◎ 文/李娜 王雅倩 楊春橋 潘發(fā)林 張嘉祺

為提高大麻哈魚標(biāo)記質(zhì)量，減少對魚苗的傷害，降低標(biāo)記成本，本團(tuán)隊(duì)研究并實(shí)踐了一種方法簡單、全標(biāo)記、無傷害的大麻哈魚標(biāo)記技術(shù)，即通過控制水溫變化，可以使大麻哈魚耳石部位產(chǎn)生輪紋，根據(jù)2種水溫作用時間的不同，形成的紋距不同，可以產(chǎn)生不同標(biāo)記輪，從而達(dá)到精確判定該標(biāo)記魚苗的歸屬。連續(xù)三年對放流大麻哈魚苗進(jìn)行不同號段的耳石溫度標(biāo)記，每年隨機(jī)抽取標(biāo)記魚苗進(jìn)行采樣檢測，結(jié)果表明放流大麻哈魚耳石溫度標(biāo)記率為100%。

大麻哈魚是吉林省著名的土著魚類，近些年由于圖們江流域魚類天然產(chǎn)卵場生態(tài)環(huán)境被破壞、洄游通道被水電設(shè)施和漂流項(xiàng)目阻斷、漁政執(zhí)法難度大等多種原因，導(dǎo)致大麻哈魚資源急劇減少。為了保護(hù)和恢復(fù)大麻哈魚野生資源，吉林省漁業(yè)部門每年堅(jiān)持在密江和圖們江兩地放流大麻哈魚苗。增殖放流時，常以剪掉脂鰭或剪掉一部分尾鰭來標(biāo)記，數(shù)百萬尾魚苗標(biāo)記操作難度大、成本高，難以規(guī)模化，標(biāo)記率僅為5%。此外，在操作過程中魚苗死亡率高，還會影響其入海后正常生長。

為提高大麻哈魚標(biāo)記質(zhì)量，減少對魚苗的傷害，降低標(biāo)記成本，團(tuán)隊(duì)從2019年開始一直致力于研究出操作簡單、全標(biāo)記、無傷害的標(biāo)記技術(shù)。經(jīng)過兩年試驗(yàn)，團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)在大麻哈魚發(fā)眼卵階段，通過溫度變化，可以使全部魚苗在耳石部位產(chǎn)生日輪，且不同溫度、不同作用時間下，形成的紋距也不相同，即可以產(chǎn)生億到千億個不同標(biāo)記輪組，從而精確判定魚苗的歸屬。耳石溫度標(biāo)記不會對大麻哈魚苗造成任何傷害，不影響大麻哈魚入海生長，此標(biāo)記終生攜帶，并隨時可用于鑒定該魚的歸屬，有助于提高大麻哈魚標(biāo)記率及為人工增殖放流后評價工作提供技術(shù)保障。

一、人工繁殖放流魚

大麻哈魚一生中產(chǎn)卵一次，產(chǎn)卵后便死亡。其對產(chǎn)卵場的條件要求極高，要水質(zhì)澄清、環(huán)境僻靜、水流較急，水溫4℃～7℃，底質(zhì)為沙礫，產(chǎn)卵期為10月下旬至11月中旬，產(chǎn)卵后2個～3個月，親魚絕大多數(shù)死亡。幼魚出生后，在淡水生活一段時間，然后降海生活。

（一）親魚

大麻哈魚在海水中生活2年～3年后，達(dá)到性成熟時，為了繁殖后代，進(jìn)入江河，上溯到產(chǎn)卵場生殖。秋季可從北太平洋洄游至圖們江流域。團(tuán)隊(duì)挑選體質(zhì)健壯、無病、無傷、無畸形的成熟個體，雌魚體重2.5kg～3kg，雄魚3kg～4kg，然后在面積50m2～80m2，水深0.6m水泥池中人工培育至性腺完全成熟。雌雄混養(yǎng)在流動的淡水中，水溫控制在10℃以下，產(chǎn)卵前12h將雄魚放入網(wǎng)兜中分開養(yǎng)殖，整個養(yǎng)殖期間不需要投喂。

（二）催產(chǎn)孵化

每隔6d～8d鑒別一次成熟度，一般在11月初，可以觀察到雌魚的腹部膨大柔軟，生殖孔紅腫外突，雄魚用手輕壓腹部有入水即散的白色精液流出，此時開始催產(chǎn)。從雌魚中選出5條～6條，用手輕揉腹部，將圓而飽滿、有彈性的粉紅色卵粒擠出，放至同一干燥的不帶孔的受精盆中。再挑選1條～2條雄魚，輕壓腹部，將流出濃稠的乳白色精液擠入同一受精盆中，用手沿著一個方向輕輕地快速均勻攪拌10s～30s，使卵子與精子充分接觸，倒入清水，快速清洗2遍～3遍，放置陰暗處靜止8min～10min。確認(rèn)精子完全失去受精能力后，用清水將多余的精液及污物、卵皮漂洗干凈，之后將受精卵放入槽式孵化器中流水孵化。控制孵化水溫不超過4℃，冰水混合物為宜，定期對受精卵孵化環(huán)境進(jìn)行管理，及時將死卵、未受精卵揀出，保證流水水質(zhì)，隨著孵化時間的延長，逐漸加大進(jìn)水量，至發(fā)眼卵階段。

二、耳石溫度標(biāo)記

待大麻哈魚受精卵至魚發(fā)眼卵階段，根據(jù)北太平洋洄游魚類管理委員會（NPAFC）下發(fā)的耳石號段，一周后開始進(jìn)行耳石溫度標(biāo)記，2021年標(biāo)記的號段為3,7H。利用井水和天然河水及冰水混合物所形成的溫度差調(diào)控水溫，先后嘗試12h、24h兩種不同的流水刺激時間。研究發(fā)現(xiàn)高低溫度差大于4℃，連續(xù)標(biāo)記24h時可以形成標(biāo)記輪紋。2021年標(biāo)記號段3,7H的具體操作記錄見表1。

表1 2021年琿春密江放流站耳石標(biāo)記記錄

三、耳石摘取與檢測

待放流大麻哈魚卵生長至仔魚期，隨機(jī)選取魚苗并及時在解剖鏡下摘取耳石。耳石位于大麻哈魚下頭骨的兩側(cè)，由于仔魚期微耳石、星耳石未發(fā)育或太小，團(tuán)隊(duì)一般摘取矢耳石一對。摘取后的耳石用超聲波或離心機(jī)在純凈水中進(jìn)行清理，去除雜質(zhì)。清洗后的耳石在自然條件下陰干，再用樹脂膠將其封片，并用紫外線燈照射10s，使其凝固在載玻片上。利用240目、600目、2500目、4000目等四種不同目數(shù)的砂紙輕輕研磨，直至在顯微鏡下可以清晰地觀察到標(biāo)記的號段，再利用拋光劑進(jìn)行拋光處理，使研磨后的耳石標(biāo)記輪更加清晰，將得到的耳石切片圖片發(fā)送給北太平洋洄游魚類委員會指定的耳石號段發(fā)放機(jī)構(gòu)——美國漁獵部阿拉斯加實(shí)驗(yàn)室，得到確認(rèn)。團(tuán)隊(duì)連續(xù)三年對放流大麻哈魚苗進(jìn)行不同號段的耳石溫度標(biāo)記，每年隨機(jī)抽取標(biāo)記魚苗進(jìn)行采樣檢測，結(jié)果表明放流大麻哈魚耳石溫度標(biāo)記率為100%。

四、小結(jié)

在大麻哈魚發(fā)眼卵一周后進(jìn)行耳石溫度標(biāo)記。利用天然的河水和井水建立兩種管道水，根據(jù)要標(biāo)記的號段定時控制流入的水，期間也可利用冰水混合物，確保水溫度差在4℃以上。如要形成等寬的標(biāo)記日輪，需要先打開河水管道開關(guān)標(biāo)記24h，再打開井水管道標(biāo)記24h，根據(jù)標(biāo)記天數(shù)形成等寬標(biāo)記輪。如要間隔一段時間不進(jìn)行標(biāo)記，則需要延長一種水的標(biāo)記時間。耳石主要成分為碳酸鈣，標(biāo)記后的大麻哈魚魚苗在進(jìn)行耳石摘取前，不可保存在福爾馬林溶液中，一般冷凍保存或放置于70%的酒精溶液中，以備后期研磨使用。大麻哈魚仔魚期耳石較小，在解剖鏡下進(jìn)行耳石摘取與研磨非常難。本研究摘取的是一對矢耳石，在研磨時要緩慢細(xì)磨，受力均勻，邊磨邊觀察，確保得到一個平面，以便能清晰觀察到耳石輪紋。

從2020年開始，團(tuán)隊(duì)將耳石溫度標(biāo)記的大麻哈魚苗在密江、圖們江流域開展增殖放流活動。魚苗經(jīng)過權(quán)威檢測機(jī)構(gòu)抽樣檢測合格后，用充氧袋裝取魚苗運(yùn)輸至放流站，整個放流過程中，由漁政及公證人員進(jìn)行監(jiān)督監(jiān)管。當(dāng)?shù)卣e極宣傳大麻哈魚的生物學(xué)特征及經(jīng)濟(jì)價值，鼓勵當(dāng)?shù)乩习傩諈⑴c增殖放流活動，提高群眾保護(hù)大麻哈魚及其生存環(huán)境的意識。

目前大麻哈魚由國際組織北太平洋洄游魚類管理委員會（NPAFC）進(jìn)行管理，成員國包括加拿大、美國、俄羅斯、韓國和日本。北太平洋洄游魚類管理委員會每年給各成員國放流機(jī)構(gòu)分配不同的標(biāo)記方式，稱之為號段（code），以標(biāo)記數(shù)量、位置、寬度進(jìn)行區(qū)別，并通過檢查魚耳石標(biāo)記查驗(yàn)每個國家增殖放流比例，來確定捕撈配額。我國一直沒有大麻哈魚捕撈配額，希望通過實(shí)踐并推廣耳石溫度標(biāo)記放流大麻哈魚技術(shù)，能有助于推動我國加入北太平洋洄游魚類管理委員會，獲得北太平洋捕撈配額。