劉海春，胡晨旭*，王家明，劉瑞，李敬華

（1.龍口南山養(yǎng)生谷腫瘤醫(yī)院，南山健康產(chǎn)業(yè)研究院，山東龍口 265718）

（2.天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院，工業(yè)發(fā)酵微生物教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300457）

（3.天津小薇生物科技有限公司，天津 301799）（4.中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)藥信息研究所，北京 100700）

藥食同源食品具有功能溫和、副作用小和穩(wěn)定性好等諸多優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已被廣泛用于臨床預(yù)防和康復(fù)治療中。藥食同源組方的多靶點(diǎn)作用是通過對機(jī)體整體調(diào)整而發(fā)揮出相應(yīng)的藥理活性和免疫作用[1,2]。腫瘤患者術(shù)后身體虛弱、免疫力差、腸道菌群失調(diào)，嚴(yán)重影響患者圍手術(shù)期的恢復(fù)及預(yù)后，藥食同源中藥在腫瘤病人圍手術(shù)期恢復(fù)及預(yù)后上的應(yīng)用越來越廣泛[3-6]。

人參性溫味甘，大補(bǔ)元?dú)猓瑥?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津，安神。茯苓性平味甘，利水滲濕，健脾，寧心。黃精性平味甘，補(bǔ)氣養(yǎng)陰，健脾，潤肺，益腎。當(dāng)歸性溫味甘，補(bǔ)血活血，調(diào)經(jīng)止痛，潤腸通便。山藥性溫味甘，健脾，補(bǔ)肺，固腎，益精。蓮子性平味甘，補(bǔ)脾止瀉，益腎澀精，養(yǎng)心安神。海參味甘咸，補(bǔ)腎經(jīng)，益精髓，抗腫瘤，增強(qiáng)免疫力。四君子湯（《太平惠民和劑局方》），九轉(zhuǎn)黃精丹（《太平惠民和劑局方》），海蛤散（《圣濟(jì)總錄》），消瘤丹（《洞天奧旨》），活血散癭湯（《外科正宗》），益氣清金湯（《金鑒》），消濕化怪湯（《石室秘錄》），十全散《傳信適用方》等古方均頻繁使用以上藥食同源的中藥，主要用于古代腫瘤及康復(fù)治療。人參和茯苓健脾益氣，溫而不燥；黃精和當(dāng)歸滋陰養(yǎng)血；山藥和蓮子增強(qiáng)健脾益氣，安神之功效；海參則具有增強(qiáng)補(bǔ)血免疫之功效。整個(gè)組方作為藥食同源Ⅲ號組方。藥食同源Ⅳ號則是Ⅲ號中的海參酶解為小分子海參肽，更有利于體弱患者腸道吸收，補(bǔ)充營養(yǎng)，增強(qiáng)免疫力，加快康復(fù)。

益生菌是以腸道為主要作用靶點(diǎn)來調(diào)控預(yù)防各類疾病發(fā)生的有益活性微生物[7,8]，益生菌進(jìn)入腸道后與宿主菌群相互作用，產(chǎn)生一些特定的代謝產(chǎn)物，如短鏈脂肪酸、過氧化氫、雙乙酰和細(xì)菌素等，從而抑制病原菌的生長[9,10]。大量研究報(bào)道，益生菌在腫瘤免疫中發(fā)揮著重要作用[11-15]。本文以藥食同源組方與復(fù)合益生菌制劑為研究對象，研究藥食同源組方組（Ⅲ號）、藥食同源改良組（Ⅳ號）、益生菌組（Ⅴ號）和Ⅳ號與益生菌聯(lián)用組（Ⅵ號）對模型小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、巨噬細(xì)胞吞噬能力、脾淋巴細(xì)胞增殖和血清中IgG、IgA和IgM生成水平的影響，為進(jìn)一步研究藥食同源組方與益生菌制劑聯(lián)合使用，增強(qiáng)免疫作用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與動(dòng)物

藥食同源Ⅲ號固體沖劑主要由人參、茯苓、黃精、當(dāng)歸、山藥、蓮子和海參制備而成（簡稱Ⅲ號），藥食同源Ⅳ號固體沖劑主要由人參、茯苓、黃精、當(dāng)歸、山藥、蓮子和海參肽制備而成（簡稱Ⅳ號）。海參肽由蛋白酶酶解后獲取凍干粉。藥材均購自北京同仁堂（天津金元寶商廈店）；新鮮海參購自天津王頂?shù)趟a(chǎn)海鮮商貿(mào)市場；乳雙歧桿菌BR001、植物乳桿菌LZ010、鼠李糖乳桿菌GS013由天津小薇生物有限公司提供，活性300億CFU/g。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明小鼠生產(chǎn)許可證：SCXK（軍）2007-004，合格證號：00549571。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

二甲基亞砜（DMSO），磷酰胺（CTX），北京索來寶公司；RPMI1640培養(yǎng)基，Hank's溶液，刀豆蛋白（Con A），海博生物公司；胎牛血清，瑞根特公司；四甲基偶氮唑鹽（MTT），美國Sigma公司；蛋白酶，西亞公司；IFN-γ、TNF-α、IL-2和IgG試劑盒，上海江萊生物股份有限公司。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

TJS-3000超聲波提取濃縮機(jī)，寧波新芝生物科技有限公司；CO2培養(yǎng)箱，美國賽默飛世爾科技公司；ALPHA1-4冷凍干燥機(jī)，德國Marin Christ；MIKRO-220R冷凍離心機(jī)，德國Hettich科學(xué)儀器有限公司；RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；i3x酶標(biāo)儀，美國MD公司；PB160Z-S電子天平，日本島津公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 CTX模型建立與給藥

SPF級Balb/c小鼠60只，雄性，體質(zhì)量18~20 g，溫度20~25 ℃，相對濕度50%±5%，光照時(shí)間12 h/12 h環(huán)境下飼養(yǎng)一周后，按國家新藥（西藥）臨床前研究指導(dǎo)原則匯編[16]的方法建立環(huán)磷酰胺（CTX）所致免疫功能損傷模型，除空白對照組小鼠腹腔注射等體積生理鹽水，其余各組小鼠連續(xù)腹腔注射4 d環(huán)磷酰胺（CTX），注射量為100 mg/kg。給藥后4 d，第4天檢測眼眶血白細(xì)胞數(shù)。造模成功標(biāo)準(zhǔn)：CTX模型組小鼠的白細(xì)胞數(shù)明顯低于空白對照組（P＜0.01），且出現(xiàn)體重下降，脫毛，免疫器官組織損傷等現(xiàn)象。造模1 d后給藥，每天灌胃1次，連續(xù)給藥14 d?？瞻讓φ战M和模型組每天服用等體積的生理鹽水。

1.2.2 免疫器官重量指數(shù)測定

各組小鼠14 d給藥后，禁食12 h（不禁水），稱體質(zhì)量，頸椎脫臼處死小鼠，獲取胸腺和脾臟，濾紙去除殘血，記錄質(zhì)量。取眼球血清，胸腺、脾臟等器官組織，并保存于零下80 ℃超低溫冰箱中。免疫器官重量指數(shù)按下列公式計(jì)算：

式中：

S——胸腺指數(shù)，g/kg；

m——小鼠體質(zhì)量，kg；

ms——脾臟質(zhì)量，g；

T——胸腺指數(shù)，g/kg；

mt——胸腺質(zhì)量，g。

1.2.3 巨噬細(xì)胞吞噬率、吞噬指數(shù)的測定

末次給藥前3 d，每組隨機(jī)抽取小鼠10只，腹腔注射1 mL淀粉肉湯（60 mg/mL）；末次灌胃后第2天，向小鼠腹腔注射1 mL（5%）的雞紅細(xì)胞生理鹽水混懸液，輕揉小鼠腹部并吸出小鼠腹腔液，滴1滴于潔凈的載玻片上，瑞氏染色5 min，油鏡下觀察。公式如下：

式中：

P——吞噬百分率，%；

n1——吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)；

n0——巨噬細(xì)胞總數(shù)；

I——吞噬指數(shù)；

n2——巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的總數(shù)。

1.2.4 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

無菌環(huán)境下取脾臟，置于含Hank's液的平皿中，配置成細(xì)胞懸液，用RPMI 1640培養(yǎng)液配置細(xì)胞濃度每毫升5×106個(gè)，于96孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)，每孔200 μL。每個(gè)樣本設(shè)Con A液及空白對照孔，恒濕培養(yǎng)箱中孵育72 h（37 ℃和5% CO2）。結(jié)束培養(yǎng)前4 h，每孔中加入10 μL MTT溶液（5 mg/mL），經(jīng)4 h培養(yǎng)后，每孔中加入100 μL DMSO，振搖10 min，待結(jié)晶溶解后，酶標(biāo)儀讀取OD值（570 nm波長）。

式中：

SI——刺激指數(shù)；

OD1——試驗(yàn)孔OD570值；

OD0——對照孔OD570均值。

1.2.5 NK細(xì)胞活性的測定

采用MTT法測定自然殺傷（NK）細(xì)胞活性，以小鼠脾淋巴細(xì)胞懸液（每毫升5×105個(gè)）為效應(yīng)細(xì)胞。以YAC-1（每毫升5×104個(gè)）細(xì)胞為靶細(xì)胞。效靶細(xì)胞孔加入效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞各100 μL；靶細(xì)胞孔加入靶細(xì)胞和完全培養(yǎng)液各100 μL；效應(yīng)細(xì)胞孔加入靶細(xì)胞和完全培養(yǎng)液各100 μL，孵育48 h（37 ℃，5% CO2），再加入MTT溶液10 μL（5 mg/mL），繼續(xù)培養(yǎng)4 h，再將各100 μL上清液加入96孔板，每孔加100 μL DMSO，振搖10 min。酶標(biāo)儀讀取吸光度（570 nm）。

式中：

K——NK細(xì)胞的殺傷活性，%；

A1——效靶細(xì)胞吸光度；

A2——效應(yīng)細(xì)胞吸光度；

A3——靶細(xì)胞吸光度。

1.2.6 血清免疫球蛋白的測定

取小鼠血清樣本，檢測免疫球蛋白IgG、IgA和IgM水平（具體操作流程嚴(yán)格遵循試劑盒說明書）。

1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，方差分析組間差異，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 藥食同源組方對免疫功能低下小鼠免疫臟器指數(shù)的影響

本文采用經(jīng)典CTX模型，可通過抑制快速增殖的血細(xì)胞DNA合成從而廣泛抑制機(jī)體免疫功能[17]。胸腺和脾臟是機(jī)體主要的免疫器官，胸腺和脾臟指數(shù)是衡量機(jī)體非特異性免疫能力的重要指標(biāo)之一。如下表1數(shù)據(jù)顯示，與空白對照組相比，模型組脾臟指數(shù)（2.11 g/kg）和胸腺指數(shù)（1.22 g/kg）均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；與模型組相比，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ號組脾臟指數(shù)（2.32、2.54、2.52、2.82 g/kg）和胸腺指數(shù)（1.46、1.67、1.50、1.92 g/kg）顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；Ⅳ與Ⅲ相比較，胸腺指數(shù)明顯升高（1.67 g/kg＞ 1.46 g/kg），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），說明海參肽起到了積極的免疫作用。Ⅵ與Ⅳ相比較，脾臟指數(shù)明顯升高（1.92 g/kg＞1.67 g/kg），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01），說明益生菌具有促進(jìn)藥食同源物質(zhì)吸收的作用，增加了藥食同源的效果；同時(shí)益生菌本身也具有促進(jìn)免疫器官指數(shù)增加的作用；因此益生菌組與藥食同源改良組結(jié)合，具有協(xié)同增效作用。但Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ號組與空白組正常小鼠免疫器官相比，均無法達(dá)到非造模正常水平，其中Ⅵ號組最接近正常小鼠免疫器官水平。張永娟等[18]研究亦表明海洋縊蟶多肽具有顯著提高脾臟和胸腺指數(shù)（3.72和1.16）的作用，其中脾臟指數(shù)高于組方Ⅲ~Ⅵ；但胸腺指數(shù)低于組方Ⅲ~Ⅵ，表明多肽具有增強(qiáng)免疫功能作用，同時(shí)不同組方或者多肽對不同免疫器官具有不同程度的修復(fù)與促進(jìn)生長作用。

表1 組方Ⅲ~Ⅵ對免疫力低下模型小鼠免疫器官的影響Table 1 Effects of Ⅲ~Ⅵ groups on thymus indeхes and spleen indeхes of immunosuppressive mice (±s, n=10)

表1 組方Ⅲ~Ⅵ對免疫力低下模型小鼠免疫器官的影響Table 1 Effects of Ⅲ~Ⅵ groups on thymus indeхes and spleen indeхes of immunosuppressive mice (±s, n=10)

注：與空白對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；Ⅳ與Ⅲ比較，◇P<0.05，◇◇P<0.01；Ⅵ與Ⅳ比較，◆P<0.05，◆◆P<0.01。下表同。

組別 給藥劑量/(mg/kg) 脾臟指數(shù)/ (g/kg) 胸腺指數(shù)/ (g/kg) 對照組 3.46±0.65 2.63±0.41 模型組 2.11±0.39△ 1.22±0.31△△Ⅲ 400 2.32±0.68▲ 1.46±0.86▲ Ⅳ 400 2.54±0.21◇◇ 1.67±0.43◇ Ⅴ 200 2.52±0.66▲▲ 1.50±0.86▲▲Ⅵ 600 2.82±0.62◆◆ 1.92±0.92◆◆

2.2 藥食同源組方對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能及NK細(xì)胞活性的影響

如表2所示，模型組小鼠的吞噬百分率（46.55%）和吞噬指數(shù)（0.41）均顯著降低（P＜0.05），表明建模成功。與模型組比較，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組可不同程度提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)（0.43、0.45、0.44、0.62）和吞噬百分率（47.66%、50.30%、48.23%、58.08%）（P＜0.05或P＜0.01），但均未達(dá)到空白對照組吞噬百分率（66.43%）和吞噬指數(shù)（0.71）水平。其中Ⅵ組吞噬能力最強(qiáng)，說明益生菌與藥食同源組作用靶點(diǎn)不同，且益生菌能有效促進(jìn)藥食同源組方吸收，可更大程度提高吞噬細(xì)胞數(shù)量，增強(qiáng)免疫抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能。劉春紅等[19]研究表明植物乳桿菌C88聯(lián)合人參多糖對巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)為0.05，具有一定的吞噬能力，但吞噬指數(shù)明顯低于Ⅲ~Ⅵ組（0.4~0.6）。

表2 組方Ⅲ~Ⅵ各組小鼠吞噬功能、NK細(xì)胞活性與淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)的比較Table 2 Effects ofⅢ~Ⅵ groups on the phagocytic rate, phagocytic indeх, NK cells activity and lymphocytes proliferation of immunosuppressive mice (±s, n=10)

表2 組方Ⅲ~Ⅵ各組小鼠吞噬功能、NK細(xì)胞活性與淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)的比較Table 2 Effects ofⅢ~Ⅵ groups on the phagocytic rate, phagocytic indeх, NK cells activity and lymphocytes proliferation of immunosuppressive mice (±s, n=10)

組別 吞噬百分率/% 吞噬指數(shù)/% NK細(xì)胞殺傷活性/% 淋巴細(xì)胞刺激指數(shù) 對照組 66.43±2.12 0.71±0.03 0.72±0.02 2.01±0.08▲▲ 模型組 46.55±2.54ΔΔ 0.41±0.02ΔΔ 0.29±0.01 1.28±0.02 Ⅲ 47.66±2.35▲ 0.43±0.03▲▲ 0.35±0.02▲ 1.39±0.01▲ Ⅳ 50.30±3.04◇ 0.45±0.03◇ 0.43±0.03◇ 1.45±0.08▲ Ⅴ 48.23±2.90 0.44±0.02 0.36±0.02▲▲ 1.42±0.06▲ Ⅵ 58.08±2.42◆◆ 0.62±0.03◆ 0.71±0.02◆◆ 1.43±0.02◆◆▲

NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞、病毒、胞內(nèi)寄生菌都具有極強(qiáng)的清除作用，在抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)方面有重要意義。如表2所示，與模型組（0.29）相比，益生菌組（ :0.36Ⅴ ）與藥食同源組方組（ :0.35Ⅲ ）NK細(xì)胞殺傷活性相近，說明益生菌與藥食同源組作用相近。而藥食同源組方（ :0.35Ⅲ ）和（ :0.43Ⅳ ）使小鼠NK細(xì)胞活性明顯升高（P＜0.05），說明藥食同源改良多肽組作用明顯；同時(shí)益生菌與藥食同源聯(lián)用組（ :0.71Ⅵ ）的NK細(xì)胞活性超過其它組，說明益生菌在自身腸道免疫作用基礎(chǔ)上，進(jìn)一步發(fā)揮作用，促進(jìn)藥食同源組的物質(zhì)吸收及代謝，達(dá)到協(xié)同增效的作用，共同增加NK細(xì)胞的殺傷活性，清除作用，共同起到免疫增強(qiáng)作用。劉紅萍等[20]研究發(fā)現(xiàn)白芷多糖對免疫抑制小鼠NK細(xì)胞殺傷活性具有明顯增強(qiáng)作用（0.53），且殺傷活性高于組方Ⅲ~Ⅴ，卻低于組方Ⅵ（ :0.71Ⅵ ），也表明Ⅵ對腸道與機(jī)體免疫同時(shí)進(jìn)行調(diào)節(jié)，促進(jìn)藥食同源組方代謝吸收，因此NK細(xì)胞殺傷活性更顯著。各組方（Ⅲ~Ⅵ）針對NK細(xì)胞活性具有不同程度增強(qiáng)作用，為臨床免疫及腫瘤治療提供有力的理論依據(jù)。

2.3 藥食同源組方對免疫功能低下小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的影響

由表2可知，與空白對照組（2.01）相比，模型組小鼠T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)（1.28）顯著下降（P＜0.01）。與模型組相比，Ⅵ組小鼠淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)均不同程度提高Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ組小鼠淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)均不同程度提高（1.39、1.45、1.42、1.43）（P＜0.05），但都低于空白對照組。同時(shí)四組之間數(shù)據(jù)（Ⅲ~Ⅵ）差異不顯著，尤其益生菌與藥食同源聯(lián)合使用組（Ⅵ），未見其水平優(yōu)于其它三組，說明對脾淋巴細(xì)胞增殖并未起到協(xié)同增效的作用。將以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與劉紅萍等研究的白芷多糖（2.10）數(shù)據(jù)相對比[20]，Ⅲ~Ⅵ組刺激指數(shù)都低于白芷多糖組，表明不同物質(zhì)促淋巴細(xì)胞增殖能力顯著不同，這與藥食同源組方的多靶點(diǎn)作用有著一定關(guān)系。

2.4 藥食同源組方對免疫功能低下小鼠血清免疫球蛋白的影響

免疫球蛋白IgG、IgA和IgM為體內(nèi)含量最多的免疫球蛋白，反映體液免疫功能[21]。IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，具有抗菌、抗病毒等免疫活性作用；IgG還可以引起細(xì)胞毒作用而殺死腫瘤細(xì)胞；IgA在血清中含量僅次于IgG，對經(jīng)黏膜途徑感染的病原體具有免疫抵抗作用；IgM是受抗原刺激后最先產(chǎn)生的抗體，具有較強(qiáng)的殺菌和抗病毒等免疫活性[22,23]。如表3所示，與空白組（261.21、42.56、103.22 mg/L）相比，模型組小鼠血清IgG、IgA和IgM質(zhì)量濃度明顯降低（126.26、16.65、73.27 mg/L）（均P＜0.01）。與模型組相比，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ組小鼠血清IgG（156.83、224.21、163.21、253.35 mg/L）、IgA（20.04、34.86、22.09、41.17 mg/L）和IgM（77.45、84.01、78.23、100.28 mg/L）質(zhì)量濃度均不同程度提高（P＜0.05）。其中Ⅵ號組方免疫球蛋白提高水平明顯優(yōu)于其余Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ號水平，其中益生菌組Ⅴ也起到一定促進(jìn)免疫球蛋白水平增加作用。綜上說明腸道益生菌通過定植腸道，起到促進(jìn)免疫球蛋白水平增加作用，同時(shí)益生菌促進(jìn)藥食同源組多種有益物質(zhì)吸收代謝，增強(qiáng)藥食同源組免疫作用，共同起到協(xié)同增效作用。石惠芳等[24]采用益生菌發(fā)酵胡蘿卜水溶多糖（YH）調(diào)節(jié)小鼠免疫功能，研究結(jié)果與聯(lián)合組Ⅵ號比較，IgG質(zhì)量濃度：Ⅵ（253.35 mg/L）＜YH（1 360 mg/L）；IgA質(zhì)量濃度：Ⅵ（41.17 mg/L）＞YH（16.94 mg/L）；IgM質(zhì)量濃度：Ⅵ（100.28 mg/L）＞YH（12.97 mg/L）；以上數(shù)據(jù)說明不同物質(zhì)作用靶點(diǎn)不同，對不同類型免疫球蛋白生成水平影響亦明顯不同，導(dǎo)致免疫功能作用也明顯不同。

表3 組方Ⅲ~Ⅵ對免疫力低下模型小鼠血清免疫球蛋白的影響Table 3 Effects of Ⅲ~Ⅵ groups on IgG, IgA and IgM production of immunosuppressive mice (±s, n=10)

表3 組方Ⅲ~Ⅵ對免疫力低下模型小鼠血清免疫球蛋白的影響Table 3 Effects of Ⅲ~Ⅵ groups on IgG, IgA and IgM production of immunosuppressive mice (±s, n=10)

組別 IgG質(zhì)量濃度 /(mg/L) IgA質(zhì)量濃度 /(mg/L) IgM質(zhì)量濃度/(mg/L) 對照組 261.21±32.53 42.56±5.82 103.22±4.34 模型組 126.26±19.04 16.65±4.54 73.27±6.03 Ⅲ 156.83±20.32▲ 20.04±6.09▲▲ 77.45±9.03▲ Ⅳ 224.21±26.63◇ 34.86±5.42◇ 84.01±3.65◇◇Ⅴ 163.21±23.12 22.09±8.01 78.23±5.55 Ⅵ 253.35±23.42◆◆ 41.17±3.28◆ 100.28±8.87◆◆

3 結(jié)論

目前實(shí)驗(yàn)研究中多用到的免疫抑制模型有輻射損傷模型、免疫抑制劑損傷模型和基因敲除模型；其中免疫抑制劑環(huán)磷酰胺（CTX）模型最為常見。本文旨在研究藥食同源組方與益生菌聯(lián)合使用，觀察對CTX誘導(dǎo)免疫低下小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用。以腹腔注射CTX建立小鼠免疫低下模型，研究組方Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ對小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、吞噬能力、脾淋巴細(xì)胞增殖以及血清中IgG、IgA和IgM生成水平的影響。CTX小鼠免疫低下模型中，免疫器官胸腺和脾臟細(xì)胞受到損傷，導(dǎo)致模型組小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、吞噬能力、脾淋巴細(xì)胞增值能力明顯低于于正常對照組，用組方（Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ）對免疫功能低下小鼠灌胃14 d后，小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)升高效果顯著，NK細(xì)胞活性增強(qiáng)，巨噬細(xì)胞吞噬功能增強(qiáng)，同時(shí)對脾淋巴細(xì)胞具有明顯增殖作用，促進(jìn)淋巴細(xì)胞免疫效應(yīng)。脾淋巴細(xì)胞增殖能力結(jié)果說明，益生菌（Ⅴ）與藥食同源組方（Ⅲ和Ⅳ）相比，統(tǒng)計(jì)學(xué)無顯著差異。免疫球蛋白檢測結(jié)果顯示，藥食同源組方Ⅲ和Ⅳ均有顯著增強(qiáng)血清中IgG、IgA和IgM的作用；對比Ⅲ和Ⅳ，表明小分子活性肽有利于機(jī)體吸收，Ⅳ尤其適合體質(zhì)虛脫機(jī)體使用，因此Ⅳ作用更明顯。益生菌對腸道具有調(diào)節(jié)作用，可緩解如腫瘤病人長期服用抗生素引起的腸道紊亂，更有利于藥食同源組方發(fā)揮作用；因此藥食同源組方與益生菌聯(lián)合使用組（Ⅵ）提高免疫球蛋白IgG、IgA和IgM效果尤其顯著。綜上所述，組方Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ可提高免疫低下小鼠的非特異性和特異性免疫功能，本研究可為藥食同源組方與益生菌免疫增強(qiáng)劑的開發(fā)提供理論依據(jù)。