樊 煒，馬 玲，閆文慧，張漢東，徐秀花，燕 云

（大同市第二人民醫(yī)院腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科1，病理科2，山西 大同 037000）

肺癌（lung cancer）是當(dāng)前威脅人類健康最嚴(yán)重的疾病之一，世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)發(fā)布，2020 年全球肺癌發(fā)病率為11.4%，死亡率為18.0%，已成為惡性腫瘤致死的首要原因[1]。在所有的肺癌病理分型中，非小細(xì)胞肺癌（non-small lung cancer）占肺癌總數(shù)的80%～85%，腺癌和鱗狀細(xì)胞癌約占所有非小細(xì)胞肺癌的80%[2]。多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于中晚期，盡管肺癌的治療方法在不斷進(jìn)展，但5 年生存率僅15%[3]。血清腫瘤標(biāo)志物、影像學(xué)以及病理學(xué)檢查是目前肺癌的主要檢查手段，但這些檢查方式在肺癌的臨床應(yīng)用中都具有自身的局限性。血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物特異性不足，影像學(xué)篩查肺癌假陽性率高，有輻射風(fēng)險(xiǎn)，目前都不能做到早期診斷肺癌，因此尋求早期診斷肺癌的生物標(biāo)志物仍然是一個(gè)很重要的研究方向。熱休克蛋白（heat shock proteins）是在細(xì)胞中廣泛表達(dá)的分子伴侶的成員，在蛋白質(zhì)折疊、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。Hsp90 是一種進(jìn)化上保守的分子伴侶，在各種應(yīng)激相關(guān)蛋白中最常見，癌細(xì)胞通常使用Hsp90的伴侶機(jī)制來獲得生存優(yōu)勢(shì)。因此，Hsp90 被認(rèn)為是“癌基因成癮”和維持惡性表型的重要促進(jìn)劑[4]。Hsp90α 是人類Hsp90 的4 種亞型之一，呈誘導(dǎo)性表達(dá)[5]。研究發(fā)現(xiàn)[6]，隨著腫瘤惡性程度增高，Hsp90α分泌量也升高，并認(rèn)為Hsp90α 可以作為腫瘤早期檢測(cè)一種新型腫瘤標(biāo)志物。本研究將檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌患者血漿Hsp90α 的表達(dá)水平，探討其在非小細(xì)胞肺癌臨床診斷和治療中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020 年8 月-2022 年1 月于大同市第二人民醫(yī)院腫瘤醫(yī)院經(jīng)臨床和病理確診為非小細(xì)胞肺癌患者61 例設(shè)為肺癌組，其中男38 例，女23 例；年齡49～82 歲，平均年齡（67.90±7.96）歲；腺癌35 例，鱗癌26 例。肺部良性疾病患者51 例設(shè)為肺部良性疾病組，其中男30 例，女21 例；年齡47～82 歲，平均年齡（72.02±10.89）歲；支氣管炎患者4例、支氣管哮喘3 例、慢性阻塞性肺疾病25 例、間質(zhì)性肺病3 例、肺部感染9 例、肺炎7 例。另以同期32例健康體檢人員作為健康對(duì)照組，其中男18 例，女14 例；年齡34～52 歲，平均年齡（45.09±4.67）歲。三組性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究中所有研究對(duì)象知情同意并簽署知情同意書，且該研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：肺癌組患者術(shù)后病理結(jié)果由2 位病理醫(yī)生根據(jù)WHO 肺癌組織學(xué)分型確診[7]，肺部良性疾病也符合臨床相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，且健康對(duì)照組均為體檢健康人群。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他嚴(yán)重系統(tǒng)疾病及惡性腫瘤；②隨訪資料不完善者。

1.3 方法 采用真空采血管采集待檢者空腹靜脈血2 ml，經(jīng)乙二胺四乙酸二鉀（ethylene diamine tetraacetic acid-K2，EDTA-K2）抗凝血分離血漿，使用RAYTO RT-6100 檢測(cè)血清中Hsp90α；2 ml 無抗凝劑靜脈血分離血清，使用邁瑞電化學(xué)發(fā)光儀BSCL2000 檢測(cè)其余指標(biāo) [癌胚抗原（CEA）、糖鏈抗原125（CA125）、細(xì)胞角質(zhì)蛋白19 片段（CYFRA21-1）、鱗狀細(xì)胞癌抗原（SCCAg）]，均嚴(yán)格按儀器及試劑盒說明進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以[M（P25，P75）]表示，兩組間差異比較采用秩和檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)。繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線以評(píng)價(jià)多種標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)肺癌臨床診斷中的效能，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組血清腫瘤標(biāo)志物水平比較 肺癌組Hsp90α、CEA、CA125、SCCAg、CYFRA21-1 高于肺部良性疾病組、健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 三組血清腫瘤標(biāo)志物水平比較[M（P25，P75）]

2.2 肺癌組不同病理類型患者血清標(biāo)志物水平比較腺 癌CEA、CA125 水平高于鱗癌，CYFRA21-1、SCCAg 水平低于鱗癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；鱗癌和腺癌Hsp90α 水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 肺癌組不同病理類型患者血清標(biāo)志物水平比較[M（P25，P75）]

2.3 Hsp90α 對(duì)肺癌的診斷價(jià)值評(píng)估 ROC 曲線分析顯示，血漿Hsp90α 在肺癌診斷中的最佳臨界值為101.99 ng/ml，當(dāng)以最佳臨界值作為cut-off 值時(shí)，其靈敏度為75.40%，特異度為74.50%，ROC 曲線下面積為0.77，見圖1。

圖1 Hsp90α 診斷肺癌的ROC 曲線圖

2.4 多種標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺癌的靈敏度及特異度影響 將Hsp90α 與其他腫瘤標(biāo)志物使用二項(xiàng)邏輯回歸方程進(jìn)行擬合，以獲得新的聯(lián)合診斷模型。將Hsp90α 分別于CEA、SCC、CYFRA21-1 組合發(fā)現(xiàn)最佳組合方式，結(jié)果顯示Hsp90α 結(jié)合CYFRA21-1 的AUC 為0.853（95%CI：0.774，0.913），高于單獨(dú)使用Hsp90α 的診斷效能（Z=2.165，P=0.030）。Hsp90α 分別與CEA、SCC 結(jié)合的診斷效能與單獨(dú)Hsp90α 比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Hsp90α、CEA、SCC、CYFRA21-1 四項(xiàng)聯(lián)合使用的AUC 為0.903（95%CI：0.832，0.951），高于Hsp90α 和CYFRA21-1聯(lián)合的診斷效能（Z=2.496，P=0.013）。當(dāng)使用特異性為90%時(shí)的值為陽性判定值，Hsp90α 的敏感度為21.30%，而Hsp90α 與CYFRA21-1 聯(lián)合使用的敏感度為55.70%，Hsp90α、CEA、SCC、CYFRA21-1 四項(xiàng)聯(lián)合使用的敏感度為75.40%。

3 討論

Hsp90 是一種普遍存在的分子伴侶，負(fù)責(zé)許多致癌蛋白的穩(wěn)定和成熟[8]。Hsp90 通過與參與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)、細(xì)胞的轉(zhuǎn)化以及細(xì)胞存活和凋亡等過程的受體相結(jié)合激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而刺激腫瘤細(xì)胞的異常增生[9，10]?；谶@一點(diǎn)，Hsp90 被認(rèn)為是一種抗癌治療靶點(diǎn)[11]。此外，研究發(fā)現(xiàn)[12，13]，Hsp90 抑制劑通過抑制腫瘤細(xì)胞中Hsp90 的表達(dá)來干擾腫瘤細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移，被認(rèn)為是目前具有開發(fā)前景的抗腫瘤藥物之一。Hsp90α 作為Hsp90 家族成員中的一員，由732 個(gè)氨基酸構(gòu)成，相對(duì)分子質(zhì)量為87 000。本研究的目的是評(píng)估Hsp90α 作為非小細(xì)胞肺癌早期診斷標(biāo)志物的價(jià)值。

通過研究結(jié)果證實(shí)，肺癌組Hsp90α、CEA、CA125、SCCAg、CYFRA21-1 高于肺部良性疾病組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明以上指標(biāo)在非小細(xì)胞肺癌和肺部良性疾病的鑒別上有一定的應(yīng)用價(jià)值。肺部良性疾病組Hsp90α、CEA、CA125、SCCAg、CYFRA21-1 高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明Hsp90α 和血清指標(biāo)在肺部良性疾病組織中也有表達(dá)。關(guān)于Hsp90α 在肺部良性疾病組織的表達(dá)尚存在爭議，其中張慶輝等[14]研究顯示，Hsp90α 在肺部良性疾病組織中也有表達(dá)。姜源等[15]研究表明，肺部良性疾病組血漿Hsp90α 表達(dá)水平與健康對(duì)照組無明顯差異。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腺癌CEA、CA125 水平高于鱗癌，CYFRA21-1、SCCAg 水平低于鱗癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；鱗癌和腺癌Hsp90α 水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與既往文獻(xiàn)報(bào)道一致[16-18]。目前，關(guān)于Hsp90α 在腺癌和鱗癌的區(qū)分上有不同的結(jié)論，有研究表明[19]，Hsp90 水平與鱗狀細(xì)胞癌組織學(xué)呈正相關(guān)，但有的結(jié)論持相反的觀點(diǎn)，認(rèn)為Hsp90 在肺鱗癌中的陽性表達(dá)率低于在肺腺癌中的表達(dá)[20]?？梢钥闯觯P(guān)于Hsp90α 在腺癌和鱗癌的區(qū)分上有一定爭議，有待進(jìn)一步探討。

此外，本研究構(gòu)建了ROC 曲線，結(jié)果顯示血漿Hsp90α 在肺癌診斷中的最佳臨界值為101.99 ng/ml，當(dāng)以最佳臨界值作為cut-off 值時(shí)，其靈敏度為75.40%，特異度為74.50%，ROC 曲線下面積為0.77，表明Hsp90α 檢測(cè)在肺癌診斷中具有較高的靈敏性，在肺癌早期診斷中具有一定的臨床意義。為進(jìn)一步提高肺癌的診斷效能，本研究還評(píng)估了單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物及多項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)在肺癌診斷中的靈敏度和特異性，結(jié)果顯示Hsp90α、CYFRA21-1 聯(lián)合檢測(cè)優(yōu)于單獨(dú)使用Hsp90α 以及Hsp90α 與其他兩項(xiàng)的聯(lián)合檢測(cè)，且Hsp90α、CEA、SCC、CYFRA21-1 四項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的效果最佳。單獨(dú)使用Hsp90α 診斷時(shí)，當(dāng)特異性為90%時(shí)的值作為陽性判定值時(shí)，Hsp90α的敏感度僅為21.30%。而Hsp90α 聯(lián)合其他三項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物診斷時(shí)，敏感度提高到75.40%。因此，聯(lián)合其他肺癌標(biāo)志物檢測(cè)可提高肺癌的檢出率。

綜上所述，Hsp90α 可作為非小細(xì)胞肺癌輔助診斷的血清標(biāo)志物之一，與其他標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)可提高非小細(xì)胞肺癌的檢出率，在非小細(xì)胞肺癌的早期診斷中具有重要的臨床價(jià)值。