羅蘭，李璐，金沐

首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院麻醉科，北京市 100050

0 引言

脊髓缺血再灌注損傷(spinal cord ischemia/reperfusion injury,SCIRI)是主動(dòng)脈夾層或動(dòng)脈瘤手術(shù)術(shù)后的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，嚴(yán)重者可導(dǎo)致高達(dá)7.6%的患者發(fā)展成永久性截癱[1]。因此，大血管手術(shù)中的脊髓保護(hù)一直是醫(yī)學(xué)研究和關(guān)注的重點(diǎn)，但目前尚無確切有效的治療措施[2]。氙氣(xenon,Xe)是一種自然界稀有惰性氣體，氙氣對(duì)離體培養(yǎng)的細(xì)胞損傷模型和神經(jīng)系統(tǒng)缺血/再灌注損傷具有保護(hù)作用[3-4]，并且目前已證實(shí)氙氣后處理能減輕SCIRI，對(duì)脊髓具有保護(hù)作用[5-10]，但具體作用機(jī)制尚不清楚。Liu 等[10]報(bào)道氙氣后處理通過激活再灌注損傷補(bǔ)救激酶通路的蘇氨酸蛋白激酶(protein kinase B,Akt)和細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)，從而減少SCIRI 后神經(jīng)細(xì)胞凋亡。

Akt 信號(hào)通路在維持細(xì)胞存活、促進(jìn)細(xì)胞生長、調(diào)控自噬以及抑制凋亡等機(jī)制中具有重要作用[11-12]。既往研究報(bào)道，再灌注損傷后Akt 通路的激活能進(jìn)一步影響自噬水平[13]。自噬是一種高度保守的細(xì)胞內(nèi)成分降解過程，在維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能穩(wěn)定中具有重要作用。自噬參與缺血再灌注損傷的病理生理過程，適度自噬會(huì)保護(hù)細(xì)胞，防止代謝應(yīng)激和氧化損傷，但自噬過度可能導(dǎo)致代謝應(yīng)激、細(xì)胞成分降解，甚至細(xì)胞死亡[14]。近年來研究顯示，自噬在脊髓損傷后早期顯著激活，且自噬水平也隨損傷時(shí)間的推移而變化[15-16]。

本研究擬探究氙氣后處理對(duì)大鼠SCIRI 后自噬水平的影響及其與Akt信號(hào)通路之間存在的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

7～8 周齡SPF 級(jí)健康雄性Sprague-Dawley 大鼠30只，飼養(yǎng)于首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，體質(zhì)量250～300 g。實(shí)驗(yàn)大鼠置于清潔鼠籠中單獨(dú)喂養(yǎng)，房間溫度(22±3) ℃，光照/黑暗周期為12 h，給予充足飼料，自由飲水。

采用隨機(jī)數(shù)字表法均分為假手術(shù)組(Sham 組)，SCIRI 組(I/R 組)，SCIRI+氙氣后處理組(Xe 組)，每組10只。

本研究通過首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與福利委員會(huì)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用評(píng)審(No.20-1014)。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑與儀器

4%多聚甲醛(批號(hào)G1101)：武漢塞維爾生物科技有限公司。1%硫堇染色液(批號(hào)G190)：北京索萊寶生物科技有限公司。裂解液(批號(hào)78051)、BCA 蛋白濃度測定試劑盒(批號(hào)SK260290)：美國THERMO 公司。蛋白酶抑制劑(批號(hào)20124ES03)、磷酸酶抑制劑(批號(hào)20109ES05)、SYBR Green Master Mix(批號(hào)11184ES08)、DEPC(批號(hào)10601ES76)：上海翊圣生物科技有限公司。Akt 抗體(批號(hào)4691T)、p-Akt 抗體(批號(hào)9271T)：美國CST 公司。p62 抗體(批號(hào)ab109012)、Beclin 1 抗體(批號(hào)ab207612)、微管相關(guān)蛋白1 輕鏈3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3) Ⅱ抗體(批號(hào)ab192890)、β-actin 抗體(批號(hào)ab8226)：美國ABCAM 公司。山羊抗兔二抗(批號(hào)E030120)、山羊抗小鼠二抗(批號(hào)E030110)：美國EARTHOX 公司。PVDF 膜(批號(hào)IPVH00010)、化學(xué)顯影液(批號(hào)WBKLS0050)：德國默克公司。TRIzol reagent(批號(hào)T9424)：美國SIGMA 公司。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(批號(hào)RR037A)：日本TAKARA公司。

ALC-VB-SLA 型小動(dòng)物呼吸機(jī)：上海奧爾科特生物科技有限公司。SpectraMax M3 酶標(biāo)儀：美國MOLECULAR DEVICES公司。DMI3000 B正置熒光顯微鏡：德國LEICA 公司。BioSpec-nono 紫外分光光度計(jì)：日本津島公司。7500PCR 儀：美國ABI 公司。電泳儀、ChemiDocTMXRS+凝膠成像系統(tǒng)：美國BIORAD公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1造模與后處理

通過阻斷腹主動(dòng)脈血流建立大鼠SCIRI 模型[5]。按大鼠體質(zhì)量腹腔注射戊巴比妥鈉30 mg/kg 麻醉，將大鼠仰臥位固定，經(jīng)口氣管插管并固定，吸入空氣，控制呼吸。呼吸機(jī)參數(shù)：呼吸頻率70～130次/min，潮氣量15 mL/kg，吸呼比1∶1。腹部備皮后消毒，然后沿腹正中線剖開腹腔，暴露出腹主動(dòng)脈，并分離出雙側(cè)腎動(dòng)脈、雙側(cè)髂動(dòng)脈及連接處腹主動(dòng)脈，使用無創(chuàng)動(dòng)脈夾阻斷雙側(cè)腎動(dòng)脈之間及左右髂動(dòng)脈分叉處的腹主動(dòng)脈，阻斷血流85 min 后松開動(dòng)脈夾恢復(fù)血液灌注，最后逐層關(guān)閉腹腔，術(shù)中用保溫毯維持肛溫36 ℃左右，術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)。

I/R 組和Xe組予以阻斷血流85 min，Sham 組僅分離腹主動(dòng)脈，不阻斷血流，其余手術(shù)操作同其他組。再灌注1 h 后，Xe 組經(jīng)呼吸機(jī)吸入50%氙氣+50%氧氣混合氣1 h，其余兩組予以吸入50%氮?dú)?50%氧氣混合氣1 h。

1.3.2行為學(xué)評(píng)分

再灌注4 h 后進(jìn)行Basso-Beattie-Bresnahan (BBB)評(píng)分[17]和斜扳試驗(yàn)[18]。

1.3.2.1BBB評(píng)分

大鼠置于寬大活動(dòng)場地，采用BBB評(píng)分進(jìn)行后肢運(yùn)動(dòng)功能評(píng)估。由對(duì)分組不知情的兩名評(píng)定者獨(dú)立觀察大鼠后肢的運(yùn)動(dòng)，根據(jù)對(duì)軀干的位置及穩(wěn)定性、步態(tài)、協(xié)調(diào)性、爪的置放、足趾間隙及尾的位置觀察。BBB 評(píng)分0 分(神經(jīng)功能完全缺失)～21 分(神經(jīng)功能正常)。重復(fù)3次，取平均值。

1.3.2.2斜板試驗(yàn)

將大鼠頭朝左橫放在斜板上，從水平位置(0°)起逐漸增大角度，記錄大鼠能夠在板上停留5 s 不跌落的最大角度，重復(fù)3 次，取平均值。由對(duì)分組不知情的兩名評(píng)定者獨(dú)立觀察記錄。

1.3.3采集標(biāo)本

行為學(xué)評(píng)分后，每組取5 只大鼠，戊巴比妥鈉50 mg/kg 麻醉后，開胸經(jīng)左心室升主動(dòng)脈插管，并剪開右心耳，灌注冰生理鹽水約200 mL 至右心耳流出灌洗液清亮，迅速并仔細(xì)咬除棘突和椎板，獲取L3-5區(qū)域脊髓組織，保存于-80 ℃冰箱，行Western blotting和RT-qPCR 檢測。另外5 只大鼠經(jīng)冰生理鹽水灌注后，4%多聚甲醛200 mL 繼續(xù)緩慢灌注至鼠體僵硬。咬除棘突和椎板，獲取L3-5區(qū)域脊髓組織，4%多聚甲醛固定進(jìn)行Nissl染色。

1.3.4Nissl染色

固定脊髓組織48 h 后，依次進(jìn)行脫水、透明、浸蠟包埋、切片、烤片，切片厚度5 μm。常規(guī)脫蠟水化處理后置于0.1%硫堇中，37 ℃孵育15 min，蒸餾水沖洗，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。光學(xué)顯微鏡下觀察脊髓組織中Nissl 染色陽性神經(jīng)元(正常神經(jīng)元)。每組隨機(jī)選取5 張切片，每張切片隨機(jī)選取5 個(gè)不重復(fù)的視野(×400)，分別計(jì)數(shù)每張切片中正常神經(jīng)元數(shù)目。

1.3.5Western blotting

于-80 ℃冰箱中取出脊髓組織，加入預(yù)冷的裂解液、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，勻漿離心后冰上靜置30 min，4 ℃、12 000 r/min 離心15 min，取上清液，采用BCA 蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。取蛋白40 μg 上樣電泳，電泳后轉(zhuǎn)膜于PVDF 膜上，5%脫脂牛奶室溫下封閉2 h。加入Akt (1∶1 000)、p-Akt(1∶1 000)、p62(1∶1 000)、Beclin 1 (1∶1 000)、LC3 Ⅱ(1∶1 000)和β-actin (1∶2 500)一抗，4 ℃孵育過夜，次日TBST 洗膜后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗(1∶6000)，室溫孵育2 h，洗膜后加入顯影試劑，化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)顯影并采集圖像，并用 Image J 軟件對(duì)目的條帶進(jìn)行分析，以β-actin 作為參考標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算目的蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.3.6逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)

取大鼠脊髓組織放入2 mL 的EP 管中，加入TRIzol 1 mL，勻漿靜置5 min 后，加入氯仿200 μL，劇烈震蕩混勻后4 ℃、12 500 r/min離心15 min，取上清液，加入與上清等體積的異丙醇，4 ℃、12 500 r/min 離心10 min，棄上清，可見白色片狀沉淀。每管加入75%乙醇(DEPC 水配置) 1 mL 清洗后離心棄上清，冰上靜置直至乙醇完全揮發(fā)。加入DEPC 水30 μL 溶解RNA。測定RNA 濃度與純度，根據(jù)Takara 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。參照SYBR Green Master Mix 試劑盒說明書進(jìn)加樣，反應(yīng)體系為20 μL：2×SYBRMix 10 μL，RNA free H2O 4.2 μL，正反向引物各0.4 μL，目的基因5 μL (稀釋5倍)。加樣結(jié)束后于7 500 Fast Real Time PCR System 進(jìn)行PCR 循環(huán)。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性2 min，95 ℃變性10 s，60 ℃退火30 s，60 ℃延伸30 s，40 個(gè)循環(huán)。以β-actin 基因?yàn)閮?nèi)參，每個(gè)樣本設(shè)計(jì)3 個(gè)復(fù)孔，取Ct 值的平均值，并采用2－ΔΔCt方法進(jìn)行相對(duì)表達(dá)量的計(jì)算。引物合成由北京天一輝遠(yuǎn)科技有限公司完成。

引物序列如下。

p62：上游5'-GCT GAG TCG GCT TCT GCT CCA TCA-3'；下游5'-GCG GCT TCT CTT CCC TCC ATG TTC C-3'

Beclin 1：上游5'-ATG CAG GTG AGC TTC GTG TG-3'；下游5'-CTG GGC TGT GGT AAG TAA TGG A-3'

LC3 Ⅱ：上游5'-ACC AGC ACC CCA GCA AGA-3'；下游5'-CAG GAC AGG CAG CTG CTT CT-3'

β-actin：上游5'-GGA GAT TAC TGC CCT GGC TCC TA-3'；下游5'-GAC TCA TCG TAC TCC TGC TTG CTG-3'

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 26.0 軟件進(jìn)行分析處理。計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以()表示，采用單因素方差分析(one-way ANOVA)；經(jīng)Levene 檢驗(yàn)符合方差齊性，采用LSD test進(jìn)行兩兩比較。顯著性水平α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 后肢運(yùn)動(dòng)功能

術(shù)前所有大鼠BBB 評(píng)分均為21分。與Sham 組比較，再灌注后4 h，I/R 組和Xe 組BBB 評(píng)分均明顯降低(P＜ 0.01)，斜板試驗(yàn)的最大傾斜度也明顯減小(P＜0.01)。與I/R 組比較，再灌注4 h 后，Xe 組后肢BBB評(píng)分明顯升高(P＜ 0.01)，斜板試驗(yàn)最大傾斜度也明顯增大(P＜ 0.01)。見表1。

表1 各組再灌注后4 h后肢BBB評(píng)分和斜板試驗(yàn)評(píng)分比較

2.2 脊髓組織形態(tài)學(xué)變化

Sham 組Nissl 小體數(shù)量較多，呈藍(lán)紫色，光鏡下清晰可見，神經(jīng)元形態(tài)規(guī)則；I/R 組正常神經(jīng)元數(shù)量減少，神經(jīng)元胞體皺縮，Nissl 小體崩解，著色淺淡；與I/R組相比，Xe組Nissl小體崩解少，著色深，神經(jīng)元形態(tài)較規(guī)則(圖1)。SCIRI 后，I/R 組脊髓組織的正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)明顯少于Sham 組(P＜ 0.01)，Xe 組明顯多于I/R組(P＜ 0.01)。見表2。

圖1 各組脊髓組織Nissl染色(×200)

2.3 p-Akt和Akt蛋白表達(dá)

與Sham 組相比，I/R 組和Xe 組p-Akt/Akt 比值明顯降低(P＜ 0.01)。與I/R組相比，Xe組p-Akt/Akt比值明顯增加(P＜ 0.01)。見表2、圖2。

圖2 各組脊髓組織中Akt、p-Akt蛋白表達(dá)

表2 各組脊髓組織正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)和p-Akt/Akt蛋白表達(dá)的比較

2.4 p62、Beclin 1、LC3 I和LC3 Ⅱ蛋白及mRNA表達(dá)

與Sham 組相比，I/R 組和Xe 組的Beclin 1 蛋白表達(dá)均增加，p62 蛋白表達(dá)均明顯減少(P＜ 0.01)，LC3Ⅱ/LC3 I比值明顯升高(P＜ 0.01)。與I/R組相比，Xe組Beclin 1蛋白表達(dá)明顯減少(P＜ 0.01)，p62蛋白表達(dá)明顯增加(P＜ 0.01)，LC3 Ⅱ/LC3 I比值明顯降低(P＜0.01)。見圖3、表3。

表3 各組脊髓組織p62、Beclin 1和LC3 Ⅱ/LC3 I蛋白表達(dá)的比較

圖3 各組脊髓組織中p62、Beclin 1、LC3 I和LC3 Ⅱ蛋白表達(dá)

與Sham 組相比，I/R 組脊髓組織中Beclin 1 mRNA 和LC3 Ⅱ mRNA 的含量明顯增加(P＜ 0.01)，p62 mRNA 的含量明顯降低(P＜ 0.01)。與I/R 組相比，Xe組LC3 Ⅱ mRNA含量減少(P＜ 0.05)，p62 mRNA 的含量明顯升高(P＜ 0.01)。見表4。

表4 各組脊髓組織p62、Beclin 1和LC3 Ⅱ mRNA表達(dá)的比較 單位：2－ΔΔCt

3 討論

氙氣是一種性能穩(wěn)定的理想麻醉氣體，具有血?dú)夥峙湎禂?shù)低、誘導(dǎo)迅速、血流動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定及蘇醒快等優(yōu)點(diǎn)[19-20]。氙氣具有優(yōu)越的神經(jīng)保護(hù)作用，在阿爾茨海默病[21]和SCIRI 中已得到證實(shí)，氙氣可以減輕神經(jīng)元損傷、改善神經(jīng)認(rèn)知和神經(jīng)功能障礙。氙氣對(duì)腦[22]、腎[23]、脊髓[5-10]等器官的再灌注損傷具有保護(hù)作用。然而，其潛在的機(jī)制尚不清楚。氙氣可以上調(diào)腦卒中后p-Akt 的表達(dá)，減少缺血性神經(jīng)元死亡[24]。Zhao 等[25]發(fā)現(xiàn)氙氣可以激活PI3K-Akt-mTOR 通路從而減輕腎缺血再灌注損傷。Yang等[7-9]發(fā)現(xiàn)氙氣后處理可以通過調(diào)控兔SCIRI 后小膠質(zhì)細(xì)胞極化狀態(tài)，減輕SCIRI 后的炎癥反應(yīng)，改善后肢的運(yùn)動(dòng)功能；同時(shí)氙氣后處理還能抑制Bax、Caspase-3 和Cytochrome C 蛋白的表達(dá)，并增加Bcl-2 蛋白的表達(dá)，從而減少大鼠SCIRI 后神經(jīng)細(xì)胞凋亡，改善后肢的運(yùn)動(dòng)功能。本研究也顯示，氙氣后處理可以提高大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能的BBB評(píng)分，增大斜板試驗(yàn)的最大傾斜角度，增加正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)。

SCIRI 在臨床上主要表現(xiàn)為急性或遲發(fā)性神經(jīng)功能缺失，出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)和/或感覺功能障礙，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，如果不及時(shí)治療，脊髓功能可能會(huì)產(chǎn)生長期或永久性損傷，但目前SCIRI 尚缺乏有效的治療方法[26-27]。治療方案的缺乏與其復(fù)雜的病理生理過程有關(guān)，缺血再灌注損傷是指發(fā)生缺血后的組織器官在恢復(fù)血供后機(jī)體損傷反而加重的現(xiàn)象，具有二次損傷的特點(diǎn)[1-2]。SCIRI 后大量脊髓神經(jīng)的死亡是造成脊髓功能障礙的主要原因，而自噬和凋亡作為神經(jīng)元死亡的主要進(jìn)程，是缺血再灌注損傷病理生理變化中的重要環(huán)節(jié)[6,14]。

自噬是一個(gè)重要的細(xì)胞內(nèi)降解過程，自噬體將受損的細(xì)胞器、錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)的病原體包裹，與溶酶體融合形成自噬溶酶體，將包裹的內(nèi)容物降解回收并重新用于細(xì)胞能量和功能恢復(fù)，這一動(dòng)態(tài)循環(huán)過程被稱為自噬流，在維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用。另一方面，過度的細(xì)胞自噬會(huì)引發(fā)有別于凋亡的另一種細(xì)胞程序性死亡，稱為自噬性細(xì)胞死亡[28-29]。在創(chuàng)傷性脊髓損傷急性期，維持適度的自噬流，可以促進(jìn)損傷細(xì)胞內(nèi)受損成分的降解和循環(huán)，從而使神經(jīng)元在缺乏營養(yǎng)的環(huán)境中存活[30]。也有研究顯示，姜黃素治療大鼠創(chuàng)傷性脊髓損傷通過抑制Akt/ 哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信號(hào)通路，促進(jìn)自噬，抑制神經(jīng)元凋亡，改善運(yùn)動(dòng)功能[31]。另外，機(jī)械損傷后脊髓神經(jīng)元中p-Akt 快速增加，mTOR 的磷酸化水平快速上調(diào)，從而抑制PI3K/Akt/mTOR 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，增加自噬水平，降低線粒體膜電位，減少細(xì)胞凋亡，從而促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)，表明PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路還可以通過調(diào)控自噬來調(diào)節(jié)脊髓損傷后的線粒體凋亡[32]。然而，過度缺氧或營養(yǎng)應(yīng)激可引起過度自噬或激活凋亡等細(xì)胞死亡途徑，進(jìn)一步加重神經(jīng)損傷。在嚴(yán)重創(chuàng)傷性脊髓損傷的發(fā)病機(jī)制中，過度自噬將激活凋亡和其他細(xì)胞死亡機(jī)制，進(jìn)一步導(dǎo)致自噬通量的增加，從而促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞死亡[33]。Dupont 等[34]報(bào)道過度自噬通過非經(jīng)典的atg5 依賴途徑增強(qiáng)Caspase-1 的表達(dá)，促進(jìn)炎癥小體激活，釋放炎性細(xì)胞因子白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-18到細(xì)胞質(zhì)中，加重組織的炎癥損傷，導(dǎo)致細(xì)胞自噬死亡。而也有研究報(bào)道脊髓損傷發(fā)生時(shí)，過度的自噬可能導(dǎo)致神經(jīng)元自噬死亡，從而影響軸突的再生和機(jī)體神經(jīng)功能的恢復(fù)[35]。

Beclin 1 參與自噬小體雙層膜的形成，是自噬的標(biāo)志性蛋白，對(duì)自噬的激活具有關(guān)鍵作用，其上調(diào)可誘導(dǎo)自噬的發(fā)生[36-37]。Kanno等[38]首次報(bào)道脊髓損傷后自噬的激活，脊髓半橫斷的小鼠模型中，損傷部位的Beclin 1 表達(dá)明顯增加，Beclin 1 水平從脊髓損傷后4 h 開始上調(diào)，在損傷后3 d 達(dá)到峰值，持續(xù)到脊髓損傷后21 d。在脊髓半橫斷的大鼠模型中也發(fā)現(xiàn)同樣的結(jié)果[39]。本實(shí)驗(yàn)在再灌注4 h 后，激活了自噬，氙氣后處理可以降低再灌注損傷后自噬的水平。另一個(gè)自噬特異性基因LC3 是酵母自噬基因8 的同源體。LC3Ⅱ數(shù)量與自噬體數(shù)量成正比，LC3 Ⅱ/LC3 I比值的大小可估計(jì)自噬水平的高低[28-29,40]。研究發(fā)現(xiàn)胰島素樣生長因子1 通過抑制PI3K/Akt/mTOR 信號(hào)通路的激活，從而降低LC3 Ⅱ/LC3 I比值，抑制大鼠脊髓損傷后過度自噬，促進(jìn)大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)[40]。本研究也顯示，SCIRI后脊髓組織中且LC3 Ⅱ/LC3 I比值升高，提示SCIRI 后自噬水平顯著增加。另外，經(jīng)氙氣后處理p-Akt/Akt比值較I/R 組明顯升高，LC3 Ⅱ/LC3 I比值降低，表明氙氣后處理減輕SCIRI 后過度自噬可能與Akt激活有關(guān)。p62是自噬底物連接蛋白，含有多個(gè)結(jié)構(gòu)域，可結(jié)合待降解蛋白，并將其運(yùn)輸至自噬體中，最終在溶酶體中降解[41-42]。有研究表明，自噬被抑制可導(dǎo)致p62蛋白的累積[43]。因此，p62與細(xì)胞自噬呈負(fù)相關(guān)。本研究顯示，再灌注后4 h，p62 蛋白表達(dá)和p62 mRNA 含量下降，經(jīng)氙氣后處理后p62 表達(dá)增加，表明氙氣后處理抑制SCIRI 的自噬水平。雖然本研究提示氙氣后處理激活了SCIRI 后的Akt 通路，抑制了再灌注早期的自噬水平，但有關(guān)Akt 下游的靶蛋白mTOR 和自噬之間關(guān)系以及隨著再灌注時(shí)間的延長自噬水平的變化仍需要進(jìn)行一步的深入研究。

4 結(jié)論

氙氣后處理減輕SCIRI 與抑制再灌注損傷早期的過度自噬，激活A(yù)kt通路有關(guān)。

利益沖突聲明：所有作者聲明不存在利益沖突。