馴化對西雜鱘幼魚血清Na+、Cl-含量的影響

2.5 低鹽馴化對西雜鱘幼魚生長、免疫及性腺發(fā)育相關基因表達水平的影響

2.5.1 低鹽馴化對西雜鱘幼魚生長相關基因的表達水平的影響

隨著鹽度升高，西雜鱘幼魚igf-Ⅰ基因的表達水平呈先上升后下降的趨勢，igf-Ⅱ基因的表達水平呈先下降后上升趨勢，但均無顯著差異(圖6)。

圖6 低鹽馴化對西雜鱘幼魚肝臟中igf-Ⅰ、igf-Ⅱ基因相對表達量的影響

2.5.2 低鹽馴化對西雜鱘幼魚免疫相關基因表達水平的影響

隨著鹽度升高，西雜鱘幼魚hsp70、hsp90基因的表達水平呈先下降后升高的趨勢(圖7a和b)；tnf-α基因的表達水平先升高后下降(圖7c)；gst、lysozyme基因的表達水平有緩慢上升的趨勢(圖7d和e)，但低鹽馴化對西雜鱘幼魚免疫相關基因的表達水平均無顯著影響。

圖7 低鹽馴化對西雜鱘幼魚肝臟中hsp70、hsp90、tnf-α、gst和lysozyme基因相對表達量的影響

2.5.3 低鹽馴化對西雜鱘幼魚性腺發(fā)育相關基因表達水平的影響

隨著鹽度升高，fsh、lh基因的表達水平逐漸下降(圖8a和b)，lh基因的表達水平在S8處理組顯著低于對照組，但fsh基因的表達水平在不同處理組與對照組之間無顯著差異。fshr、erα基因的表達水平先下降后上升，而lhr、erβ基因的表達水平呈下降趨勢，但不同處理組與對照組之間均無顯著差異(圖8c-f)。vtg基因的表達水平呈先升高后下降的趨勢，但不同處理組與對照組之間均無顯著差異(圖8g)。

圖8 低鹽馴化對西雜鱘幼魚肝臟和腦中性腺發(fā)育相關基因表達量的影響

3 討論

3.1 低鹽馴化對西雜鱘幼魚Na+-K+-ATP酶活性和血清Na+、Cl-含量的影響

鱘具有特殊的滲透和離子調節(jié)機制以適應不同的鹽度環(huán)境。但鱘幼魚對鹽度變化的反應與成魚不同，這一點已在許多關于鱘滲透調節(jié)能力的試驗中得到證實[14]。鰓和腎作為滲透調節(jié)的重要器官，鹽度變化會導致魚體滲透壓發(fā)生改變，從而產(chǎn)生一系列的生理反應，如血清激素水平、能量代謝和抗氧化酶發(fā)生異常等。因此，鰓和腎中的Na+-K+-ATP酶被激活以維持滲透壓的平衡。有研究表明，在鹽度為10、20、25的條件下馴養(yǎng)史氏鱘，鰓Na+-K+-ATP酶活顯著高于對照組，且隨著脅迫時間的延長受到抑制而呈現(xiàn)下降趨勢，隨后被重新激活逐漸上升，在適應鹽度脅迫后，鰓Na+-K+-ATP酶活性趨于平穩(wěn)[15]。王曉雯等[16]研究表明，雜交鱘幼魚在鹽度5的條件下脅迫后，鰓Na+-K+-ATP酶活會極顯著高于對照組，而后下降至對照組水平。銀鯧幼魚(Pampusargenteus)在低鹽脅迫下，隨著鹽度的下降，鰓和腎中Na+-K+-ATP酶活呈現(xiàn)先升后降的趨勢[17]。而本研究發(fā)現(xiàn)，低鹽馴化西雜鱘幼魚后，鰓Na+-K+-ATP酶活隨鹽度的升高呈現(xiàn)出“U”型變化，但無顯著差異。另外，腸、腎和膀胱等器官對保持內環(huán)境穩(wěn)態(tài)都起到重要作用。但本研究發(fā)現(xiàn)，西雜鱘幼魚在鹽度的適應過程中，腎和腸Na+-K+-ATP酶活并沒有顯著變化，表明在低鹽環(huán)境下馴化西雜鱘幼魚15 d后，鰓Na+-K+-ATP酶參與血清滲透壓的調節(jié)以適應新的環(huán)境，而腸和腎參與血清滲透壓調節(jié)的作用不明顯。

魚類也可通過調節(jié)離子吸收和排泄能力維持滲透壓平衡，以適應不同的鹽度環(huán)境。有研究發(fā)現(xiàn)，中華鱘(Acipensersinensis)在不同鹽度下馴化24h后，血清滲透壓和離子濃度(Na+、Cl-)均有不同程度的升高。此后，滲透壓和離子濃度開始下降，并趨于一個新的穩(wěn)態(tài)[18]，說明血清中Na+和Cl-是血清滲透壓調節(jié)過程的主要參與者，但在本研究中，低鹽馴化15 d后，西雜鱘幼魚血清Na+濃度并未出現(xiàn)顯著性變化，Cl-濃度同鰓Na+-K+-ATP酶活呈現(xiàn)出一致的變化趨勢，先降低后升高，表明西雜鱘幼魚血清Cl-的濃度受鰓Na+-K+-ATP酶活的調控。

3.2 低鹽馴化對西雜鱘幼魚血清生化指標及抗氧化酶的影響

魚體內血糖處于動態(tài)平衡，但極易受環(huán)境因素的影響。前期研究表明，棲息于急流中的魚類相比靜水或底棲性的魚類血糖值偏高[19]，表明運動量增加會引起血糖的升高。雖然滲透機制調節(jié)中的高能量需求會使組織糖元異生作用增強，從而引起血糖濃度的變化，但本研究發(fā)現(xiàn)，低鹽馴化15 d后，西雜鱘幼魚血糖含量未受鹽度影響，表明其逐漸適應低鹽環(huán)境，未使糖代謝產(chǎn)生較大差異。

總膽固醇和甘油三酯是魚體內代謝的重要物質，也是反應機體攝取和合成蛋白的重要指標。本研究發(fā)現(xiàn)，西雜鱘幼魚血清總膽固醇的濃度與鹽度呈正相關趨勢，甘油三酯濃度隨鹽度的上升呈下降趨勢，但各組間差異不顯著，表明鹽度變化會導致西雜鱘幼魚血清總膽固醇與甘油三酯的含量產(chǎn)生一定的波動，但影響不顯著。膽固醇是肝臟合成的一種類脂，在血液中以不同的脂蛋白形式存在，而甘油三酯是脂肪代謝的中間代謝物質。當鹽度上升時，西雜鱘幼魚血清中的總膽固醇逐漸上升，據(jù)此推測，此時總膽固醇轉化為膽汁酸，促進機體對脂類的吸收，因此血清中的總膽固醇有所升高，而甘油三脂的含量下降，但在低鹽條件下馴化西雜鱘幼魚15 d后，并不會對這個過程造成顯著的影響。血清蛋白是組織蛋白質合成的原料，但低鹽馴化15 d后，對西雜鱘幼魚血清總蛋白濃度無顯著影響，說明鹽度變化對西雜鱘幼魚肝臟合成蛋白的能力無明顯影響。

環(huán)境鹽度變化引起魚體生理應激而產(chǎn)生過量的活性氧自由基，為避免氧化損傷，機體調動抗氧化防御體系來維持機體內環(huán)境平衡[16]，使機體產(chǎn)生應激以適應環(huán)境的改變。但長期處于應激狀態(tài)會導致免疫機能下降，影響魚體的生長。楊靜雯等[20]在研究鹽度對虹鱒和硬頭鱒(Oncorhynchusmykiss)抗氧化酶活性影響的實驗中發(fā)現(xiàn)，馴化時間在4～8 d內，各鹽度組實驗魚超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽氧化物酶(GSH-Px)活性均有不同程度的下降，表明魚類在受到鹽度脅迫時會充分調動機體防御機制應對鹽度變化產(chǎn)生的活性氧，使機體產(chǎn)生的活性氧含量降低，而抗氧化酶活力也隨之下降。海水馴化對中華鱘(A.sinensis)血清抗氧化能力影響的研究中發(fā)現(xiàn)，每天鹽度增加1，達到25后繼續(xù)養(yǎng)殖3個月，海水養(yǎng)殖的中華鱘血清總抗氧化能力明顯高于淡水組，表明鹽度刺激增強了中華鱘的抗氧化酶活力[21]。而趙峰等[22]研究發(fā)現(xiàn)，在水體鹽度為10的條件下，對鱘仍未產(chǎn)生氧化脅迫反應。本研究也發(fā)現(xiàn)，西雜鱘幼魚馴化15 d后，鹽度對CAT、MDA、GSH、T-AOC等抗氧化指標均無顯著影響，說明低鹽環(huán)境下產(chǎn)生的應激未能激活機體相關抗氧化酶清除氧自由基的能力。

3.3 低鹽馴化對西雜鱘幼魚血清激素水平的影響

神經(jīng)內分泌系統(tǒng)是滲透調節(jié)的重要組成部分，但鹽度變化破壞離子平衡后，甚至會引起滲透調節(jié)中激素水平的變化。其中性腺激素、皮質醇、胰島素樣生長因子1和甲狀腺激素在滲透調節(jié)中起著重要作用，能夠控制參與滲透調節(jié)器官的活動以及維持滲透壓的平衡。前期研究發(fā)現(xiàn)，在高鹽度脅迫下，能夠改變血漿的滲透壓，引起甲狀腺激素水平升高。同時，甲狀腺激素常與皮質醇和生長激素等其他激素一起參與魚類的發(fā)育、生長、新陳代謝和滲透調節(jié)[23]。裸腹鱘(A.nudiventris)在鹽度(0、4、8、12)馴化10 d后，血漿皮質醇的水平升高[24]。另外，將塞內加爾鰨(Soleasenegalensis)從海水(38)轉移到不同的鹽度(5，15，38和55)中馴化17 d，血漿皮質醇水平升高，而血漿甲狀腺激素FT4水平降低，表明在滲透壓調節(jié)過程中，這兩種激素之間存在相互作用[25]。但本研究發(fā)現(xiàn)，在鹽度為4和8的條件下馴化西雜鱘幼魚15 d后，皮質醇和甲狀腺激素(T3、FT3)水平無顯著變化，其體重、體長、全長也均無顯著差異，表明15 d的低鹽馴化可以提高其耐鹽性，進而未對甲狀腺功能和生長造成影響。

3.4 低鹽馴化對西雜鱘幼魚免疫相關基因的表達水平的影響

鹽度脅迫除了影響滲透壓外，還可能影響免疫功能，改變免疫相關基因的表達水平。低鹽脅迫銀鯧(Pampusargenteus)引起的免疫相關基因表達變化比高鹽脅迫更明顯[26]。因此，本研究測定了低鹽馴化對西雜鱘幼魚免疫相關基因(hsp70、hsp90、tnf-α、gst、lysozyme)表達水平的影響。其中，熱休克蛋白(HSPs)是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在內外環(huán)境應激中發(fā)揮重要作用。在鹽度為12‰時，黑鯛(Myliomacrocephalus)hsp90在肝臟中表達水平最低，在鹽度為6和50時升高[27]。為了適應高鹽(12、33和50鹽度濃度)脅迫，真鯛(Sparussarba)hsp70在肝臟中表達上調[28]。因此，鹽度脅迫會增加滲透調節(jié)器官的代謝活性，從而導致組織中hsp70表達上調。本研究發(fā)現(xiàn)，hsp70、hsp90表達水平呈先下降后升高的趨勢，但各組間差異不顯著。tnf-α是免疫反應中吞噬細胞產(chǎn)生的主要促炎因子之一。銀鯧在低鹽(12)脅迫下，肌肉組織中tnf-α表達水平降低[26]。但本研究發(fā)現(xiàn)，西雜鱘幼魚肝臟中tnf-α表達水平先升高后降低，且各組之間無顯著變化。溶菌酶活性與先天免疫反應密切相關，它對外來物質的入侵反應敏感。暗紋東方鲀(Takifugufasciatus)肝臟溶菌酶活性在鹽度為15時顯著升高，并在鹽度為30時仍維持較高水平[29]。與本研究結果相似，西雜鱘幼魚在低鹽馴化下，lysozyme基因表達水平逐漸升高，但各組之間無顯著變化，因此，溶菌酶的升高表明在病原體入侵期間可以保護宿主的各種體液因子免受干擾。另外，尼羅羅非魚(Oreochromisniloticus)在鹽度為16時，鰓和肝臟中gst表達上調[11]，說明鹽度增加使得魚體代謝活性增強，從而引起氧化應激產(chǎn)生更多的活性氧物質(ROS)，刺激gst表達上調，來維持魚體的動態(tài)平衡。本研究中，隨著鹽度升高，gst表達水平逐漸升高，但各組間無顯著變化。綜上所述，低鹽馴化15 d后，對西雜鱘幼魚免疫相關基因(hsp70、hsp90、tnf-α、lysozyme、gst)沒有顯著影響。

3.5 低鹽馴化對西雜鱘幼魚生長發(fā)育的影響

溫度、光周期和鹽度等環(huán)境因子都會對魚類的生長產(chǎn)生影響。環(huán)境鹽度是影響魚類生長的關鍵因素之一，特別是在羅非魚、鱘這類廣鹽性魚類中。與脊椎動物類似，魚類的生長很大程度上受生長激素(GH)/胰島素樣生長因子-I(IGF-I)軸的控制，通過內分泌、旁分泌或自分泌信號機制發(fā)揮作用。前期研究發(fā)現(xiàn)，魚類igf-Ⅰ的表達對鹽度變化高度敏感。隨著鹽度的增加，羅非魚(O.mossambicus)、大西洋白姑魚(Argyrosomusregius)、大西洋鮭魚(Salmosalar)和黑鯛igf-Ⅰ的表達水平升高[9,30-31]。S4和S8處理組igf-Ⅰ表達水平與對照組相比有所升高，但無顯著差異，表明在不同魚類中，igf-Ⅰ可能在不同程度上參與了滲透壓調節(jié)，從而使魚類能夠適應不同的鹽度環(huán)境。另外，尼羅羅非魚igf-Ⅱ的表達水平隨著鹽度的增加呈遞減趨勢，但鹽度為0、4和8g/L時，igf-Ⅱ的表達水平?jīng)]有顯著差異[32]。與本研究類似，在鹽度為4和8的條件下馴化西雜鱘幼魚15 d后，igf-Ⅱ表達水平與對照組相比也無顯著差異。

溫度、光周期和鹽度等也作為重要的環(huán)境因子參與魚類性腺發(fā)育的調節(jié)。對于洄游性繁殖的魚類，鹽度是影響性腺成熟的重要因子之一。黑頭軟口鰷(Pimephalespromelas)和尼羅羅非魚，隨著環(huán)境鹽度的增加，性腺發(fā)育和生殖均受到了抑制[33]。大麻哈魚(Oncorhynchusketa)在產(chǎn)卵季節(jié)處于鹽度低于0.5的環(huán)境中，才能正常發(fā)育成熟并完成繁殖活動[34]。在魚類性腺發(fā)育過程中，卵泡刺激素(FSH)刺激性腺分泌雌二醇和睪酮等性類固醇激素，調節(jié)性腺的發(fā)育和配子的生成，促黃體激素(LH)則主要刺激產(chǎn)生17α，20β-二羥黃體酮，促使卵母細胞和精子的最后成熟并刺激排精和排卵。因此，為了闡明低鹽馴化對西雜鱘幼魚早期性腺發(fā)育的影響，本研究測定了腦和肝臟中fsh、lh、fshr、lhr的表達水平，隨著鹽度的增加，腦中fsh和lh的表達水平呈遞減趨勢，lh的表達水平在鹽度8與對照組之間有顯著差異，但肝臟中fshr、lhr和腦中fsh在各組間的表達無顯著變化，通過15 d的低鹽馴化，對西雜鱘幼魚早期性腺發(fā)育沒有直接的影響。另外，雌激素主要調節(jié)卵巢的發(fā)育、分化、維持以及卵子發(fā)生，這些作用主要通過核激素受體超家族中的受體(ers)介導[35]。但本研究發(fā)現(xiàn)，通過15 d的低鹽馴化，雌激素核受體基因(erα、erβ)的表達水平在各組間無顯著差異。卵黃蛋白原(VTG)受到雌激素的調控刺激其表達，本研究中vtg的表達水平也無顯著差異。綜上所述，通過15 d的鹽度馴化，對西雜鱘幼魚早期性腺發(fā)育相關基因表達沒有顯著影響，具體的調控機制還需進一步研究。

4 結論

本研究系統(tǒng)地分析了西雜鱘幼魚在低鹽馴化后，鰓、腎、腸Na+-K+-ATP酶活和血清Na+、Cl-含量、抗氧化指標、生化指標、激素水平及性腺發(fā)育相關基因表達水平的變化情況。研究結果表明，為適應低鹽環(huán)境，西雜鱘幼魚鰓Na+-K+-ATP酶在不同程度上參與了滲透壓的調節(jié)，但低鹽馴化對西雜鱘幼魚生理狀態(tài)及早期性腺發(fā)育均無顯著影響。因此，為了促進西雜鱘的健康養(yǎng)殖，還要兼顧其他環(huán)境因素，如溫度、光照、光周期等，適合西雜鱘幼魚的最佳養(yǎng)殖環(huán)境還需進一步研究。