張羽

（遼陽市中心醫(yī)院 病理科，遼寧 遼陽 111000）

胃腸道腫瘤是目前國內(nèi)外發(fā)病率和病死率均較高的惡性腫瘤之一，且患者通常對(duì)于放化療并不敏感，多需通過手術(shù)治療[1]。早期臨床診斷對(duì)于治療方案確定和預(yù)后改善具有重要意義。胃腸纖維鏡和胃腸道造影等傳統(tǒng)胃腸道疾病診斷法雖然是臨床疾病診斷中常用的輔助診斷技術(shù)，但其仍屬于侵入性操作，患者耐受性差，且存在一定誤診和漏診現(xiàn)象[2-3]。超聲診斷屬于無創(chuàng)性輔助診斷方法，在胃腸道疾病的定位診斷中準(zhǔn)確性良好，但在病理分型和分期等定性診斷中仍存在一定缺陷[4]。近年來，隨著各類腫瘤發(fā)病率的升高，病理診斷工作逐漸引起了人們的重視。免疫組化病理診斷屬于一種經(jīng)典病理診斷技術(shù)，該方法在病理診斷中的應(yīng)用效果已經(jīng)得到了明確證實(shí)[5]。研究表明，質(zhì)量控制方式的不同，容易影響病理診斷的效率及可靠性[6]。質(zhì)量管理控制以提高質(zhì)量為目標(biāo)，為驗(yàn)證該方法的價(jià)值，本研究主要針對(duì)103例胃腸道腫瘤患者進(jìn)行如下分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年8月至2019年10月在遼陽市中心醫(yī)院病理科接受病理檢查的103例胃腸道腫瘤患者為研究對(duì)象。按照隨機(jī)硬幣拋擲法將納入者分為對(duì)照組（51例）和控制組（52例）。對(duì)照組男28例，女23例；年齡22～71歲，平均（45.08±11.11）歲；病灶位置：胃竇部位30例，胃體5例，賁門部位5例，回盲處7例，乙狀結(jié)腸2例，全胃浸潤2例；病理分型：未分化癌變23例，惡性淋巴瘤17例，腫瘤來源未確定11例。控制組男29例，女23例；年齡30～74歲，平均（45.69±11.02）歲；病灶位置：胃竇部位28例，胃體8例，賁門部位5例，回盲處5例，乙狀結(jié)腸4例，全胃浸潤2例；病理分型：未分化癌變26例，惡性淋巴瘤15例，腫瘤來源未確定11例。兩組納入者上述人口學(xué)和疾病相關(guān)資料分布間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn) 納入者經(jīng)臨床診斷和病理學(xué)檢查確診；臨床資料完整；明確研究相關(guān)內(nèi)容和目的，同意簽署協(xié)議書；同時(shí)排除合并全身感染性疾病或免疫系統(tǒng)或血液系統(tǒng)疾病，依從性差，無法獲取病病理組織者。本研究已獲得我院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.3 方法 對(duì)照組實(shí)施常規(guī)HE染色管理：①制備腫瘤標(biāo)本。參照胃腸道腫瘤患者的影像學(xué)檢查結(jié)果，于胃腸道腫瘤患者胸腹部適宜位置作一切口，切除腫瘤組織，以備后續(xù)病理檢查。②固定。將胃腸道腫瘤組織標(biāo)本置于冰箱內(nèi)低溫儲(chǔ)存。進(jìn)行病理診斷時(shí)，取出腫瘤組織標(biāo)本，將其完全浸潤于10%濃度的中性甲醛溶液中，持續(xù)固定4 h。③脫水。分別將固定后的腫瘤組織標(biāo)本浸潤于AF液、75%濃度乙醇溶液、80%濃度乙醇溶液及90%濃度乙醇溶液、95%濃度乙醇溶液、100%無水乙醇溶液中進(jìn)行脫水處理。每個(gè)脫水環(huán)節(jié)的脫水時(shí)間控制為1 h。④染色。將脫水后的腫瘤組織標(biāo)本分別浸潤于二甲苯（Ⅰ）、二甲苯（Ⅱ）溶液中，分別浸泡20 min、30 min。隨后于60 ℃條件下，以醋缸（Ⅰ）、醋缸（Ⅱ）分別進(jìn)行浸泡（浸泡時(shí)間為1 h）。經(jīng)上述處理后，將染色后的腫瘤標(biāo)本置于60 ℃烤箱內(nèi)，持續(xù)烤片2 h。

控制組實(shí)施免疫組化質(zhì)量控制管理：①制備腫瘤標(biāo)本。按照對(duì)照組方法，制備腫瘤標(biāo)本。②固定。將腫瘤組織浸潤于足量10%濃度中性福爾馬林溶液中，持續(xù)固定8～12 h。③脫水、浸蠟。常規(guī)采用不同濃度乙醇進(jìn)行脫水處理，組織脫水后，浸蠟，并進(jìn)行石蠟包埋。④切片。選用LeicaRM2235型號(hào)切片機(jī)，參照4 μm厚度標(biāo)準(zhǔn)針對(duì)組織塊進(jìn)行連續(xù)切片處理。⑤脫蠟。采用適量二甲苯（Ⅰ）中持續(xù)脫蠟5 min；取適量二甲苯（Ⅱ）中持續(xù)脫蠟5min；浸潤于無水乙醇（100%）溶液內(nèi)水洗2 min；改用95%濃度乙醇持續(xù)水洗1 min；采用80%濃度乙醇水洗1 min；選用75%濃度乙醇水洗1 min；最后將經(jīng)處理的組織塊浸潤于足量蒸餾水內(nèi)，持續(xù)水洗2 min（每環(huán)節(jié)各2次，以確保水分充分吸干）。⑥染色。分別經(jīng)雙氧水、檸檬酸緩沖液處理切片。加熱后，向量杯內(nèi)切片滴加一抗，于40 ℃溫度下進(jìn)行孵育。經(jīng)磷酸鹽緩沖液再次處理后，于室溫下滴加二抗并孵育15 min。利用蘇木素針對(duì)切片進(jìn)行染色處理，染色后以清水沖洗表面的殘留蘇木素。吸干水分后，利用鹽酸乙醇進(jìn)行分化處理（0.5 min）。將染色后的切片置于50 ℃溫水中浸泡5 min后取出吸干表面水分。隨后將切片置于伊紅液內(nèi)留置2 min。最后經(jīng)常規(guī)脫水處理后［流程為：95%乙醇（Ⅰ）中脫水1 min、95%乙醇（Ⅱ）中脫水1 min、100%乙醇（Ⅰ）中脫水1 min、100%乙醇脫水1 min、二甲苯石碳酸處理1 min、二甲苯Ⅰ處理1 min、二甲苯（Ⅱ）中處理1 min］，以中性樹脂進(jìn)行封片。

1.4 評(píng)價(jià)方法 切片質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：切片質(zhì)量良好：細(xì)胞核漿對(duì)比鮮明，色彩鮮亮，染色均勻，厚薄適宜；切片質(zhì)量合格：色彩較為清晰，可區(qū)別核漿，無氣泡，可有少數(shù)褶皺；切片質(zhì)量不合格：染色濃厚，核漿對(duì)比不明顯，存在較多氣泡或褶皺[7]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 以SPSS21.0軟件統(tǒng)計(jì)。計(jì)數(shù)資料以[n（%）]描述，組間比較選擇χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料描述用（），組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組標(biāo)本質(zhì)量合格情況比較 控制組的標(biāo)本質(zhì)量總體合格率（96.15%）顯著高于對(duì)照組（82.35%）（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組標(biāo)本質(zhì)量的合格率比較[n（%）]

2.2 兩組病理診斷效率比較 控制組的病理診斷耗時(shí)明顯短于對(duì)照組［（12.06±2.30）hvs.（17.42±3.18）h］，差異顯著（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組病理診斷效率的比較（h，）

表2 兩組病理診斷效率的比較（h，）

3 討論

病理診斷是一類重要的診斷技術(shù)，這種診斷方法的基本原理為：采集患者的病理組織制成標(biāo)本，經(jīng)標(biāo)本染色處理后，置于顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、大小等狀況，獲得較為可靠的診斷結(jié)果[8]。根據(jù)既往病理診斷經(jīng)驗(yàn)，在診斷過程中，標(biāo)本處理方法及質(zhì)量控制方式的選擇，均會(huì)影響診斷工作效率及準(zhǔn)確性[9]。

常規(guī)HE染色管理與免疫組化質(zhì)量控制管理是目前臨床診斷工作常用的兩種診斷方法。常規(guī)HE染色管理方法的特征為：采用HE染色法針對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行染色，同時(shí)按照常規(guī)管理模式，確保病理診斷工作的順利完成[10-11]。常規(guī)HE染色在乳腺癌[12]、胃癌[13]等腫瘤中的診斷價(jià)值，已經(jīng)得到了明確證實(shí)。而免疫組化質(zhì)量控制管理方法是將免疫組化病理檢查作為中心，利用質(zhì)量控制管理模式提供良好的輔助作用，以保障免疫組化病理檢查價(jià)值的充分發(fā)揮。特征為：采集腫瘤組織標(biāo)本后，按照固定、脫水等流程將其制成組織塊，切片后，利用免疫組化技術(shù)進(jìn)行處理，最后以蘇木素針對(duì)處理后的組織切片進(jìn)行染色[14]。在病理診斷中，免疫組化質(zhì)量控制管理方法的應(yīng)用，可充分保障切片處理質(zhì)量[15]。

隨著免疫組化病理檢查方法的普及，免疫組化病理檢查期間的質(zhì)量控制管理工作逐漸成為人們的重點(diǎn)。應(yīng)用優(yōu)勢(shì)在于：①確保切片質(zhì)量。切片質(zhì)量是影響病理診斷方法價(jià)值的主要因素。以常規(guī)HE染色法處理病理組織標(biāo)本，并運(yùn)用常規(guī)管理模式進(jìn)行管理，所得切片質(zhì)量尚可。但部分病理組織切片容易出現(xiàn)質(zhì)量問題，原因在于[16]：①常規(guī)管理模式未對(duì)診斷過程中的固定時(shí)間、烤片操作等做強(qiáng)制要求，導(dǎo)致病理診斷中容易出現(xiàn)固定時(shí)間不足（影響固定效果）、烤片效果不佳等問題，進(jìn)而影響切片質(zhì)量。而引入免疫組化質(zhì)量控制管理方法后，質(zhì)量控制管理模式則可為免疫組化病理檢查提供良好的配合，即嚴(yán)格按照福爾馬林固定（8～10 h）、脫蠟（以二甲苯及不同濃度乙醇進(jìn)行處理）、染色處理流程，制備切片。這一方法的良好質(zhì)控作用，可充分保障切片質(zhì)量。本研究證實(shí)：控制組標(biāo)本質(zhì)量總合格率96.15%，高于對(duì)照組（P＜0.05）。②提高診斷效率。相對(duì)于影像學(xué)檢查技術(shù)而言，病理診斷的耗時(shí)較長。采用常規(guī)HE染色管理方法處理腫瘤組織標(biāo)本，容易受固定時(shí)間不足、染色不充分、染色背景濃厚等，而影響切片質(zhì)量，進(jìn)而影響病理診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。當(dāng)利用常規(guī)HE染色管理法制備的切片置于顯微鏡下觀察時(shí)，可能因切片質(zhì)量不佳，而需要重新制備切片。這一操作也會(huì)導(dǎo)致診斷耗時(shí)過長，從而影響病理診斷工作的效率。選用免疫組化質(zhì)量控制管理方法進(jìn)行診斷時(shí)，質(zhì)量控制管理標(biāo)準(zhǔn)對(duì)免疫組化病理檢查各環(huán)節(jié)的操作標(biāo)準(zhǔn)及時(shí)長均提出了明確的要求，按照上述要求規(guī)范開展免疫組化檢查，可確保病理檢查工作的順利完成，由此可認(rèn)為，該方法在提升病理診斷效率方面具有一定優(yōu)勢(shì)。本研究證實(shí)：控制組病理診斷耗時(shí)短于對(duì)照組（P＜0.05）。

在運(yùn)用免疫組化病理技術(shù)進(jìn)行診斷時(shí)，需注意合理把控質(zhì)量控制管理要點(diǎn)，具體如下：①病理組織的制備及處理。這是免疫組化病理診斷的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)，也是影響診斷工作效率及最終診斷結(jié)果的關(guān)鍵所在[7]。為保障病理組織的處理質(zhì)量，需結(jié)合術(shù)前影像學(xué)檢查結(jié)果，合理選擇切口，并切除適宜大小的病理組織，制備病理組織標(biāo)本。此外，根據(jù)既往病理檢查經(jīng)驗(yàn)，病理檢查以病理組織中的細(xì)胞為觀察重點(diǎn)，如未能合理儲(chǔ)存病理標(biāo)本或及時(shí)送檢，組織細(xì)胞的形態(tài)學(xué)可能會(huì)出現(xiàn)一定變化，進(jìn)而影響診斷結(jié)果的可靠性。對(duì)此，在運(yùn)用質(zhì)量控制管理方法進(jìn)行干預(yù)時(shí)，應(yīng)注意將采集的病理組織標(biāo)本置于冰箱內(nèi)儲(chǔ)存，避免污染，并盡量于采集標(biāo)本后較短時(shí)間內(nèi)送檢，以減少因病理組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變引發(fā)的不良和后果[17]。②標(biāo)本固定處理。新鮮組織標(biāo)本的細(xì)胞中含有大量水解酶，隨著新鮮組織標(biāo)本留置時(shí)間的延長，組織中的細(xì)胞逐漸處于缺氧狀態(tài)，此時(shí)，內(nèi)部的水解酶會(huì)發(fā)揮水解作用，誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)分解，造成組織自溶[18]。為了避免出現(xiàn)上述狀況，在質(zhì)量控制管理工作中，病理組織標(biāo)本制備完成后，需盡快將其浸潤于中性固定液中，以抑制細(xì)胞缺氧、水解酶帶來的不良影響。③合理把控染色效果。免疫組化病理檢查多采用蘇木素進(jìn)行染色[19]。在染色處理中，需注意把控染色效果，確定切片染色成功后，方可進(jìn)行后續(xù)操作。

為了充分發(fā)揮免疫組化病理技術(shù)的價(jià)值，保障病理診斷質(zhì)量，在后續(xù)質(zhì)量控制管理工作中，應(yīng)將以下幾種技術(shù)應(yīng)用于實(shí)踐管理工作中：①試劑管理。免疫組化病理檢查中需要的試劑類型較多，如中性福爾馬林溶液、二甲苯溶液、乙醇溶液等。當(dāng)相關(guān)試劑出現(xiàn)質(zhì)量問題，可能會(huì)影響免疫組化病理檢查工作的效率，甚至影響診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性[20]。為保障免疫組化病理檢查結(jié)果的可靠性，需定期檢查各類試劑質(zhì)量，及時(shí)更換新試劑（避免使用過期試劑）。在檢查試劑時(shí)，重點(diǎn)檢查試劑保存狀況，判斷有無揮發(fā)、滲漏問題，以防因試劑濃度改變而影響病理診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。②脫水、脫蠟操作質(zhì)量把控。脫水環(huán)節(jié)與脫蠟環(huán)節(jié)類似，均需經(jīng)不同濃度乙醇處理標(biāo)本。在針對(duì)切片進(jìn)行脫水、脫蠟處理時(shí)，需注意嚴(yán)格參照不同乙醇濃度的排列順序，依次對(duì)切片進(jìn)行脫水處理、脫蠟處理，以減少切片中的水分殘留，保障標(biāo)本的脫蠟效果。③切片不合格原因分析。相對(duì)于常規(guī)HE染色而言，免疫組化病理檢查與質(zhì)量控制管理方法聯(lián)用，在提升切片質(zhì)量方面具有一定優(yōu)勢(shì)。但在實(shí)踐病理診斷工作中，仍有部分切片會(huì)出現(xiàn)質(zhì)量不合格問題。為了避免由切片質(zhì)量不合格引發(fā)的不必要耗時(shí)，需結(jié)合免疫組化病理診斷經(jīng)驗(yàn)，從多個(gè)方面，綜合分析切片質(zhì)量不合格的原因，以便根據(jù)切片質(zhì)量不合格的原因，重新優(yōu)化質(zhì)量控制管理方案，以保障切片質(zhì)量。④診斷結(jié)果管理。在重視切片質(zhì)量的基礎(chǔ)上，統(tǒng)計(jì)免疫組化病理診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性，將誤診、漏診的切片作為重點(diǎn)，分析診斷結(jié)果與切片質(zhì)量、免疫組化病理診斷流程之間的關(guān)聯(lián)，明確誤診、漏診的原因。如確定漏診、誤診與檢驗(yàn)過程有關(guān)，需結(jié)合相關(guān)原因，進(jìn)一步優(yōu)化質(zhì)量控制管理方案，以提升免疫組化病理診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜上所述，在胃腸道腫瘤免疫組化病理診斷中，宜推行免疫組化質(zhì)量控制管理，以保障標(biāo)本質(zhì)量，減少重新制片的發(fā)生，提升病理診斷工作的效率，為疾病及早治療和預(yù)后改善提供更為及時(shí)準(zhǔn)確的依據(jù)。