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        顱腦損傷病兒血清血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體、Toll樣受體4表達水平及臨床意義研究

        2023-03-14 00:49:48王文召李娜劉一鳴
        安徽醫(yī)藥 2023年3期
        關鍵詞:病兒結果表明膠質

        王文召, 李娜, 劉一鳴

        顱腦損傷是指由于外作用力沖擊導致的頭顱和腦損傷性疾病, 是導致殘疾和死亡的首要原因, 主要臨床表現為意識障礙、運動障礙、頭痛、嘔吐等。顱腦損傷可引起一系列病理生理過程, 因其復雜多變, 且易出現各種并發(fā)癥, 預后較差, 嚴重威脅人類生活質量和生命安全, 給社會和家庭帶來了沉重的經濟負擔, 因此, 尋找早期分子生物學預警指標, 對病人顱腦損傷程度和預后進行早期準確預測顯得尤為重要[1-2]。血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體-1(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1, LOX-1)由270個氨基酸組成, 是氧化低密度脂蛋白(oxidation low-density lipoprotein, ox-LDL)在內皮細胞的主要受體, 對ox-LDL起到特異性結合、吞噬和降解的作用, 誘導細胞增殖和凋亡, 激活細胞內信號轉導通路, 可加重外傷后繼發(fā)性腦損傷[3-4]。Toll樣受體4(Toll-like receptor4, TLR4)是天然免疫受體家族, 主要表達于巨噬細胞、樹突細胞、小膠質細胞等, 在中樞神經系統的外傷性損傷、感染性損傷等發(fā)揮及其重要的作用[5-6]。本研究通過檢測顱腦損傷后血清LOX-1、TLR4表達水平, 探討二者與顱腦損傷嚴重程度及預后的關系。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料選取2020年1—12月在南京市兒童醫(yī)院就診的顱腦損傷病兒82例作為研究對象, 其中男42例, 女40例, 年齡(7.54±4.41)歲, 范圍為4~12歲;另選取同時期保健科體檢的90例健康兒童作為對照組, 其中男47例, 女43例, 年齡(8.13±3.29)歲, 范圍為4~13歲, 并做好臨床資料的登記。兩組研究對象性別(χ2=0.02,P=0.895)、年齡(t=1.00,P=0.319)比較, 差異無統計學意義(P>0.05), 具有可比性。預后良好組格拉斯哥昏迷量表(GCS)評分(13.05±1.66)分, 范圍為11~15分, 預后不良組GCS評分(8.64±1.89)分, 范圍為6~11分, 兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)。

        1.2 納入及排除標準納入標準:①經頭部CT確診為顱腦外傷;②病人臨床資料完整, 配合治療;③無其他部位嚴重合并傷。排除標準:①有腦血管病、癲癇病史者;②有免疫系統疾病者;③術前使用糖皮質激素及非甾體抗炎藥;④有心、肝、腎嚴重疾病者;⑤術前、手術中發(fā)生低血壓、缺氧。入選病兒監(jiān)護人或其近親屬簽署知情同意書, 本項研究所用方法符合《世界醫(yī)學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

        1.3 研究方法

        1.3.1 樣本采集 抽取所有受試者治療前外周靜脈血4 mL, 4 ℃ 4 000 r/min, 離心10 min, 分離血清分裝至無菌EP管, 標記后-80 ℃冰箱凍存待測。

        1.3.2 酶聯免疫吸附測定(ELISA)檢測病兒血清LOX-1、TLR4水平 采用ELISA分別檢測病兒血清LOX-1、TLR4水平, 嚴格按照試劑盒說明書進行操作, LOX-1試劑盒購自普洛邁德生物公司, TLR4試劑盒購自美國ADL公司。

        1.3.3 隨訪 顱腦損傷病人出院后6個月, 觀測顱腦損傷病兒轉歸情況, 根據格拉斯哥預后量表(GOS)分級評定[7], 分為預后不良組(病兒功能受限、活動受限, GOS為1~3級)和預后良好組(病兒恢復良好, GOS為4~5級), 比較兩組間LOX-1、TLR4表達情況。

        1.4 統計學方法統計分析采用SPSS 22.0軟件。以±s描述計量資料, 兩組間比較采用兩獨立樣本t檢驗;采用Pearson相關性分析檢驗顱腦損傷病兒血清LOX-1、TLR4水平的關系;受試者操作特征曲線(ROC曲線)分析LOX-1、TLR4水平對顱腦損傷預后不良的診斷價值;logistic回歸分析與顱腦損傷預后情況的有關因素,P<0.05為差異有統計學意義。

        2 結果

        2.1 兩組兒童血清LOX-1、TLR4表達水平比較與對照組比較, 顱腦損傷組病兒血清LOX-1、TLR4水平升高(P<0.05), 見表1。

        表1 兩組兒童血清LOX-1、TLR4水平比較/(μg/L,±s)

        表1 兩組兒童血清LOX-1、TLR4水平比較/(μg/L,±s)

        注:LOX-1為血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體-1, TLR4為Toll樣受體4。

        組別對照組顱腦損傷組t值P值例數90 82 LOX-1 3.13±0.97 13.24±1.69 48.64<0.001 TLR4 0.52±0.11 8.83±1.57 50.09<0.001

        2.2 不同轉歸病兒血清LOX-1、TLR4表達水平比較隨訪6個月期間82例顱腦損傷病兒中33例病兒預后不良(功能受限、活動受限), 恢復良好49例。預后良好組相比, 預后不良組病兒血清LOX-1、TLR4水平升高, LOX-1和TLR4水平隨轉歸加重呈升高趨勢(P<0.05)。見表2。

        表2 不同轉歸顱腦損傷病兒血清中LOX-1和TLR4表達比較/(μg/L,±s)

        表2 不同轉歸顱腦損傷病兒血清中LOX-1和TLR4表達比較/(μg/L,±s)

        注:LOX-1為血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體-1, TLR4為Toll樣受體4。

        組別預后良好組預后不良組t值P值例數49 33 LOX-1 11.17±1.28 16.31±2.30 12.97<0.001 TLR4 7.19±1.25 11.19±2.05 10.98<0.001

        2.3 顱腦損傷病兒血清LOX-1、TLR4水平的相關性顱腦損傷病兒血清LOX-1、TLR4水平呈正相關(r=0.82,P<0.001)。

        2.4 血清LOX-1、TLR4水平對顱腦損傷病兒預后不良的診斷價值ROC曲線結果顯示, 血清LOX-1診斷顱腦損傷病兒預后不良的曲線下面積(AUC)為0.76, 其95%置信區(qū)間(CI)為(0.65, 0.88), 靈敏度為66.7%, 特異度為85.7%, 截斷值為9.600 μg/L;TLR4診斷顱腦損傷病兒預后不良的AUC為0.75, 95%CI為(0.64, 0.87), 靈敏度為63.6%, 特異度為87.8%, 截斷值為5.354 μg/L;二者聯合診斷顱腦損傷病兒預后不良的AUC為0.91, 95%CI為(0.84, 0.98), 靈敏度為84.8%, 特異度為89.8%。與LOX-1、TLR4單獨檢測比較, 二者聯合診斷顱腦損傷AUC更高(Z=2.18、2.35,P=0.029、0.019), 見圖1。

        圖1 血清血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)、Toll樣受體4(TLR4)水平診斷顱腦損傷病兒82例預后不良的ROC曲線

        2.5 二元logistic回歸分析顱腦損傷病兒預后不良的影響因素將是否發(fā)生顱腦損傷不良預后作為因變量(預后良好=0, 預后不良=1), 以顱腦損傷病兒血清LOX-1、TLR4表達水平作為自變量, 進行二元logistic回歸分析, 結果顯示LOX-1、TLR4水平與顱腦損傷預后不良有關(P<0.05), 見表3。

        表3 顱腦損傷病兒82例預后的影響因素分析

        3 討論

        有研究表明, 我國每年大約幾十萬人是死于創(chuàng)傷, 其中死于顱腦損傷占50%以上[8], 顱腦損傷具有極高的致殘率和病死率, 其主要的病理變化有反應性神經膠質增生、星形膠質細胞增生形成神經膠質疤痕、神經元、膠質細胞大量變性死亡, 這些都不利于顱腦損傷恢復, 可導致病人產生長期病理生理后遺癥, 引起運動認知障礙, 嚴重影響病人生活質量[9]。顱腦損傷病情復雜多變, 預后較差, 因此顱腦損傷是神經外科的診治難題之一, 臨床上評估顱腦損傷病情、指導治療、判斷預后的常用指標有GCS、CT結果、瞳孔反應等, 但有時不能準確地反應顱腦損傷程度, 故尋找更有效的血清生化標志物非常重要[10]。

        LOX-1是一種Ⅱ型跨膜蛋白, 屬于C型選擇素家族, 在血管內皮細胞表面豐富表達, 與ox-LDL特異性結合, 影響內皮功能, 損傷血管, 并促進腦外傷中的炎性反應[11-12]。徐建等[13]研究結果表明, 與健康對照組比較, 急性冠狀動脈綜合征病人血清LOX-1水平顯著升高, 可能由于血漿中ox-LDL升高誘導LOX-1水平顯著升高, ox-LDL與LOX-1特異性結合后增強巨噬細胞吞噬ox-LDL的能力, 從而破壞血管內皮細胞結構和功能。有研究結果表明, 冠心病病人血清LOX-1表達水平明顯升高, 而且LOX-1水平隨冠狀動脈病變程度的加重而升高, LOX-1表達水平上調, 促進單核細胞的黏附、聚集, 致使血管內皮損傷[14]。本研究結果表明, 與對照組比較, 顱腦損傷病兒血清LOX-1表達水平升高, 且其水平隨著顱腦損傷病情的加重而升高, 提示LOX-1在顱腦損傷的發(fā)生中發(fā)揮一定作用, LOX-1與顱腦損傷嚴重程度密切相關;預后不良病兒(死亡及植物狀態(tài)、殘廢組)血清LOX-1水平較預后良好病兒明顯增高, 提示LOX-1高表達預后不良, LOX-1高表達促進動脈粥樣硬化的發(fā)生從而影響顱腦損傷病兒恢復, 是導致顱腦損傷病兒預后不良的原因之一;ROC分析結果顯示, LOX-1診斷顱腦損傷預后的AUC為0.76, 靈敏度為66.7%, 特異度為85.7%, 截斷值為9.600 μg/L, 提示當血清LOX-1水平高于9.600 μg/L時, 顱腦損傷病兒預后不良;多因素logistic回歸分析結果表明血清LOX-1是顱腦損傷預后不良的危險因素, 提示LOX-1可作為顱腦損傷預后評估的一個新的潛在標志物。

        TLR屬于I型跨膜蛋白, 約由200個氨基酸保護域組成, 參與對多種疾病的防御過程, 通過激活小膠質細胞釋放炎性因子, 與炎性反應、細胞信號傳導等過程密切相關[15-16]。TLR4作為TLRs家族中的重要成員, 在小膠質細胞, 星形膠質細胞、腦血管內皮細胞廣泛表達, 通過結合相應的配體, 使小膠質細胞等釋放炎性因子和炎性趨化因子, 在顱腦損傷繼發(fā)性損傷中發(fā)揮關鍵作用[17-18]。堯小龍等[19]研究結果表明, 顱腦損傷病人血清TLR4表達上調, 提示TLR4促進腦外傷中的炎性反應, 加重外傷后的腦水腫、繼發(fā)性損傷, TLR4在顱腦損傷發(fā)生中起非常重要的作用。有研究結果表明, 與正常對照組比較, 顱腦損傷病人血清TLR4表達水平升高, 且TLR4表達水平隨著顱腦外傷分級的增加而升高, 與顱腦外傷的嚴重程度呈正相關, 提示TLR4參與了繼發(fā)性腦損傷, TLR4是導致顱腦損傷病人病情加重影響預后不良的重要原因之一[20]。本研究結果表明, 與對照組比較, 顱腦損傷病兒血清TLR4表達水平升高, 且其水平隨著顱腦損傷病情的加重而升高, 提示TLR4在顱腦損傷的發(fā)生中發(fā)揮一定作用, 與顱腦損傷嚴重程度密切相關;預后不良病兒(死亡及植物狀態(tài)、殘廢組)血清TLR4水平較預后良好病兒明顯增高, 提示TLR4高表達可能可預測病人預后不良, 需進行監(jiān)控并及時治療;經Pearson法分析顱腦損傷病人血清LOX-1、TLR4水平呈正相關, 提示LOX-1、TLR4可共同評估顱腦損傷預后情況;ROC分析結果顯示, TLR4診斷顱腦損傷預后的AUC為0.75, 靈敏度為63.6%, 特異度為87.8%, 截斷值為5.354 μg/L, LOX-1、TLR4二者聯合診斷顱腦損傷病兒預后不良的AUC為0.91, 靈敏度為84.8%, 特異度為89.8%, 與LOX-1、TLR4單獨相比, 二者聯合診斷顱腦損傷病兒預后不良的AUC更高;提示當血清TLR4水平高于5.354 μg/L時, 顱腦損傷病兒預后不良可能性較高, 二者聯合檢測可提高對顱腦損傷病兒預后不良診斷的靈敏度;多因素logistic回歸分析結果表明血清TLR4是顱腦損傷預后不良的危險因素, 提示TLR4可作為顱腦損傷預后評估的一個新的潛在標志物。

        綜上所述, LOX-1、TLR4水平與顱腦損傷的病情程度以及預后有關, 可作為了解病情與轉歸的參考指標。

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