馮文敏，吳鎧悅，黃月萍，劉亞茹，趙洪波，刁勇，朱亞玲

1.華僑大學(xué)醫(yī)學(xué)院，福建 泉州 362021；2.昆明醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程研究中心，云南 昆明 650500

肝癌是全球范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率呈逐年遞增趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅人類生命健康。肝癌發(fā)病隱匿，早期診斷率低，多數(shù)患者確診時(shí)已為中晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī)，導(dǎo)致患者預(yù)后較差[1]。因此，迫切需要可有效延長(zhǎng)肝癌患者生存期的治療手段和藥物。

西黃丸是中醫(yī)抗癌名方，由牛黃、麝香、乳香和沒(méi)藥4味中藥組成，有清熱解毒、消腫散結(jié)功效，用于熱毒壅結(jié)所致癰疽疔毒、瘰疬、癌腫等疾病[2]。藥理研究發(fā)現(xiàn)，西黃丸對(duì)肝癌、肺癌、乳腺癌等多種癌癥有一定療效，具有誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移、抑制血管生成、改善腫瘤免疫抑制微環(huán)境等作用[3-5]，但其治療肝癌的分子機(jī)制尚不完全明確。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于系統(tǒng)生物學(xué)理論，從整體角度探索藥物-生物系統(tǒng)-疾病之間復(fù)雜作用關(guān)系，形成藥物分子設(shè)計(jì)新模式，是發(fā)展創(chuàng)新藥物的重要途徑[6]。近年來(lái)，雖然已經(jīng)利用基因芯片及高通量測(cè)序技術(shù)發(fā)現(xiàn)了一些與肝癌相關(guān)的重要基因，但其在肝癌發(fā)生發(fā)展及治療中的作用仍需深入研究。本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、生物信息學(xué)及分子對(duì)接方法，對(duì)西黃丸治療肝癌的潛在活性成分及預(yù)后相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行分析，為闡明西黃丸治療肝癌的作用機(jī)制及開(kāi)發(fā)治療肝癌的新型藥物提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 西黃丸活性成分篩選

利用TCMSP（https://tcmsp-e.com/）[7]、化學(xué)專業(yè)數(shù)據(jù)庫(kù)（www.organchem.csdb.cn）[8]檢索西黃丸中牛黃、麝香、乳香、沒(méi)藥4味中藥的化學(xué)成分，通過(guò)PubChem（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov）[9]數(shù)據(jù)庫(kù)獲取化合物的SMILES分子結(jié)構(gòu)，將分子結(jié)構(gòu)導(dǎo)入SwissADME（http://www.swissadme.ch）[10]數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)化合物的吸收度和類藥性，篩選胃腸（GI）吸收為“High”、5 個(gè)類藥性參數(shù)（Lipinski、Ghose、Veber、Egan、Muegge）預(yù)測(cè)結(jié)果中有3個(gè)及以上為“Yes”的化合物，作為活性成分。

1.2 活性成分靶點(diǎn)預(yù)測(cè)

將活性成分導(dǎo)入SwissTargetPrediction（http://www.swisstargetprediction.ch）[11]數(shù)據(jù)庫(kù)，選擇物種為“Homo sapiens”，依據(jù)反向藥效團(tuán)匹配方法預(yù)測(cè)活性成分的作用靶點(diǎn)，收集靶點(diǎn)蛋白信息。隨后利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.uniprot.org/）[12]對(duì)靶點(diǎn)蛋白名稱進(jìn)行統(tǒng)一校正，并獲取靶點(diǎn)蛋白對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)基因。

1.3 差異表達(dá)靶點(diǎn)基因篩選

利用GEPIA（http://gepia.cancer-pku.cn/）[13]數(shù)據(jù)庫(kù)分析靶點(diǎn)基因在肝癌組織和正常組織的表達(dá)水平，Matched Normal data 設(shè) 為“Match TCGA normal data”，其余為默認(rèn)。將在肝癌組織和正常組織表達(dá)有顯著差異，即|log2FC|＞1，P＜0.01的靶點(diǎn)基因作為差異表達(dá)靶點(diǎn)基因。

1.4 GO功能和KEGG通路富集分析

將差異表達(dá)靶點(diǎn)基因?qū)隓AVID（https://david.ncifcrf.gov）[14]數(shù)據(jù)庫(kù)，以FDR＜0.05為顯著富集標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行GO功能富集和KEGG通路富集分析。

1.5 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

將“1.3”項(xiàng)下差異表達(dá)靶點(diǎn)基因?qū)?yīng)的蛋白導(dǎo)入STRING（https://cn.string-db.org/）[15]數(shù)據(jù)庫(kù)，限定物種為“Homo sapiens”，置信度為0.4，構(gòu)建靶點(diǎn)蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)，將PPI 網(wǎng)絡(luò)用Cytoscape3.9.0 軟件[16]進(jìn)行可視化，節(jié)點(diǎn)顏色代表靶點(diǎn)差異表達(dá)水平。借助NetworkAnalyzer插件進(jìn)行拓?fù)浞治?，篩選接近中心性（CC）、中介中心性（BC）和度值（degree）均大于平均值的靶點(diǎn)作為關(guān)鍵靶點(diǎn)。將關(guān)鍵靶點(diǎn)基因與KEGG顯著富集通路中對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)基因取交集，得到核心靶點(diǎn)基因。

1.6 核心靶點(diǎn)基因生存分析

Kaplan-Meier Plotter 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://kmplot.com/analysis/）[17]可評(píng)估基因表達(dá)對(duì)多種腫瘤預(yù)后的影響，用于發(fā)現(xiàn)和驗(yàn)證與腫瘤預(yù)后相關(guān)的生物標(biāo)志物。根據(jù)核心靶點(diǎn)基因表達(dá)中位數(shù)，將數(shù)據(jù)庫(kù)中364例肝癌患者分為高表達(dá)組和低表達(dá)組，計(jì)算危險(xiǎn)比（hazard radio，HR）及95%置信區(qū)間（CI），差異比較用logrankP檢驗(yàn)，logrankP＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分析核心靶點(diǎn)基因與肝癌患者預(yù)后的相關(guān)性，得到預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)。

1.7 中藥-活性成分-預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

在Excel2013中構(gòu)建“中藥-活性成分”“活性成分-預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)”“預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)-信號(hào)通路”的對(duì)應(yīng)關(guān)系，并將其導(dǎo)入Cytoscape3.9.0軟件，構(gòu)建并分析西黃丸治療肝癌的中藥-活性成分-預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)，網(wǎng)絡(luò)中不同顏色節(jié)點(diǎn)表示中藥、活性成分、預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)和通路，節(jié)點(diǎn)間連線表示關(guān)聯(lián)關(guān)系。

1.8 分子對(duì)接

從PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)獲取西黃丸活性成分3D結(jié)構(gòu)作為對(duì)接配體。從RCSB PDB（http://www.rcsb.org）[18]數(shù)據(jù)庫(kù)下載預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)3D結(jié)構(gòu)，作為對(duì)接受體。將對(duì)接配體和對(duì)接受體文件上傳至CB-Dock（http://clab.labshare.cn/cb-dock/php/）[19]分子對(duì)接工具，受體設(shè)為剛性分子，配體設(shè)為柔性分子，通過(guò)MGLTools工具對(duì)受體進(jìn)行移除小分子、水分子和加氫等操作，對(duì)配體進(jìn)行加氫、加電子等操作使其能量最小化，將其轉(zhuǎn)換為pdbqt 格式文件，應(yīng)用AutoDock Vina1.1.2進(jìn)行分子對(duì)接，以結(jié)合能大小判斷受體與配體結(jié)合力強(qiáng)弱。

2 結(jié)果

2.1 西黃丸活性成分及作用靶點(diǎn)獲取

通過(guò)TCMSP和化學(xué)專業(yè)數(shù)據(jù)庫(kù)共檢索到西黃丸中化學(xué)成分385個(gè)，根據(jù)吸收度和類藥性等參數(shù)篩選出活性成分194個(gè)，其中牛黃18個(gè)、麝香36個(gè)、乳香72個(gè)、沒(méi)藥79個(gè)。經(jīng)SwissTargetPrediction預(yù)測(cè)活性成分作用靶點(diǎn)，去除重復(fù)后，共得到873個(gè)作用靶點(diǎn)。靶點(diǎn)數(shù)量排名前10位的活性成分見(jiàn)表1。

表1 西黃丸活性成分信息（靶點(diǎn)數(shù)量前10位）

2.2 差異表達(dá)靶點(diǎn)基因獲取

利用GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析873個(gè)靶點(diǎn)基因在肝癌組織和正常組織的表達(dá)水平，共得到有顯著差異的靶點(diǎn)基因147個(gè)，其中89個(gè)上調(diào)靶點(diǎn)基因、58個(gè)下調(diào)靶點(diǎn)基因。

2.3 GO功能及KEGG通路富集分析結(jié)果

GO功能富集分析得到生物過(guò)程（BP）19個(gè)、細(xì)胞組分（CC）13個(gè)、分子功能（MF）16個(gè)，上調(diào)靶點(diǎn)和下調(diào)靶點(diǎn)的富集結(jié)果中排名前5位條目見(jiàn)圖1。上調(diào)靶點(diǎn)主要富集于蛋白質(zhì)磷酸化、細(xì)胞分裂、G2/M有絲分裂細(xì)胞周期轉(zhuǎn)變、凋亡過(guò)程的負(fù)調(diào)控等生物過(guò)程，分布于胞液、核質(zhì)、細(xì)胞膜等細(xì)胞組分，涉及蛋白激酶活性、ATP結(jié)合、蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性等分子功能；下調(diào)靶點(diǎn)主要富集于藥物代謝過(guò)程、環(huán)氧化酶P450通路、類固醇代謝過(guò)程、氧化還原過(guò)程等生物過(guò)程，分布于細(xì)胞器膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜、外泌體等細(xì)胞組分，涉及氧結(jié)合、氧化還原酶活性、類固醇羥化酶活性等分子功能。

圖1 西黃丸治療肝癌靶點(diǎn)GO功能富集分析

KEGG通路富集分析得到9條信號(hào)通路，其中上調(diào)靶點(diǎn)參與調(diào)控細(xì)胞周期、孕酮介導(dǎo)的卵母細(xì)胞成熟、卵母細(xì)胞減數(shù)分裂3條信號(hào)通路；下調(diào)靶點(diǎn)主要參與細(xì)胞色素P450對(duì)外源性藥物代謝、化學(xué)致癌作用、視黃醇代謝、代謝途徑等6條信號(hào)通路。見(jiàn)圖2。

圖2 西黃丸治療肝癌靶點(diǎn)KEGG通路富集分析

2.4 靶點(diǎn)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心靶點(diǎn)獲取

通過(guò)STRING數(shù)據(jù)庫(kù)及Cytoscape3.9.0軟件構(gòu)建靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)（見(jiàn)圖3），網(wǎng)絡(luò)中包含144個(gè)節(jié)點(diǎn)和833條邊，degree值越大，節(jié)點(diǎn)越大。拓?fù)浞治龅玫紹C、CC和degree均大于平均值即0.407、0.011和12的節(jié)點(diǎn)26個(gè)，將其作為關(guān)鍵靶點(diǎn)。關(guān)鍵靶點(diǎn)信息見(jiàn)表2。

表2 西黃丸治療肝癌關(guān)鍵靶點(diǎn)信息

圖3 西黃丸治療肝癌靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)

將篩選出的26個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)基因與9條KEGG顯著性富集通路中對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)基因取交集，得到14個(gè)核心靶點(diǎn)基因，包括MAPK3、CDK1、PLK1、CCNA2等10 個(gè)表達(dá)上調(diào)靶點(diǎn)基因及UGT2B7、CYP2B6、CYP1A1、CYP2C19共4個(gè)表達(dá)下調(diào)靶點(diǎn)基因。

2.5 預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)獲取

利用Kaplan-Meier Plotter數(shù)據(jù)庫(kù)評(píng)估14個(gè)核心靶點(diǎn)基因在肝癌患者中的預(yù)后價(jià)值，總生存期分析結(jié)果顯示，MAPK3、CDK1、PLK1、CCNA2、CCNB1、CDK4、PRKDC 7個(gè)基因高表達(dá)與肝癌患者較差的總生存期相關(guān)（logrankP＜0.05）；CYP2C19基因高表達(dá)與肝癌患者較長(zhǎng)的總生存期相關(guān)（logrankP＜0.05），表明上述8個(gè)基因與肝癌患者預(yù)后密切相關(guān)。見(jiàn)圖4。

圖4 西黃丸治療肝癌核心靶點(diǎn)基因生存分析

2.6 中藥-活性成分-預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)

采用Cytoscape3.9.0軟件構(gòu)建中藥-活性成分-預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)，見(jiàn)圖5。該網(wǎng)絡(luò)包含86個(gè)節(jié)點(diǎn)（4個(gè)中藥、68個(gè)活性成分、8個(gè)預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)、6條信號(hào)通路）和201條邊，68個(gè)活性成分中27個(gè)來(lái)自乳香、34個(gè)來(lái)自沒(méi)藥、4個(gè)來(lái)自麝香、4個(gè)來(lái)自牛黃，其中erlangerin B、[(5R,5Ar,8aS)-6-氧代-5-(3,4,5-三甲氧基苯基)-5,8,8a,9-四氫-[2]苯并呋喃[6,5-f][1,3]苯并二氧醇-5a-基]醋酸鹽（CID11004967）、洋椿苦素（cedrelone）、桑色素（morin）、辛酸丁酯（butyl octanoate）分別作用于7、5、4、3、3個(gè)預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)。MAPK3、CYP2C19、CDK1等靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)活性成分?jǐn)?shù)量較多，分別為36、27、23個(gè)。

圖5 西黃丸治療肝癌中藥-活性成分-預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)

2.7 分子對(duì)接結(jié)果

結(jié)合能＜0 kJ/mol表明配體與受體可自發(fā)結(jié)合，一般認(rèn)為，配體與受體結(jié)合的構(gòu)象穩(wěn)定時(shí)能量越低，發(fā)生作用的可能性越大，結(jié)合力越強(qiáng)[20-21]。將中藥-活性成分-預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)中靶點(diǎn)數(shù)排名前5位的活性成分與8個(gè)預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接，以結(jié)合能≤-5.0 kJ/mol為篩選標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果顯示，對(duì)接結(jié)合能＞-5.0 kJ/mol的有1個(gè)，＜-5.0 kJ/mol有39個(gè)，表明活性成分與預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)間均具有較強(qiáng)的結(jié)合力，見(jiàn)圖6。其中cedrelone 與CYP2C19 的結(jié)合能最低，cedrelone可結(jié)合到CYP2C19蛋白的活性位點(diǎn)，并與氨基酸殘基A297 形成氫鍵作用，與殘基L366、F476、F114等形成疏水作用，見(jiàn)圖7。

圖6 主要活性成分與預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)分子對(duì)接熱圖

圖7 cedrelone與CYP2C19分子對(duì)接模式

3 討論

西黃丸中牛黃清心退熱、化痰通竅、散結(jié)消腫，為君藥；臣以麝香通經(jīng)絡(luò)、散結(jié)滯、辟惡毒、除穢濁；佐以乳香、沒(méi)藥活血祛瘀。諸藥配伍有清熱解毒、活血祛瘀、消堅(jiān)腫、散痰結(jié)等功效[22]，在肝癌治療中應(yīng)用廣泛。

本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和生物信息學(xué)方法篩選得到194個(gè)西黃丸活性成分及873個(gè)作用靶點(diǎn)，其中147個(gè)靶點(diǎn)基因在肝癌組織與正常組織表達(dá)有顯著差異。經(jīng)靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和生存分析得到MAPK3、CDK1、PLK1、CCNA2、CCNB1、CDK4、PRKDC、CYP2C19共8個(gè)與肝癌患者預(yù)后密切相關(guān)的核心靶點(diǎn)。絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）是MAPK/ERK信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白，該通路及下游轉(zhuǎn)錄因子參與細(xì)胞增殖、凋亡、周期調(diào)控、腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移等生物過(guò)程[23]。MAPK3磷酸化后可調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)核轉(zhuǎn)錄因子c-fos、c-Jun等，促進(jìn)肝癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移，且MAPK3磷酸化水平高的肝癌患者復(fù)發(fā)率明顯增加，預(yù)后較差[24]。周期蛋白依賴性激酶（CDK）1是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，在細(xì)胞周期調(diào)控中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，miR-1271-5p可通過(guò)靶向抑制CDK1表達(dá)，從而阻滯細(xì)胞周期，抑制肝癌細(xì)胞增殖，增強(qiáng)肝癌細(xì)胞對(duì)放療的敏感性，發(fā)揮治療肝癌的輔助作用[25]。Polo 樣激酶（PLK）1是細(xì)胞有絲分裂的重要調(diào)節(jié)因子，其過(guò)表達(dá)可使多聚二磷酸腺苷酸核糖聚合酶（PARP）10磷酸化，破壞PARP10對(duì)NEMO信號(hào)泛素化的抑制，從而增強(qiáng)核因子-κB對(duì)多個(gè)靶基因的轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)肝癌進(jìn)展[26]。CCNA2 和CCNB1 是細(xì)胞周期蛋白家族成員，可通過(guò)激活CDK激酶調(diào)控細(xì)胞周期，從而調(diào)控細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)和凋亡。有研究表明，CCNA2和CCNB1高表達(dá)與肝癌患者總生存期和無(wú)病生存期降低相關(guān)[27]。CDK4/cyclin D 復(fù)合物可調(diào)控細(xì)胞周期G1/S 的轉(zhuǎn)換，SOCS1可通過(guò)降低肝癌細(xì)胞核CDK4/cyclin D復(fù)合物的穩(wěn)定性，從而抑制細(xì)胞周期進(jìn)展到S期[28]。PRKDC基因編碼的DNA依賴蛋白激酶催化亞基（DNA-PKcs）是DNA雙鏈斷裂修復(fù)和重組的關(guān)鍵組成部分，在維持基因組穩(wěn)定方面發(fā)揮作用[29]。CYP2C19是重要的藥物代謝酶，在許多藥物、內(nèi)源性生物分子和環(huán)境毒物的激活或消除中發(fā)揮關(guān)鍵作用，CYP2C19異常表達(dá)與臨床藥物療效差或治療失敗有關(guān)[30]。

GO功能及KEGG通路富集分析發(fā)現(xiàn)，西黃丸治療肝癌的上調(diào)靶點(diǎn)主要通過(guò)參與蛋白質(zhì)磷酸化、細(xì)胞分裂、G2/M有絲分裂細(xì)胞周期轉(zhuǎn)變等生物過(guò)程，調(diào)控細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡等信號(hào)通路，發(fā)揮治療肝癌的作用。研究表明，細(xì)胞周期失調(diào)可介導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化和細(xì)胞生長(zhǎng)失控，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖[31]。因此，靶向作用于細(xì)胞周期調(diào)控因子可作為治療肝癌的潛在策略。下調(diào)靶點(diǎn)涉及藥物代謝過(guò)程、環(huán)氧化酶P450通路、類固醇代謝過(guò)程等生物過(guò)程，與細(xì)胞色素P450對(duì)外源性藥物代謝、化學(xué)致癌作用、視黃醇代謝等信號(hào)通路相關(guān)。肝臟是參與蛋白質(zhì)合成、脂肪代謝、糖代謝、藥物和毒物代謝，發(fā)揮吞噬和免疫功能的重要器官，肝臟代謝異常是肝癌發(fā)病的基礎(chǔ)。肝癌細(xì)胞可通過(guò)改變脂質(zhì)代謝、增強(qiáng)糖酵解和脂肪酸β-氧化等途徑增加能量供應(yīng)，從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖或減少肝癌細(xì)胞凋亡[32]。因此，探索西黃丸調(diào)節(jié)肝臟異常代謝的機(jī)制具有重要的臨床意義。

中藥-活性成分-預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)-信號(hào)通路網(wǎng)絡(luò)及分子對(duì)接分析發(fā)現(xiàn)，erlangerin B、CID11004967、洋椿苦素、桑色素等活性成分與肝癌預(yù)后相關(guān)核心靶點(diǎn)具有較強(qiáng)的結(jié)合力，說(shuō)明活性成分在西黃丸治療肝癌過(guò)程中可能發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，erlangerin B對(duì)巨噬細(xì)胞具有一定的細(xì)胞毒性，且能抑制多種腫瘤細(xì)胞增殖[33]。洋椿苦素可通過(guò)上調(diào)肝癌患者體內(nèi)吩嗪合成類結(jié)構(gòu)域蛋白水平，介導(dǎo)Ras/Rap1信號(hào)通路，表現(xiàn)出顯著的抗肝癌作用[34]。桑色素是一種黃酮類化合物，具有抗氧化、抗糖尿病、抗炎、抗腫瘤、抗高血壓、抗菌、降尿酸和神經(jīng)保護(hù)作用[35]。有研究報(bào)道，桑色素對(duì)肝癌、宮頸癌、黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌和結(jié)腸癌等多種癌癥具有藥理作用[36]。

綜上所述，本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、生物信息學(xué)及分子對(duì)接方法，探討西黃丸治療肝癌的藥理作用機(jī)制， 發(fā)現(xiàn)西黃丸中活性成分erlangerin B、CID11004967、洋椿苦素、桑色素等通過(guò)作用于MAPK3、CDK1、PLK1等肝癌預(yù)后相關(guān)靶點(diǎn)調(diào)節(jié)多條信號(hào)通路，從而發(fā)揮治療肝癌及延長(zhǎng)肝癌患者生存期的作用，可為后續(xù)研究提供新的思路。