陸萍 顧心悅 仇婷婷 石國(guó)忠 林麗 房旖旎 蔣麗君

（1上海市松江區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心，上海 201600；2上海市松江區(qū)新浜鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村服務(wù)中心，上海 201605）

農(nóng)殘快速檢測(cè)技術(shù)是排查產(chǎn)地和流通環(huán)節(jié)農(nóng)產(chǎn)品安全隱患的一種重要手段，在村鎮(zhèn)基層檢測(cè)部門(mén)落實(shí)屬地化農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管中發(fā)揮了重要作用[1]。目前，蔬菜農(nóng)殘快速檢測(cè)方法基本按照《G B/T 5009.199-2003蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)》執(zhí)行,其中，酶抑制法所能檢測(cè)的項(xiàng)目?jī)H局限于有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，因此，檢測(cè)項(xiàng)目的局限性、檢測(cè)設(shè)備的精確性等問(wèn)題已成為目前蔬菜農(nóng)殘快速檢測(cè)中亟待解決的難題。膠體金是一種常用的標(biāo)記技術(shù)，是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)，近年來(lái)已在生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域中得到了廣泛使用。膠體金農(nóng)殘快速檢測(cè)的技術(shù)是一種操作簡(jiǎn)單的農(nóng)殘快速檢測(cè)方法，其檢測(cè)結(jié)果與色譜儀檢測(cè)結(jié)果一致或相近似。為加快膠體金農(nóng)殘快速檢測(cè)技術(shù)的推廣應(yīng)用，現(xiàn)將其技術(shù)原理以及在實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用結(jié)果介紹如下，以期進(jìn)一步提升蔬菜農(nóng)殘速測(cè)技術(shù)能力和實(shí)驗(yàn)室綜合檢測(cè)水平。

1 膠體金農(nóng)殘快速檢測(cè)的技術(shù)原理

膠體金農(nóng)殘快速檢測(cè)技術(shù)是綜合膠體化學(xué)、有機(jī)合成化學(xué)、免疫學(xué)、物理學(xué)和材料學(xué)等，實(shí)現(xiàn)復(fù)雜的原理與簡(jiǎn)單的操作相統(tǒng)一。以啶蟲(chóng)脒農(nóng)藥的膠體金快速檢測(cè)為例，采用了抗原抗體的特異性反應(yīng)以及側(cè)向?qū)游龊湍z體金技術(shù)進(jìn)行樣本中啶蟲(chóng)脒分子的快速定性檢測(cè)[2]。樣本中啶蟲(chóng)脒殘留農(nóng)藥在流動(dòng)過(guò)程中與膠體金標(biāo)記的特異性單克隆抗體相結(jié)合，抑制了抗體和NC膜檢測(cè)線（T線）上的啶蟲(chóng)脒—BSA偶聯(lián)物的結(jié)合，從而產(chǎn)生檢測(cè)線顏色的變化。通過(guò)檢測(cè)線與質(zhì)控線（C）顏色深淺比較，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)樣品中啶蟲(chóng)脒殘留情況的定性檢測(cè)，見(jiàn)圖1。

圖1 樣品待測(cè)液加入膠體金檢測(cè)卡結(jié)果顯示

結(jié)果判斷：（1）陰性（一）：T線（檢測(cè)線，靠近加樣孔一端）顯色比C線（對(duì)照線）深或一樣深，表明樣品中啶蟲(chóng)脒農(nóng)藥殘留濃度低于檢測(cè)限量值或無(wú)啶蟲(chóng)脒農(nóng)藥殘留。（2）陽(yáng)性（+）：T線顯色比C線淺，表明樣品中啶蟲(chóng)脒農(nóng)藥殘留濃度高于檢測(cè)限量值，且T線越淺表明樣品中啶蟲(chóng)脒農(nóng)藥殘留濃度越高。（3）無(wú)效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明操作過(guò)程不正確或檢測(cè)卡已變質(zhì)損壞，在此情況下，應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，并用新的檢測(cè)卡重新測(cè)試。

2 膠體金農(nóng)殘快速檢測(cè)技術(shù)在實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用

根據(jù)上海市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管工作實(shí)施要求，對(duì)一些常規(guī)農(nóng)藥指標(biāo)進(jìn)行重點(diǎn)篩查，現(xiàn)以啶蟲(chóng)脒農(nóng)藥為例，開(kāi)展免疫膠體金檢測(cè)卡的操作實(shí)驗(yàn)應(yīng)用[3]，以切實(shí)提高檢測(cè)的靶向性和精準(zhǔn)性。

2.1 儀器和試劑材料

上海瑞鑫科技儀器有限公司生產(chǎn)的C N Y-1218D多功能農(nóng)藥殘留速測(cè)儀，電子天平，啶蟲(chóng)脒免疫膠體金檢測(cè)卡，專用稀釋液，移液槍，50 mL離心管，1.5 mL離心管，一次性滴管等。

2.2 樣品前處理

選擇有代表性的新鮮樣品（若是采用冷藏樣品，檢測(cè)前需恢復(fù)至室溫），從不同葉片或不同部位取樣，剪碎成1 cm左右見(jiàn)方的碎片，稱取2 g碎片樣品于50 mL離心管中，加入5 mL專用稀釋液，手動(dòng)顛倒混勻（振幅50次/min），充分清洗樣品2 min，靜置1 min，得到樣品待測(cè)液。

2.3 檢測(cè)卡檢測(cè)

從包裝袋中取出免疫膠體金檢測(cè)卡和一次性滴管。用滴管吸取3滴（約100 ul）待測(cè)液滴入樣孔中，加樣后開(kāi)始計(jì)時(shí)，5～8 min后讀取檢測(cè)結(jié)果（其他時(shí)間檢測(cè)的結(jié)果則判讀無(wú)效），讀取檢測(cè)結(jié)果時(shí)，檢測(cè)卡宜水平放置于觀察者的正面，切勿將檢測(cè)卡倒置。

2.4 上機(jī)測(cè)定

進(jìn)入CNY-1218D多功能農(nóng)藥殘留速測(cè)儀主頁(yè)面，點(diǎn)擊膠體金軟件，在用戶設(shè)置頁(yè)面輸入生產(chǎn)單位、樣品名稱、檢驗(yàn)員等信息；點(diǎn)擊檢測(cè)界面，將2.3中的檢測(cè)卡插入卡槽，啟動(dòng)檢測(cè)，查看檢測(cè)結(jié)果。

2.5 膠體金農(nóng)殘快檢技術(shù)應(yīng)用

2.5.1 添加啶蟲(chóng)脒農(nóng)藥檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

在空白對(duì)照膠體金檢測(cè)結(jié)果為陰性的條件下，以啶蟲(chóng)脒為例進(jìn)行農(nóng)藥添加實(shí)驗(yàn)，在50 uL 20%啶蟲(chóng)脒可溶液劑中加10 mL提取液，混勻作待測(cè)液，從包裝袋中取出免疫膠體金檢測(cè)卡和一次性滴管，用滴管吸取3滴（約100 uL）待測(cè)液滴入樣孔中，加樣后開(kāi)始計(jì)時(shí)，5～8 min后讀取檢測(cè)結(jié)果（其它時(shí)間結(jié)果判讀無(wú)效），重復(fù)做3次，若結(jié)果均為陽(yáng)性,則表明檢測(cè)定性準(zhǔn)確。

2.5.2 膠體金技術(shù)樣品檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

為了解膠體金快速檢測(cè)技術(shù)在常規(guī)農(nóng)藥和不同蔬菜品種中的應(yīng)用結(jié)果，筆者擴(kuò)大了檢測(cè)范圍，對(duì)夜開(kāi)花、茄子、尖椒、空心菜、米莧、黃瓜等6種蔬菜中的氯氟氰菊酯、噠螨靈、毒死蜱、啶蟲(chóng)脒、百菌清、滅蠅胺、蚍蟲(chóng)林等7種農(nóng)藥進(jìn)行了檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同蔬菜品種的農(nóng)殘檢測(cè)結(jié)果

3 結(jié) 論

實(shí)驗(yàn)證實(shí)，膠體金農(nóng)殘快速檢測(cè)技術(shù)是農(nóng)殘快速檢測(cè)上的一項(xiàng)突破性技術(shù)，該技術(shù)彌補(bǔ)了傳統(tǒng)檢測(cè)方法在檢測(cè)參數(shù)、檢測(cè)樣品等方面的局限性。筆者以啶蟲(chóng)脒為例，從樣品制作、樣品檢測(cè)、結(jié)果識(shí)別等方面做了檢測(cè)技術(shù)介紹，并通過(guò)對(duì)不同蔬菜品種和不同農(nóng)藥進(jìn)行免疫膠體金檢測(cè)應(yīng)用實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步驗(yàn)證了該技術(shù)具有檢測(cè)速度快、靈敏度高、穩(wěn)定性好、操作便捷等性能優(yōu)勢(shì)。同時(shí)，有效開(kāi)展蔬菜農(nóng)殘快速檢測(cè)工作是適應(yīng)新時(shí)期農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的發(fā)展和趨勢(shì)，膠體金檢測(cè)技術(shù)有效提高了農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)靶向性定性篩查的技術(shù)能力，提升了實(shí)驗(yàn)室綜合檢測(cè)水平，加強(qiáng)了蔬菜農(nóng)殘監(jiān)管力度，同時(shí)也為保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全提供了新的檢測(cè)技術(shù)手段。