曹雪銘，徐振林*，蘇燕瑜，王 宇，雷紅濤，肖 劍

（1 華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 廣東省食品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 廣州 510642 2 廣州市食品檢驗(yàn)所 廣州 510410）

米酵菌酸（Bongkrekic acid，BA）是唐菖蒲伯克霍爾德菌椰毒致病變種（Burkholderia gladioli pv.Cocovenenans，BGC）分泌的一種毒素，最早于20世紀(jì)30年代被荷蘭學(xué)者M(jìn)ertens 和Vanveen在研究爪哇居民椰子發(fā)酵食物中毒時(shí)發(fā)現(xiàn)[1]。流行病學(xué)研究表明，BGC 極易污染谷類(lèi)制品（發(fā)酵玉米面、糯玉米湯圓、玉米淀粉等）、變質(zhì)銀耳和薯類(lèi)制品（馬鈴薯粉條、甘薯淀粉、山芋淀粉等）等[2]。BA是一種強(qiáng)呼吸毒素，主要靶器官是肝、腦、腎等臟器[3]，一旦中毒會(huì)因呼吸衰竭而死亡[4-6]，其次由于BA 有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性，普通的烹飪方式很難將其去除。有研究表明人體攝入1～1.5 mg 的BA 可能引起生命垂危，而另一項(xiàng)研究則認(rèn)為口服BA 對(duì)人體的半數(shù)致死量為3.16 mg/kg[7]。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，自2014年以來(lái)，我國(guó)由BA 引起的食物中毒事件高達(dá)幾十余起，病死率高達(dá)50%以上[8]。2018年11月廣東省東莞市先、后出現(xiàn)5 例不明原因急性肝衰竭的病例，其中3 例死亡，在疑似變質(zhì)的銀耳和患者血液標(biāo)本中均檢出高濃度BA[9]。2020年7月28日，11 位顧客在廣東省揭陽(yáng)市惠來(lái)縣神泉鎮(zhèn)石頭腸粉店食用河粉后，先、后出現(xiàn)嘔吐、腹瀉等疑似食物中毒癥狀，其中1 人死亡；2020年10月5日黑龍江雞東縣發(fā)生一起因家庭聚餐食用酸湯子引發(fā)的食物中毒事件，9 人食用后全部死亡[10]。為了預(yù)防中毒事件的發(fā)生和應(yīng)對(duì)中毒后的快速治療處理，建立BA 的快速靈敏檢測(cè)方法十分必要。

目前針對(duì)BA 的檢測(cè)方法主要包括高效液相色譜法[11-12]、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜[13-15]、超高效液相色譜[16]、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜[17-18]以及熒光層析法[19]等。這些方法雖然準(zhǔn)確可靠，但是往往操作比較復(fù)雜，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，成本也較高。基于抗原、抗體特異性結(jié)合的免疫分析方法因其快速、靈敏、準(zhǔn)確和高通量等優(yōu)點(diǎn)而深受青睞，特別是膠體金免疫層析法（Colloidal gold immunochromatography，GICA）易操作和低成本的優(yōu)勢(shì)，而被廣泛應(yīng)用于食品安全快速篩查[20-23]。早期，劉秀梅等[24-25]制備了抗BA 的抗體并建立了間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析方法。然而，該方法靈敏度欠佳且尚未在實(shí)際檢測(cè)中應(yīng)用。對(duì)此，本研究開(kāi)展了BA 特異性單克隆抗體的制備與篩選，并建立了GICA 檢測(cè)方法，對(duì)影響GICA 檢測(cè)性能和穩(wěn)定性的條件進(jìn)行系統(tǒng)優(yōu)化，最后用于銀耳、木耳和米粉等實(shí)際樣品的檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

樣品墊、硝酸纖維膜（NC 膜）、吸水墊和聚氯乙烯底板（PVC 底板），上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司；樣品墊處理液、金標(biāo)復(fù)溶液，廣州萬(wàn)聯(lián)生物科技有限公司；氯金酸、檸檬酸三鈉，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；羊抗鼠IgG，北京全式金生物有限公司；米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)品，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；米酵菌酸包被原（BA-BSA）、抗米酵菌酸單克隆抗體（Anti-bongkrekic acid monoclonal antibody，Anti-BA mAb），實(shí)驗(yàn)室自制；銀耳、木耳、米粉，廣州食品檢驗(yàn)所；其余試劑均為分析純級(jí)。

1.2 儀器與設(shè)備

HGS510 劃膜儀、HGS201 裁條機(jī)、GIC-Q 金標(biāo)讀數(shù)儀，杭州峰航科技有限公司；低溫高速離心機(jī)，德國(guó)Eppendorf 公司；MS 漩渦震蕩器，德國(guó)IKA 公司；SKFG-01 烘箱，湖北黃石市恒豐醫(yī)療機(jī)械有限公司；Waters 2695 高效液相色譜儀，美國(guó)Waters 公司。

1.3 方法

1.3.1 Anti-BA mAb 的制備 將BA 通過(guò)活潑酯法與乳鐵蛋白（LF）偶聯(lián)制備免疫抗原，以皮下注射的方式免疫Balb/c 小鼠。選擇免疫原效價(jià)最高的小鼠作為脾細(xì)胞供體，用于雜交瘤的產(chǎn)生。將上述脾細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞融合技術(shù)與SP2/0 鼠骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，然后通過(guò)有限稀釋的方法，將分泌BA 特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞亞克隆5次，并對(duì)最佳的抗體產(chǎn)生克隆進(jìn)行篩選和擴(kuò)增，以獲得高質(zhì)量的抗體。

1.3.2 膠體金的制備 采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金顆粒[21]。準(zhǔn)確稱(chēng)量100.0 mL 屈臣氏水于干凈的圓底燒瓶，置于磁力攪拌油浴鍋中攪拌加熱回流至煮沸，隨后加入4.0 mL 10.0 g/L 的氯金酸溶液，持續(xù)加熱攪拌至再次沸騰后，迅速加入4.6 mL 10.0 g/L 的檸檬酸三鈉溶液，待溶液顏色變成透亮的酒紅色，持續(xù)攪拌10 min 后停止加熱，并利用余熱繼續(xù)攪拌5 min 后冷卻至室溫，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 單克隆抗體-膠體金標(biāo)記物的制備 取1.0 mL 1.3.2 節(jié)制備的膠體金溶液，用0.2 mol/L 碳酸鉀溶液將膠體金溶液調(diào)節(jié)至合適的pH 值，加入一定量的抗體，室溫下振蕩反應(yīng)15 min，再加入40.0 μL 100.0 g/L 的BSA 溶液封閉沒(méi)有結(jié)合抗體的位點(diǎn)，繼續(xù)室溫下振蕩反應(yīng)1 h。4 ℃條件下，10 000 r/min 離心10 min，棄上清，加入1.0 mL 金標(biāo)復(fù)溶液使紅色沉淀物復(fù)溶并混勻，最后將其包被在96 孔的酶標(biāo)板中，包被體積為40 μL，45 ℃過(guò)夜烘干待用。

1.3.4 GICA 方法的建立

1.3.4.1 試紙條的組裝 試紙條是由PVP 底板、樣品墊、NC 膜以及吸水墊組成。首先將BA-BSA和羊抗鼠IgG 用0.2 mol/L 磷酸緩沖液（pH 7.4）稀釋至適合濃度，用劃膜儀噴灑于NC 膜上，分別作為檢測(cè)T 線(xiàn)和質(zhì)控C 線(xiàn)，45 ℃干燥箱中靜置過(guò)夜待用。另外將玻璃纖維素膜（預(yù)先切割成22 mm寬）在樣品墊處理液中浸泡10 min，取出后在45℃下過(guò)夜烘干待用。最后將樣品墊、NC 膜和吸水墊依次粘貼在PVP 板上，用切條機(jī)切割成4 mm寬的試紙條用于后續(xù)試驗(yàn)。

1.3.4.2 檢測(cè)步驟和原理 取100.0 μL 配好的標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品提取液加入金標(biāo)微孔中吹打混勻，反應(yīng)3 min 后，將微孔內(nèi)的所有溶液吸出，加到試紙條的樣品墊上反應(yīng)5 min。如圖1所示，膠體金標(biāo)記的Anti-BA mAb 會(huì)被固定在NC 膜上的BA-BSA 捕捉，形成一條紅色的檢測(cè)線(xiàn)，而過(guò)量的Anti-BA mAb 進(jìn)一步遷移，并被形成對(duì)照的羊抗鼠IgG 抗體捕獲。當(dāng)樣品中有目標(biāo)分析物BA 存在時(shí)，它將與檢測(cè)線(xiàn)上的BA-BSA 競(jìng)爭(zhēng)，并優(yōu)先結(jié)合膠體金標(biāo)記的Anti-BA mAb，檢測(cè)線(xiàn)從而表現(xiàn)為不顯色。通過(guò)讀數(shù)儀測(cè)定，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，可對(duì)樣品中BA 含量進(jìn)行測(cè)定。

圖1 GICA 檢測(cè)示意圖Fig.1 Schematic diagram of GICA

1.3.5 GICA 檢測(cè)條件的優(yōu)化 為了實(shí)現(xiàn)最佳的檢測(cè)靈敏度、穩(wěn)定性和良好的色彩強(qiáng)度，探究了幾個(gè)重要參數(shù)的優(yōu)化，包括標(biāo)記體系pH 值、標(biāo)記抗體質(zhì)量濃度、T、C 線(xiàn)質(zhì)量濃度、樣品墊處理液以及樣品前處理方法。為了準(zhǔn)確地說(shuō)明優(yōu)化過(guò)程，篩選出最佳抑制率條件，應(yīng)用讀數(shù)儀對(duì)檢測(cè)線(xiàn)進(jìn)行掃描，可得到T 線(xiàn)和C 線(xiàn)的信號(hào)值。抑制率按以下公式計(jì)算，BX為陽(yáng)性樣品T 線(xiàn)和C 線(xiàn)信號(hào)強(qiáng)度比值，B0為陰性樣品T 線(xiàn)和C 線(xiàn)信號(hào)強(qiáng)度比值。

1.3.6 試紙條的性能評(píng)價(jià)

1.3.6.1 靈敏度 GICA 方法不僅可以定性檢測(cè)目標(biāo)分析物，還可以利用讀卡儀定量檢測(cè)。定性檢測(cè)時(shí)，試紙條的檢出限定義為裸眼消線(xiàn)值，即引起檢測(cè)線(xiàn)顏色消失的最低分析物濃度[26]。使用0.01 mol/L PB 溶液配制系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液（0.00，0.25，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，8.00，16.00，32.00，64.00 μg/kg），定量分析時(shí)，以檢測(cè)樣本與陰性樣本的檢測(cè)線(xiàn)信號(hào)值的比值（B/B0）為縱坐標(biāo)，以BA 含量或含量的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)繪制散點(diǎn)圖，用Origin 8.0擬合后得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程。根據(jù)線(xiàn)性曲線(xiàn)方程可計(jì)算出GICA 方法的半抑制濃度（IC50）（用于評(píng)估試紙條靈敏度）和檢出限（LOO），同時(shí)通過(guò)相關(guān)數(shù)（R2）判斷線(xiàn)性回歸方程的擬合優(yōu)度。

1.3.6.2 特異性 將食品中常檢的其它毒素：毒黃素（TF）、嘔吐毒素、T-2 毒素（T-2）、伏馬毒素（FB）、赭曲霉毒素（OTA）、黃曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉酮（ZEN）用0.01 mol/L 的PB 緩沖液稀釋后用試紙條進(jìn)行檢測(cè)，判斷試紙條的特異性。

1.3.6.3 實(shí)際樣品檢測(cè) 首先對(duì)陰性銀耳、木耳及米粉進(jìn)行米酵菌酸添加回收試驗(yàn)。選擇3 個(gè)不同含量（2.0，10.0，50.0 μg/kg）的樣品用本試驗(yàn)所優(yōu)化的樣品前處理方法和GICA 測(cè)定。其次是盲樣檢測(cè)。參考曾雪芳等[17]使用LC-MS/MS 方法進(jìn)行檢測(cè)，最后將結(jié)果與GICA 方法檢測(cè)結(jié)果比較，以其驗(yàn)證GICA 方法的準(zhǔn)確度。

2 結(jié)果與討論

2.1 抗BA 單克隆抗體性能鑒定

本研究通過(guò)細(xì)胞融合和有限稀釋篩選獲得了一株分泌特異性識(shí)別BA 的單克隆抗體的細(xì)胞株，命名為C3。該抗體亞型為IgG1（圖2a）。將該細(xì)胞株注射小鼠腹腔制備腹水，并經(jīng)親和柱純化獲得單克隆抗體，經(jīng)凝膠電泳鑒定，抗體純度良好（圖2b）。

圖2 抗米酵菌酸單克隆抗體的性能鑒定Fig.2 Performance evaluation of the Anti-BA mAb

2.2 膠體金免疫層析條件優(yōu)化

2.2.1 標(biāo)記pH 值和抗體標(biāo)記體積的優(yōu)化 膠體金溶液pH 值會(huì)影響抗體與標(biāo)記物的結(jié)合效率以及抗體活性[27-28]。膠體金溶液pH 值一般是通過(guò)控制標(biāo)記過(guò)程中K2CO3溶液的體積來(lái)調(diào)節(jié)。如圖3a所示，探究0.2 mol/L K2CO3溶液的體積（5，10，15，20，25 μL）對(duì)膠體金性能的影響。當(dāng)K2CO3用量從5.0 μL 增加為10.0 μL 時(shí)，試紙條T、C 線(xiàn)的顏色明顯變深；而隨著K2CO3體積的增加，試紙條T 線(xiàn)顏色逐漸變淺且T/C 比值無(wú)明顯變化。綜上，K2CO3的體積為10.0 μL 時(shí)，該試紙條的靈敏度和顯色情況表現(xiàn)為最佳。

抗體標(biāo)記體積是影響膠體金試紙條檢測(cè)效果的關(guān)鍵性因素，適量的抗體標(biāo)記體積有利于膠體金-抗體結(jié)合物的穩(wěn)定性，而標(biāo)記過(guò)量可能導(dǎo)致靈敏度下降[29-30]。在最適標(biāo)記pH 值條件下，比較不同抗體標(biāo)記體積對(duì)試紙條檢測(cè)效果的影響。結(jié)果顯示，在1 mL 膠體金溶液中，當(dāng)標(biāo)記的抗體濃度較低時(shí)陰性T 線(xiàn)顯色不明顯，當(dāng)標(biāo)記體積分別為4.0 μL 和5.0 μL 時(shí)（對(duì)應(yīng)抗體標(biāo)記量為16.0 μg和20.0 μg），試紙條的T、C 線(xiàn)顯色明顯。標(biāo)記過(guò)程中添加抗體的體積為4.0 μL 可達(dá)到檢測(cè)要求且在后期實(shí)驗(yàn)中抑制率較好，因此選擇4.0 μL 作為最佳抗體標(biāo)記體積（圖3b）。

圖3 不同反應(yīng)條件對(duì)GICA 性能的影響Fig.3 Effects of different reaction conditions on GICA performance

2.2.2 T 線(xiàn)（抗原）和C 線(xiàn)（二抗）包被質(zhì)量濃度優(yōu)化 為了使試紙條的靈敏度和顯色達(dá)到最佳效果，對(duì)T 線(xiàn)和C 線(xiàn)的包被質(zhì)量濃度進(jìn)行優(yōu)化。從圖3c 可以看出，隨著抗原質(zhì)量濃度的增加，裸眼觀(guān)察時(shí)試紙條的T 線(xiàn)顏色逐漸變深；使用讀數(shù)儀測(cè)定時(shí)，試紙條的T/C值雖不斷增大，但抑制率卻呈現(xiàn)先上升后逐漸下降的趨勢(shì)。當(dāng)包被質(zhì)量濃度為0.50 mg/mL 時(shí)試紙條的T/C值更接近1.0 且抑制率較高，故選擇0.50 mg/mL 作為最佳T 線(xiàn)包被質(zhì)量濃度。

在最佳T 線(xiàn)包被質(zhì)量濃度下，對(duì)C 線(xiàn)包被質(zhì)量濃度進(jìn)行優(yōu)化，隨著二抗質(zhì)量濃度的增加，裸眼觀(guān)察時(shí)，試紙條C 線(xiàn)的顏色不斷加深，；使用讀數(shù)儀測(cè)定時(shí)，雖然包被質(zhì)量濃度為0.06 mg/mL 和0.08 mg/mL 時(shí)試紙條的抑制率無(wú)明顯區(qū)別，但包被質(zhì)量濃度為0.06 mg/mL 條件下試紙條T、C 線(xiàn)顯色較明顯，故選擇0.06 mg/mL 為最佳C 線(xiàn)包被質(zhì)量濃度（圖3d）。

2.2.3 樣品墊緩沖液中離子濃度和吐溫-20 質(zhì)量濃度優(yōu)化 樣品墊的緩沖體系不僅影響抗原、抗體在NC 膜上的結(jié)合，還對(duì)樣品待測(cè)液起到一定的緩沖作用[31]。樣品墊中緩沖液離子濃度和表面活性劑對(duì)試紙條檢測(cè)性能的影響。如圖4a所示，當(dāng)離子濃度為0.5 mol/L（PB 緩沖液）時(shí)，抗原抗體的結(jié)合受到較大影響，試紙條顯色不明顯。隨著緩沖液離子濃度降低，試紙條的顯色逐漸增強(qiáng)，當(dāng)離子濃度為0.2 mol/L 時(shí)，試紙條陰性T/C值比0.01 mol/L 更接近1.0，且顯色明顯。因此樣品墊緩沖體系中最佳離子濃度為0.2 mol/L。

在最優(yōu)離子濃度條件下，對(duì)表面活性劑吐溫-20 的質(zhì)量濃度進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，在同一檢測(cè)條件下，不添加吐溫-20 的試紙條顯色很淡，隨著吐溫-20 添加量的增大，試紙條顯色逐漸加深；使用讀數(shù)儀測(cè)定時(shí)，吐溫-20 質(zhì)量濃度為5.0 mg/mL時(shí)試紙條的陰性T/C值為1.1，抑制率為93.6%，相比更高添加量的吐溫-20，該添加量的抑制效果已經(jīng)達(dá)到最大（圖4b），體系中選擇吐溫-20 添加質(zhì)量濃度為5.0 mg/mL。

圖4 工作緩沖液和不同提取劑對(duì)GICA 性能的影響Fig.4 Effects of buffer solution and sample extractant on GICA performance

2.3 樣品前處理提取溶劑的優(yōu)化

銀耳、木耳和米粉3 種樣品經(jīng)粉碎后，分別使用0.01 mol/L 的PB 緩沖液、乙腈和乙酸乙酯進(jìn)行提取。PB 緩沖液直接提取的樣品液基質(zhì)干擾大，無(wú)法提取樣品中的米酵菌酸。采用有機(jī)溶劑提取后吹干復(fù)溶進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)乙腈提取銀耳和木耳樣品有干擾，陰性樣品出現(xiàn)假陽(yáng)性（T/C值<1.0），且5.0 μg/kg 加標(biāo)樣品回收率均低于50%；相比之下，乙酸乙酯提取效果較好，基質(zhì)干擾小，加標(biāo)樣品回收率均高于80%（圖4c）。因此，選擇乙酸乙酯最為提取溶劑。

2.4 試紙條性能評(píng)價(jià)

2.4.1 靈敏度 在上述的優(yōu)化條件下進(jìn)行試驗(yàn)。在0～64.0 μg/kg 的BA 含量范圍內(nèi)，根據(jù)檢測(cè)BA含量和試紙條檢測(cè)結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。當(dāng)BA 含量達(dá)到16.0 μg/kg 時(shí)，膠體金試紙條檢測(cè)線(xiàn)條帶完全消失，因此該試紙條檢測(cè)BA 的裸眼消線(xiàn)值為16.0 μg/kg（圖5a）。通過(guò)擬合結(jié)果，本研究所建立的方法檢出限為（LOD）1.2 μg/kg，IC50為3.6 μg/kg，其中在1.8～7.2 μg/kg 的BA 含量范圍內(nèi)，所建立的GICA 方法對(duì)BA 檢測(cè)有良好的線(xiàn)性關(guān)系，其線(xiàn)性回歸方程為Y=0.93-0.13X（R2=0.995）（圖5b）。

2.4.2 實(shí)際樣品檢測(cè) 選擇銀耳、木耳和米粉3種樣品進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，BA 添加量為2.0，10.0 μg/kg 和50.0 μg/kg，每個(gè)添加量設(shè)3 個(gè)重復(fù)。采用上述樣品前處理后進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如表1所示。3個(gè)樣品中BA 的添加回收率在80.2%～101.2%之間，RSD<6.4%。在盲樣檢測(cè)中，首先采用優(yōu)化后的LC-MS/MS 色譜條件和質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行測(cè)定，BA 的多反應(yīng)檢測(cè)（MRM）色譜圖如圖5c所示，峰型對(duì)稱(chēng)，分離效果好，響應(yīng)靈敏度高，重現(xiàn)性好；最后對(duì)GICA 方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。如圖5d所示，兩種方法具有很好的相關(guān)性（R2=0.988），說(shuō)明本研究所建立的免疫層析檢測(cè)方法具有良好的準(zhǔn)確性。最后對(duì)比了文獻(xiàn)中關(guān)于BA 的檢測(cè)方法，本研究建立的免疫層析法不僅靈敏度高，而且操作簡(jiǎn)便、成本低，能滿(mǎn)足市場(chǎng)的大批量篩查（表2）。

表1 樣品添加回收檢測(cè)結(jié)果（n=3）Table 1 Recoveries of spiked samples（n=3）

表2 檢測(cè)米酵菌酸方法對(duì)比結(jié)果Table 2 Comparison of the analytical methods for BA

2.4.3 特異性 選取另外幾種常見(jiàn)的毒素如TF、嘔吐毒素、T-2、FB1、OTA、AFB1 和ZEN 進(jìn)行特異性試驗(yàn)。如圖5e所示，GICA 對(duì)低添加量BA（16.0 μg/kg）顯示強(qiáng)陽(yáng)性，而對(duì)7 種常見(jiàn)毒素在高含量下（1.0 μg/g）均為陰性，表明該方法的特異性強(qiáng)，與常見(jiàn)的毒素?zé)o交叉反應(yīng)。

圖5 GICA 性能評(píng)價(jià)Fig.5 Performance evaluation of the GICA

2.4.4 試紙條穩(wěn)定性 為了驗(yàn)證試紙條的穩(wěn)定性，參考Liu 等[32]的方法，在45 ℃下進(jìn)行加速穩(wěn)定性試驗(yàn)。圖5f 記錄不同時(shí)間段試紙條的T/C值和抑制率。結(jié)果表明，加速試驗(yàn)7，14 d 和28 d 后，試紙條的陰性顯色和陽(yáng)性抑制均保持良好的穩(wěn)定性。

3 結(jié)論

本文首次建立了基于單克隆抗體快速檢測(cè)BA 的膠體金免疫層析方法。該方法可以實(shí)現(xiàn)對(duì)食品中BA 含量的快速定量檢測(cè)，檢出限為1.2 μg/kg，線(xiàn)性范圍為1.8～7.2 μg/kg；也可以進(jìn)行定性檢測(cè)，裸眼消線(xiàn)值為16.0 μg/kg。該方法特異性良好，與常見(jiàn)的其它毒素?zé)o交叉反應(yīng)，且穩(wěn)定性好，有較長(zhǎng)的貨架期。對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，結(jié)果表明樣品添加回收率在80.2%～101.2%之間，RSD<6.4%，且結(jié)果與LC-MS/MS 吻合度高，表明本研究建立的方法準(zhǔn)確、靈敏、可靠，且檢測(cè)時(shí)間短?？傊狙芯拷⒌目焖贆z測(cè)方法非常適用于食品中BA 的現(xiàn)場(chǎng)快速篩查，可以作為風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)和預(yù)警手段用于實(shí)際監(jiān)管中。