徐碧林， 羅周瑜， 彭陳萬里， 武 卉， 張子燁， 鄭 玥， 鄭永良

( 黃岡師范學院 生物與農業(yè)資源學院， 經濟林種質資源改良與綜合利用湖北省重點實驗室 湖北省大別山特色資源開發(fā)協(xié)同創(chuàng)新中心， 湖北 黃岡 438000 )

植物內生菌是指生活史中某一階段或整個階段定殖在植物各組織器官或細胞間隙內的一類對植物自身不引起明顯病害癥狀的微生物，包括內生細菌、內生真菌和內生放線菌等(Matsumoto et al., 2017; Uzma et al., 2018)。對內生菌與宿主植物的相互影響研究表明，它們對植物本身具有促進生長、增強抗逆性、生物防治和生物修復等有益的生物學功能(Giauque et al., 2019; De Lamo et al., 2020; El-Sayed et al., 2020; He et al., 2020)。不僅如此，藥用植物內生菌還會獲得與宿主相同的部分代謝途徑，從而合成與宿主相同或相似的、具有潛在的抗菌、抗蟲、抗癌、抗病毒、抗氧化、免疫制劑、降糖等生物活性的次生代謝產物(Gouda et al., 2016; 黃敬瑜等, 2017; Nongkhlaw et al., 2017)。因此，充分發(fā)掘藥用植物內生菌具有廣闊的應用前景。

艾草(Artemisiaargyi)隸屬于菊科(Compositae)艾屬(Artemisia)，是一種功能性藥用植物(Song et al., 2019)。蘄艾為湖北省蘄春縣特產，中國國家地理標志產品，湖北省道地藥材，具有護肝、抗腫瘤、抗菌、鎮(zhèn)痛、抗炎等多種藥理作用(洪宗國, 2015; Dong et al., 2018)。明代醫(yī)圣李時珍在《本草綱目》中就有對蘄艾的推崇：“(艾葉)自成化以來，則以蘄州者為勝，用充方物，天下重之”，謂之“蘄艾”(Artemisiaargyivar.argyi‘Qiai’)。肖宇碩等(2018)對蘄艾及不同產地艾葉揮發(fā)油進行了一系列的比較研究，結果發(fā)現不同產地艾葉揮發(fā)性成分有一定差異，其中蘄艾品質最好。此外，Xiang等(2018)的研究還發(fā)現蘄艾揮發(fā)油具有較好的抑菌和殺菌活性。

近年來，關于蘄艾的種植、提取液、化學組分、藥理作用及艾灸和艾貼等產品開發(fā)研究得較多，對蘄艾內生菌的研究報道較少。Shi等(2017)從蘄艾艾葉中分離得到內生真菌TrichodermakoningiopsisQA-3，并從其發(fā)酵液中成功分離鑒定出具有抗菌活性的5種新型真菌多酮類化合物和2種已知的酮類類似物。目前還尚未見對蘄艾內生細菌的相關報道。本研究分別從蘄艾的根、莖和葉中分離內生細菌，從微生物的分離、形態(tài)、生理生化特征、分子生物學鑒定和發(fā)酵液抑菌活性入手，探討蘄艾內生細菌對常見的人類病原菌的抗菌作用及其產酶特性，旨為探尋有效拮抗微生物資源以及蘄艾的進一步開發(fā)利用提供理論依據，為充分利用內生菌資源生產工業(yè)用酶提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

供試樣品蘄艾(Artemisiaargyivar.argyi‘Qiai’)：采自湖北省黃岡市蘄春縣赤東鎮(zhèn)三渡村五組大田種植，樣品采集后用自封袋密封后馬上回實驗室進行內生細菌的分離。

供試菌株：大腸桿菌(Escherichiacoli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、產氣腸桿菌(Enterobacteraerogenes)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、變形桿菌(Proteusbacillusvulgaris) 和小腸結腸炎耶爾森氏菌(Yersiniaenterocolitica)均保存于黃岡師范學院經濟林種質資源改良與綜合利用湖北省重點實驗室。

培養(yǎng)基：LB固體及液體培養(yǎng)基(1 L)(蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g，pH 7.0，固體加瓊脂粉18 g)用于蘄艾不同組織內生細菌的分離擴繁。淀粉培養(yǎng)基(1 L)(牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，可溶性淀粉2 g，pH 7.0～7.2，瓊脂18 g)、牛奶培養(yǎng)基(LB固體培養(yǎng)基中加入11%滅菌的脫脂奶粉)、剛果紅培養(yǎng)基(1 L)(羧甲基纖維素鈉15 g，蛋白胨5 g，KH2PO42.0 g，MgSO40.2 g，NaCl 5 g，瓊脂18 g，剛果紅0.2 g，pH 7.0)和油脂培養(yǎng)基(LB固體培養(yǎng)基加入1%吐溫80)分別用來篩選產淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶和脂肪酶的內生細菌。蛋白胨水培養(yǎng)基(1 L)(蛋白胨10 g，NaCl 15 g，pH 7.3～7.5)、蔗糖/葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)液[蛋白胨水培養(yǎng)基1 L，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1.5 mL，20%蔗糖溶液(蔗糖發(fā)酵)，20%葡萄糖溶液(葡萄糖發(fā)酵)]、葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液(1 L) (葡萄糖5 g，蛋白胨5 g，K2HPO42 g，pH 7.2～7.4)、明膠液化培養(yǎng)基(1 L) (蛋白胨5 g，明膠100～150 g，pH 7.2～7.4)和檸檬酸鹽培養(yǎng)基(1 L) [檸檬酸鈉2 g，K2HPO41 g，NH4H2PO41 g，NaCl 5 g，MgSO40.2 g，瓊脂18 g，1%溴麝香草酚藍(酒精溶液)10 mL，pH 6.8]分別用來進行吲哚試驗、蔗糖/葡萄糖發(fā)酵試驗、乙酰甲基甲醇試驗(VP試驗)/甲基紅試驗(MR試驗)、明膠水解試驗和檸檬酸鹽試驗。

1.2 方法

1.2.1 內生菌的分離純化 參照專利“一種艾草內生菌的分離方法”分離蘄艾根、莖和葉的內生細菌(徐碧林等, 2019)。取健康、無病害的艾葉、莖和根各約5 g，用自來水沖洗干凈后，用濾紙吸干表面水分，剪成小片(葉片)/段(莖和根)放入滅菌平皿中，用無菌水洗滌3次并吸干。用75%乙醇浸泡葉片30 s，莖段和根60 s。無菌水浸泡沖洗5次并吸干，用2.5%次氯酸鈉溶液浸泡葉片2 min，5%次氯酸鈉溶液浸泡莖段和根3 min，無菌水浸泡2 min，循環(huán)3次，用無菌濾紙吸干殘留的水分。吸取最后一次漂洗的無菌水200 μL涂布于LB培養(yǎng)基平板，驗證消毒效果。

將消毒好的組織樣品放入無菌研缽中，向其內加入9 mL無菌生理鹽水和無菌石英砂，研磨至成勻漿狀，100倍梯度稀釋，取200 μL的適當梯度稀釋液至LB固體培養(yǎng)平板上，均勻涂布，分別置于28 ℃和37 ℃培養(yǎng)。挑選菌落形態(tài)不同的單菌落純化，并將形態(tài)大部分相似的菌落劃歸為同一類，保存菌株備用。

1.2.2 生理生化特征測定 參照《微生物學實驗教程》(周德慶和徐德強, 2013)，采用平板劃線法分離得到內生細菌單菌落，記錄菌落的顏色、形態(tài)、透明度等，并在顯微鏡下觀察其形態(tài)特征及革蘭氏染色反應。參考《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》(東秀珠和蔡妙英, 2001)測定篩選菌株的生理生化反應。此外，挑取活化后的內生細菌，分別在含淀粉培養(yǎng)基平板、牛奶培養(yǎng)基平板、剛果紅培養(yǎng)基平板和油脂培養(yǎng)基平板上劃線，37 ℃培養(yǎng)1～2 d后，在淀粉培養(yǎng)基平板上平鋪一層盧戈氏碘液，其余平板不做處理，分別觀察淀粉平板、牛奶平板和剛果紅平板上菌落周圍的透明水解圈，以及吐溫80平板上的白色暈圈，測量并計算透明水解圈和白色暈圈與菌落直徑的比值。

1.2.3 16S rDNA分子生物學鑒定 提取篩選菌株的染色體總DNA，以菌株的總DNA為模板，利用通用引物對27F：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′和1492R：5′-TACCTTGTTACGACTT-3′擴增菌株16s rDNA基因。25 μL的反應體系：模板1 μL，上、下游引物各1 μL，ddH2O 9.5 μL，Taq DNA聚合酶Mix12.5 μL。PCR反應條件：94 ℃預變性3 min，94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，共30個循環(huán)，72 ℃延伸10 min。取PCR產物于1%的瓊脂糖凝膠上電泳，根據試劑盒操作說明回收DNA片段，回收后的片段委托上海生工生物工程有限公司測序。根據測序結果，將序列在EzBioCloud(https://www.ezbiocloud.net/resources/16s_download)數據庫中進行同源性比對(Yoon et al., 2017)，采用MEGA 7.0中的 CLUSTAL_W模塊將菌株的16s rDNA序列與其同源關系相近的序列比對分析后，把兩頭的序列剪切整齊，轉換格式后，用MEGA 7.0中的Neighbor-Joining模塊構建系統(tǒng)進化樹，1 000次隨機抽樣，計算自引導值(Bootstrap)以評估系統(tǒng)進化樹的置信度(Kumar et al., 2016)。

1.2.4 篩選菌株發(fā)酵液揮發(fā)物抑菌試驗 初篩：將篩選菌株活化并進行平板劃線，挑單菌落于37 ℃液體培養(yǎng)12 h，按1%的接種量接種至100 mLLB液體培養(yǎng)基中，37 ℃，180 r·min-1，發(fā)酵5 d。超聲破細胞，按發(fā)酵液：乙酸乙酯1∶1(V/V)的比例沿著器皿內壁緩慢加入(防止乳化)乙酸乙酯，超聲萃取3次，合并3次得到的萃取液，用旋轉蒸發(fā)儀在35 ℃減壓條件下濃縮乙酸乙酯相，定容至500 μL，4 ℃保存?zhèn)溆??；罨袠司螅魡尉?，在LB培養(yǎng)基平板上縱橫交叉密集劃線。在密集劃線的平板上等距貼直徑為6 mm的滅菌雙層濾紙片，每一個濾紙片上滴加8 μL內生細菌揮發(fā)油，每一種內生細菌揮發(fā)油做3組平行試驗，并以等體積0.3 mg·mL-1的卡那霉素作為陽性對照(+)，等體積乙酸乙酯作為陰性對照(-)。將處理好的平板置于4 ℃擴散1 d，37 ℃培養(yǎng)1 d后，測量并計算平均抑菌圈直徑Φ。

復篩：采用Silva描述的方法對篩選菌株發(fā)酵液揮發(fā)物的最低抑菌濃度(MICs)和最低殺菌濃度(MBCs)進行了測定(Silva et al., 2011)。用LB培養(yǎng)基對具有顯著抑菌效果的菌株發(fā)酵液揮發(fā)物進行2倍梯度稀釋(1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、64.0、128.0、256.0、512.0 μg·mL-1)，用于測定它們最低抑菌濃度。在稀釋后的培養(yǎng)液中分別加入50 μL約107CFU·mL-1的對應菌液，將3組接種后的菌液置于37 ℃、180 r·min-1培養(yǎng)箱培養(yǎng)36 h。培養(yǎng)后完全抑制菌株生長的揮發(fā)物的最低濃度即為MICs。MICs實驗結束后，從每一個濃度梯度的試管中取200 μL培養(yǎng)物分別涂在LB平板上，無微生物生長的平板上相應濃度被確定為MBCs。

2 結果與分析

2.1 蘄艾內生細菌的分離結果

最后一次清洗試驗材料的無菌水涂布LB平板，置于37 ℃培養(yǎng)1周沒有微生物生長，說明試驗材料表面消毒徹底，分離到的細菌均為蘄艾內部所有，而非外界環(huán)境污染所致。本試驗一共從蘄艾的根、莖和葉中分別分離到6、7、7株內生細菌。

2.2 篩選菌株總DNA的提取和16s rDNA擴增結果

篩選菌株基因組DNA提取結果見圖1：A，基因組DNA在電泳圖上的23 130 bp附近一條明顯的條帶，可以用于PCR 擴增。以基因組DNA為模板，以及通用引物對27F/1492R，擴增得到了特異性長度約為1 500 bp的目的條帶(圖1：B)。

A. 基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳； B. 16S rDNA擴增結果瓊脂糖凝膠電泳圖。A. Agarose gel electrophoresis of genomic DNA; B. Agarose gel electrophoresis of 16S rDNA amplification products.圖 1 內生細菌基因組DNA和16S rDNA擴增結果瓊脂糖凝膠電泳圖Fig. 1 Agarose gel electrophoresis of endophytic bacterial genomic DNA and 16S rDNA amplification products

2.3 篩選菌株系統(tǒng)進化分析結果

對20株內生細菌的16S rDNA序列進行比對發(fā)現，來源于葉和莖的內生細菌的16S rDNA序列同源性為100%，表明它們共有相同的內生細菌。將來源于莖和根的13株內生細菌的基因序列提交到EzBioCloud數據庫(https://www.ezbiocloud.net/resources/16s_download)中進行同源性比對，查找與其同源性大于99%的菌株，最終確定蘄艾不同組織中的內生細菌歸屬。如表1和圖2所示，來源于蘄艾莖和葉中共有內生細菌含有6屬7種，分別為芽孢桿菌屬(Bacillus)2株、不動桿菌屬(Acinetobacter)1株、假單胞菌屬(Pseudomonas)1株、短小桿菌屬(Curtobacterium)1株、黃體桿菌屬(Luteibacter)1株和類節(jié)桿菌屬(Paenarthrobacter)1株；來源于蘄艾根的內生細菌含有3屬6種，分別為芽孢桿菌屬(Bacillus)4株、腸桿菌屬(Enterobacter)1株和干燥桿菌屬(Siccibacter)1株。蘄艾的內生細菌在莖和葉中的組成幾乎相同，葉和莖與根中的內生細菌種類只共有1個屬，其余都不共有。

表 1 蘄艾不同組織內生細菌比較Table 1 Comparison of endophytic bacteria in different tissues of Artemisia argyi

分支點上的數值為1 000 次自展值分析所得值，標尺0.020為進化距離。Numbers at the nodes indicate the level of bootstrap values based on 1 000 replications, bar is 20 nt substitutions per 1 000 nt.圖 2 基于16S rDNA序列的蘄艾內生細菌系統(tǒng)發(fā)育分析Fig. 2 Phylogenetic analysis of endophytic bacteria from Artemisia argyi based on 16S rDNA sequences

2.4 篩選菌株的生理生化特征

對分離獲得的13株內生細菌進行了葡萄糖發(fā)酵、蔗糖發(fā)酵、VP試驗和產酶等生理生化特征檢測(表2)，部分菌株產酶結果見圖3，從圖3:A-C中可以看出，lzy-17、lzy-20和lzy-21均能在剛果紅培養(yǎng)基平板上產生不同大小的水解圈，表明它們均能分泌纖維素酶，其中l(wèi)zy-21產纖維素酶能力最強，水解圈與菌落直徑比約為6.0；從圖3：D-G中可以看出，lzy-1、lzy-9、lzy-12和lzy-20均能在牛奶平板上產生不同大小的透明水解圈，表明它們均能分泌蛋白酶，其中l(wèi)zy-1和lzy-20產蛋白酶能力最強，水解圈與菌落直徑比約為4.0；從圖3：H中可以看出，lzy-1能在含吐溫80平板上產生與菌落直徑比約為3.5的白色暈圈， 表明其能分泌脂肪酶。從圖3：I中可以看出，lzy-12能在含淀粉平板上產生與菌落直徑比約為2.5的透明水解圈，表明其能分泌淀粉酶。

A-C. lzy-17、lzy-20和lzy-21在纖維素剛果紅培養(yǎng)基平板上產生透明水解圈情況； D-G. lzy-1、lzy-9、lzy-12和lzy-20在牛奶平板上產生透明水解圈情況； H. lzy-1在含1%吐溫80的平板上產生白色暈圈情況； I. lzy-12在淀粉培養(yǎng)基上產生透明水解圈情況。A-C. Hydrolytic circles produced on the cellulose Congo red medium plate by lzy-17, lzy-20 and lzy-21; D-G. Hydrolytic circles produced on the milk plate by lzy-1, lzy-9, lzy-12 and lzy-20; H. White halocircles produced on the plate containing 1% Tween 80 by lzy-1; I. Hydrolytic circles produced on the starch medium plate by lzy-12.圖 3 內生細菌產酶情況檢測Fig. 3 Hydrolysis of different substrates by endophytic bacteria

2.5 篩選菌株發(fā)酵液揮發(fā)物的抑菌效果

以常見的6種病原菌作為靶標菌，采用濾紙片擴散法對篩選菌株發(fā)酵液揮發(fā)物抑菌活性進行初篩，結果見表3，除了lzy-9，其余12株細菌揮發(fā)物具有不同程度的抑菌活性，占分離菌株的92.3%。對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、產氣腸桿菌、枯草芽孢桿菌、變形桿菌、小腸結腸炎耶爾森氏菌具有抑菌作用的菌株分別有8、5、8、7、5、3株，其中，lzy-20對大腸桿菌、產氣腸桿菌和枯草芽孢桿菌都具有相對較好的抑菌活性，wnn4-3對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和變形桿菌均具有相對較好抑菌活性，lzy-12對金黃色葡萄球菌和小腸結腸炎耶爾森氏菌均具有較好的抑菌活性，lzy-17和lzy-21都對小腸結腸炎耶爾森氏菌均具有較好的抑菌活性。

對具有抑菌效果的菌株發(fā)酵液揮發(fā)物的最低抑菌濃度和最低殺菌濃度進行測定，結果如表4所示，其中l(wèi)zy-20對大腸桿菌、產氣腸桿菌和枯草芽孢桿菌的MICs均為16 μg·mL-1，對三者的MBCs依次為32、32 μg·mL-1和16 μg·mL-1。wnn4-3對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和變形桿菌均的MICs均為16 μg·mL-1，對三者的MBCs依次為16、32 μg·mL-1和32 μg·mL-1。lzy-12對金黃色葡萄球菌和小腸結腸炎耶爾森氏菌的MICs均為16 μg·mL-1，對二者的MBCs分別為32 μg·mL-1和16 μg·mL-1。lzy-17和lzy-21都對小腸結腸炎耶爾森氏菌的MICs均為16 μg·mL-1，二者對其MBCs分別為16 μg·mL-1和32 μg·mL-1。

表 3 內生細菌發(fā)酵液揮發(fā)物抑菌效果Table 3 Bacteriostatic effect of endogenous bacterial volatile oil

3 討論與結論

本試驗從蘄艾莖、葉和根中分別分離得到7、7株和6株內生細菌，16S rDNA全序列的系統(tǒng)發(fā)育分析及生理生化試驗結果顯示，來源于蘄艾莖和葉中的共有內生細菌含有6屬7種，來源于蘄艾根的內生細菌與來源于莖和葉的內生細菌共有1個屬。上述結果表明，蘄艾內生細菌在地上和地下組織中的組成不同，不同的內生細菌對蘄艾的組織具有差異性和專一性。

我們分離得到的13種內生細菌中，皮提不動桿菌和與其親緣關系較近的鮑氏不動桿菌(Acinetobacterbaumannii)、診所不動桿菌(A.nosocomialis)組成的Acb復合體是重要的院內感染病原體，隨著抗生素的廣泛應用，越來越多的皮提不動桿菌被鑒定為多重耐藥菌株(Wang et al., 2020)。根據巴斯德研究所MLST數據庫的最新數據，皮提不動桿菌的來源有人類、兔子、白鸛、火雞和魚類，其中人類是皮提不動桿菌及其許多變種的主要宿主，魚類可能是其新興宿主(Li et al., 2017; Wang et al., 2020)， 目前還未見植物源的皮提不動桿菌報道，本研究分離得到皮提不動桿菌lzy-1系首次從植物中分離到皮提不動桿菌。耐冷假單胞菌(Pseudomonaspsychrotolerans)的部分菌株在一定條件下可以促進植物生長(Liu et al., 2017; Kang et al., 2020)。藤黃短小桿菌(Curtobacteriumluteum)的菌株具有抗病原菌的作用(Suhandono et al. 2016)，且與甲霜靈同時處理黑胡椒能大幅減少線蟲感染，還能促進黑胡椒的生長并提高其產量(Bhai et al., 2017)。該結果表明，本研究分離得到的耐冷假單胞菌lzy-2和藤黃短小桿菌lzy-9可能具有潛在的促生和生防價值。自2010年以來， 對松尼索利黃體桿菌屬的報道較少， Akter和Hou(2018)從紅松根際土壤分離到一株能降解酪蛋白的松尼索利黃體桿菌MAH-14，Baltrus等(2019)對該菌進行了全基因組測序。本研究分離得到的松尼索利黃體桿菌lzy-12也具有較強的產蛋白酶能力，該類菌株可能參與宿主的代謝活動。截至目前，對噬尼古丁類節(jié)桿菌的報道也比較少，Maeng等(2018)首次從韓國土壤中分離到耐輻射的噬尼古丁類節(jié)桿菌，其可能能提高作物對輻射的耐受性。據此，我們推測來源于蘄艾的內生細菌噬尼古丁類節(jié)桿菌lzy-17也能提高其宿主的耐輻射能力。

表 4 內生細菌發(fā)酵液揮發(fā)物MICs和MBCsTable 4 MICs and MBCs of endophytic bacteria fermentation broth volatiles

芽孢桿菌屬是內生細菌的優(yōu)勢菌群之一，高地芽孢桿菌的菌株是新型馬鈴薯赤霉病的潛在生物防治劑(Li et al., 2019)，可以減輕低磷和高鹽脅迫對小麥的損傷(Yue et al., 2019)，此外，它們不僅能促進水稻生長，還能提高抗旱能力(Kumaravel et al., 2018)。從狐尾藻中分離得到耐受高濃度錳離子的蠟樣芽胞桿菌(B.cereus)WSE01不僅能促進狐尾藻的生長，還能增強其對錳離子的耐受性(Tang et al., 2020)。特基拉芽孢桿菌(B.tequilensis)的菌株不僅是防治番茄枯萎病最有效且環(huán)保的化學殺菌劑替代品，還能抑制稻瘟病菌及促進大白菜幼苗的生長(Li et al., 2018; Bhattacharya et al., 2019; Kang et al., 2019)。阿氏芽孢桿菌(B.aryabhattai)的菌株可以提高番茄對鹽的耐受性、提高海蓬子屬多枝檉柳種子的萌發(fā)率、促進植物生長并降解人工污染土壤中的磷胺(Figueira et al., 2019; Yoo et al., 2019; Dash et al., 2020)。除了單獨發(fā)揮作用，阿氏芽孢桿菌H26-2 和暹羅芽孢桿菌H30-3同時接種不僅可以促進大白菜生長，還能緩解高溫和干旱脅迫(Jeong et al., 2019)。來源于暹羅芽孢桿菌的菌株產生的揮發(fā)物可以在不需要生長素或乙烯/茉莉酸的情況下促進根的發(fā)育，從紫錐肉蓯蓉根中分離的暹羅芽孢桿菌CV5分泌的可輻射誘導的具有輻射防護作用的胞外多糖CV5，可以減少電離輻射產生的自由基損傷(Sihem et al., 2019)。Zhou等(2021)的研究表明，韓國芽孢桿菌181-22能促進水稻生長，緩解鎘脅迫。上述結果表明，本研究分離得到的高地芽孢桿菌lzy-4、蠟樣芽胞桿菌wnn1-2、特基拉芽孢桿菌wnn2-15、阿氏芽孢桿菌wnn2-22、暹羅芽孢桿菌wnn4-3和韓國芽孢桿菌lzy-21可能是潛在的生防或促生菌。

在水果粉、配方奶粉、香料和草藥中可檢測到蘇黎世干燥桿菌(Siccibacterturicensis)，它們和與食物相關的致病菌克洛諾斯桿菌屬(Cronobacter)成員有較近的親緣關系，2018年Lepuschitz等首次從奧地利口角炎患者的唇角分離到蘇黎世干燥桿菌，表明其具有致病性(Sarah et al., 2018)。本研究分離得到的蘇黎世干燥桿菌wnn1-3的生理功能還有待進一步研究。Sutton等(2018)利用計算機對已經測序的腸桿菌序列進行分析發(fā)現，羅根坎普氏腸桿菌(Enterobacterroggenkampii)是阿斯氏腸桿菌(E.asburiae)的同義詞，阿斯氏腸桿菌的菌株可以通過抑制鐵的吸收來降低玉米植株中鎘的毒性、具有殺線蟲和促進植物生長的活性，阿斯氏腸桿菌Vt-7揮發(fā)物對花生貯藏過程中產生的黃曲霉和黃曲霉毒素具有抗性(Mira et al., 2018; Sutton et al., 2018; Gong et al., 2019; Zhou et al., 2019)。該結果表明，本研究分離得到的羅根坎普氏腸桿菌wnn1-1可能具有生物防治功能。

本研究分離的菌株中，皮提不動桿菌lzy-1系首次從植物中分離到皮提不動桿菌，松尼索利黃體桿菌報道較少，已報道的與我們分離得到的其余11種內生菌同屬的菌株分別擁有各自有益的生物學功能，體現在促進生長、增強抗逆性、生物防治、生物修復和具有良好的抗菌效果等方面。因此，我們猜測，從蘄艾中分離得到的這些內生細菌，與蘄艾本身易于種植、植株高大、全草入藥及其良好抑菌效果之間有一定的關聯(lián)，可能是在長期進化中，內生菌菌株促進蘄艾生長，增強其對環(huán)境的耐受性；同時，它們也獲得了蘄艾本身的部分特性，從而實現與宿主植物共同進化。