◎ 文/李娜 王雅倩 楊春橋 潘發(fā)林 張嘉祺

為提高大麻哈魚(yú)標(biāo)記質(zhì)量，減少對(duì)魚(yú)苗的傷害，降低標(biāo)記成本，本團(tuán)隊(duì)研究并實(shí)踐了一種方法簡(jiǎn)單、全標(biāo)記、無(wú)傷害的大麻哈魚(yú)標(biāo)記技術(shù)，即通過(guò)控制水溫變化，可以使大麻哈魚(yú)耳石部位產(chǎn)生輪紋，根據(jù)2種水溫作用時(shí)間的不同，形成的紋距不同，可以產(chǎn)生不同標(biāo)記輪，從而達(dá)到精確判定該標(biāo)記魚(yú)苗的歸屬。連續(xù)三年對(duì)放流大麻哈魚(yú)苗進(jìn)行不同號(hào)段的耳石溫度標(biāo)記，每年隨機(jī)抽取標(biāo)記魚(yú)苗進(jìn)行采樣檢測(cè)，結(jié)果表明放流大麻哈魚(yú)耳石溫度標(biāo)記率為100%。

大麻哈魚(yú)是吉林省著名的土著魚(yú)類，近些年由于圖們江流域魚(yú)類天然產(chǎn)卵場(chǎng)生態(tài)環(huán)境被破壞、洄游通道被水電設(shè)施和漂流項(xiàng)目阻斷、漁政執(zhí)法難度大等多種原因，導(dǎo)致大麻哈魚(yú)資源急劇減少。為了保護(hù)和恢復(fù)大麻哈魚(yú)野生資源，吉林省漁業(yè)部門每年堅(jiān)持在密江和圖們江兩地放流大麻哈魚(yú)苗。增殖放流時(shí)，常以剪掉脂鰭或剪掉一部分尾鰭來(lái)標(biāo)記，數(shù)百萬(wàn)尾魚(yú)苗標(biāo)記操作難度大、成本高，難以規(guī)模化，標(biāo)記率僅為5%。此外，在操作過(guò)程中魚(yú)苗死亡率高，還會(huì)影響其入海后正常生長(zhǎng)。

為提高大麻哈魚(yú)標(biāo)記質(zhì)量，減少對(duì)魚(yú)苗的傷害，降低標(biāo)記成本，團(tuán)隊(duì)從2019年開(kāi)始一直致力于研究出操作簡(jiǎn)單、全標(biāo)記、無(wú)傷害的標(biāo)記技術(shù)。經(jīng)過(guò)兩年試驗(yàn)，團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)在大麻哈魚(yú)發(fā)眼卵階段，通過(guò)溫度變化，可以使全部魚(yú)苗在耳石部位產(chǎn)生日輪，且不同溫度、不同作用時(shí)間下，形成的紋距也不相同，即可以產(chǎn)生億到千億個(gè)不同標(biāo)記輪組，從而精確判定魚(yú)苗的歸屬。耳石溫度標(biāo)記不會(huì)對(duì)大麻哈魚(yú)苗造成任何傷害，不影響大麻哈魚(yú)入海生長(zhǎng)，此標(biāo)記終生攜帶，并隨時(shí)可用于鑒定該魚(yú)的歸屬，有助于提高大麻哈魚(yú)標(biāo)記率及為人工增殖放流后評(píng)價(jià)工作提供技術(shù)保障。

一、人工繁殖放流魚(yú)

大麻哈魚(yú)一生中產(chǎn)卵一次，產(chǎn)卵后便死亡。其對(duì)產(chǎn)卵場(chǎng)的條件要求極高，要水質(zhì)澄清、環(huán)境僻靜、水流較急，水溫4℃～7℃，底質(zhì)為沙礫，產(chǎn)卵期為10月下旬至11月中旬，產(chǎn)卵后2個(gè)～3個(gè)月，親魚(yú)絕大多數(shù)死亡。幼魚(yú)出生后，在淡水生活一段時(shí)間，然后降海生活。

（一）親魚(yú)

大麻哈魚(yú)在海水中生活2年～3年后，達(dá)到性成熟時(shí)，為了繁殖后代，進(jìn)入江河，上溯到產(chǎn)卵場(chǎng)生殖。秋季可從北太平洋洄游至圖們江流域。團(tuán)隊(duì)挑選體質(zhì)健壯、無(wú)病、無(wú)傷、無(wú)畸形的成熟個(gè)體，雌魚(yú)體重2.5kg～3kg，雄魚(yú)3kg～4kg，然后在面積50m2～80m2，水深0.6m水泥池中人工培育至性腺完全成熟。雌雄混養(yǎng)在流動(dòng)的淡水中，水溫控制在10℃以下，產(chǎn)卵前12h將雄魚(yú)放入網(wǎng)兜中分開(kāi)養(yǎng)殖，整個(gè)養(yǎng)殖期間不需要投喂。

（二）催產(chǎn)孵化

每隔6d～8d鑒別一次成熟度，一般在11月初，可以觀察到雌魚(yú)的腹部膨大柔軟，生殖孔紅腫外突，雄魚(yú)用手輕壓腹部有入水即散的白色精液流出，此時(shí)開(kāi)始催產(chǎn)。從雌魚(yú)中選出5條～6條，用手輕揉腹部，將圓而飽滿、有彈性的粉紅色卵粒擠出，放至同一干燥的不帶孔的受精盆中。再挑選1條～2條雄魚(yú)，輕壓腹部，將流出濃稠的乳白色精液擠入同一受精盆中，用手沿著一個(gè)方向輕輕地快速均勻攪拌10s～30s，使卵子與精子充分接觸，倒入清水，快速清洗2遍～3遍，放置陰暗處?kù)o止8min～10min。確認(rèn)精子完全失去受精能力后，用清水將多余的精液及污物、卵皮漂洗干凈，之后將受精卵放入槽式孵化器中流水孵化。控制孵化水溫不超過(guò)4℃，冰水混合物為宜，定期對(duì)受精卵孵化環(huán)境進(jìn)行管理，及時(shí)將死卵、未受精卵揀出，保證流水水質(zhì)，隨著孵化時(shí)間的延長(zhǎng)，逐漸加大進(jìn)水量，至發(fā)眼卵階段。

二、耳石溫度標(biāo)記

待大麻哈魚(yú)受精卵至魚(yú)發(fā)眼卵階段，根據(jù)北太平洋洄游魚(yú)類管理委員會(huì)（NPAFC）下發(fā)的耳石號(hào)段，一周后開(kāi)始進(jìn)行耳石溫度標(biāo)記，2021年標(biāo)記的號(hào)段為3,7H。利用井水和天然河水及冰水混合物所形成的溫度差調(diào)控水溫，先后嘗試12h、24h兩種不同的流水刺激時(shí)間。研究發(fā)現(xiàn)高低溫度差大于4℃，連續(xù)標(biāo)記24h時(shí)可以形成標(biāo)記輪紋。2021年標(biāo)記號(hào)段3,7H的具體操作記錄見(jiàn)表1。

表1 2021年琿春密江放流站耳石標(biāo)記記錄

三、耳石摘取與檢測(cè)

待放流大麻哈魚(yú)卵生長(zhǎng)至仔魚(yú)期，隨機(jī)選取魚(yú)苗并及時(shí)在解剖鏡下摘取耳石。耳石位于大麻哈魚(yú)下頭骨的兩側(cè)，由于仔魚(yú)期微耳石、星耳石未發(fā)育或太小，團(tuán)隊(duì)一般摘取矢耳石一對(duì)。摘取后的耳石用超聲波或離心機(jī)在純凈水中進(jìn)行清理，去除雜質(zhì)。清洗后的耳石在自然條件下陰干，再用樹(shù)脂膠將其封片，并用紫外線燈照射10s，使其凝固在載玻片上。利用240目、600目、2500目、4000目等四種不同目數(shù)的砂紙輕輕研磨，直至在顯微鏡下可以清晰地觀察到標(biāo)記的號(hào)段，再利用拋光劑進(jìn)行拋光處理，使研磨后的耳石標(biāo)記輪更加清晰，將得到的耳石切片圖片發(fā)送給北太平洋洄游魚(yú)類委員會(huì)指定的耳石號(hào)段發(fā)放機(jī)構(gòu)——美國(guó)漁獵部阿拉斯加實(shí)驗(yàn)室，得到確認(rèn)。團(tuán)隊(duì)連續(xù)三年對(duì)放流大麻哈魚(yú)苗進(jìn)行不同號(hào)段的耳石溫度標(biāo)記，每年隨機(jī)抽取標(biāo)記魚(yú)苗進(jìn)行采樣檢測(cè)，結(jié)果表明放流大麻哈魚(yú)耳石溫度標(biāo)記率為100%。

四、小結(jié)

在大麻哈魚(yú)發(fā)眼卵一周后進(jìn)行耳石溫度標(biāo)記。利用天然的河水和井水建立兩種管道水，根據(jù)要標(biāo)記的號(hào)段定時(shí)控制流入的水，期間也可利用冰水混合物，確保水溫度差在4℃以上。如要形成等寬的標(biāo)記日輪，需要先打開(kāi)河水管道開(kāi)關(guān)標(biāo)記24h，再打開(kāi)井水管道標(biāo)記24h，根據(jù)標(biāo)記天數(shù)形成等寬標(biāo)記輪。如要間隔一段時(shí)間不進(jìn)行標(biāo)記，則需要延長(zhǎng)一種水的標(biāo)記時(shí)間。耳石主要成分為碳酸鈣，標(biāo)記后的大麻哈魚(yú)魚(yú)苗在進(jìn)行耳石摘取前，不可保存在福爾馬林溶液中，一般冷凍保存或放置于70%的酒精溶液中，以備后期研磨使用。大麻哈魚(yú)仔魚(yú)期耳石較小，在解剖鏡下進(jìn)行耳石摘取與研磨非常難。本研究摘取的是一對(duì)矢耳石，在研磨時(shí)要緩慢細(xì)磨，受力均勻，邊磨邊觀察，確保得到一個(gè)平面，以便能清晰觀察到耳石輪紋。

從2020年開(kāi)始，團(tuán)隊(duì)將耳石溫度標(biāo)記的大麻哈魚(yú)苗在密江、圖們江流域開(kāi)展增殖放流活動(dòng)。魚(yú)苗經(jīng)過(guò)權(quán)威檢測(cè)機(jī)構(gòu)抽樣檢測(cè)合格后，用充氧袋裝取魚(yú)苗運(yùn)輸至放流站，整個(gè)放流過(guò)程中，由漁政及公證人員進(jìn)行監(jiān)督監(jiān)管。當(dāng)?shù)卣e極宣傳大麻哈魚(yú)的生物學(xué)特征及經(jīng)濟(jì)價(jià)值，鼓勵(lì)當(dāng)?shù)乩习傩諈⑴c增殖放流活動(dòng)，提高群眾保護(hù)大麻哈魚(yú)及其生存環(huán)境的意識(shí)。

目前大麻哈魚(yú)由國(guó)際組織北太平洋洄游魚(yú)類管理委員會(huì)（NPAFC）進(jìn)行管理，成員國(guó)包括加拿大、美國(guó)、俄羅斯、韓國(guó)和日本。北太平洋洄游魚(yú)類管理委員會(huì)每年給各成員國(guó)放流機(jī)構(gòu)分配不同的標(biāo)記方式，稱之為號(hào)段（code），以標(biāo)記數(shù)量、位置、寬度進(jìn)行區(qū)別，并通過(guò)檢查魚(yú)耳石標(biāo)記查驗(yàn)每個(gè)國(guó)家增殖放流比例，來(lái)確定捕撈配額。我國(guó)一直沒(méi)有大麻哈魚(yú)捕撈配額，希望通過(guò)實(shí)踐并推廣耳石溫度標(biāo)記放流大麻哈魚(yú)技術(shù)，能有助于推動(dòng)我國(guó)加入北太平洋洄游魚(yú)類管理委員會(huì)，獲得北太平洋捕撈配額。