張馨丹，鄭春美，隋 璐，馬志強

1.延吉市依蘭鎮(zhèn)綜合服務中心，吉林延吉 133000；2.延吉市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法大隊，吉林延吉133000；3.延吉市農(nóng)業(yè)技術推廣中心，吉林延吉 133000；4.延吉市畜牧站，吉林延吉 133000

動物安樂死的方法分為兩大類，化學性方法與物理性方法，其中化學方法又分為吸入性藥劑方法和非吸入性藥劑方法。安樂死時最好先抑制動物的中樞神經(jīng)而使其失去知覺，解除疼痛感。因此，首選為食用過量的化學性麻醉藥劑。動物一旦被施予深度麻醉，之后使用的安樂死方法選擇性較多，也較人道。如因科學研究所需無法使用麻醉劑，則使用物理性安樂死方法。

吸入性藥劑：常見藥物如一氧化碳、二氧化碳、乙醚、氮氣等麻醉藥劑，通常借助氣麻機或可透視的密閉容器對體重低于7 kg 的小型哺乳動物與鳥類實施安樂死。大部分的吸入性藥劑對人體有害，因此需在通風良好場所執(zhí)行。

非吸入性藥劑：非吸入性藥劑多數(shù)為注射性藥物，此類藥劑有多種投藥方法，但靜脈注射是最佳選擇。巴比妥鹽及其衍生物戊巴比妥鈉目前廣泛應用于大部分動物的安樂死。

物理性方法：包括頸椎脫臼、斷頭、放血、槍擊、電擊等方法。

本次試驗通過采用非吸入性藥劑方法，觀察動物使用不同藥劑進行安樂死后的表現(xiàn)，選擇相對較好的藥物方法，從而為基層工作者提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物

由農(nóng)學院基礎獸醫(yī)實驗室提供的試驗小鼠15只，延吉市興安大集購買的2 月齡仔兔6 只。

1.1.2 試驗藥品

鹽酸氯氨酮注射液、10%KCl 注射液、3%戊巴比妥鈉注射液、飽和硫酸鎂注射液、生理鹽水、75%酒精棉球。

1.1.3 試驗器材

1 mL 注射器20 個、5 mL 注射器10 個、動物保定架、打毛剪、鑷子。

1.2 試驗方法

將實驗小鼠隨機分為3 組,每組5 只，實驗仔兔隨機分為3 組,每組2 只。

1.2.1 KCl-氯氨酮法

1.2.1.1 小鼠試驗。由于注射KCl 注射液會使鉀離子濃度突然升高而使動物感到不適，出現(xiàn)抽搐、掙扎等現(xiàn)象，因而需將試驗動物進行預麻醉：保定好小鼠，用酒精棉球擦拭小鼠尾部，使用1 mL 注射器抽取1%鹽酸氯氨酮注射液以5 mL/kg 對試驗小鼠進行尾靜脈注射。待充分麻醉后再用1 mL 注射液抽取10%的KCl 注射液以150 mg/kg 快速尾靜脈注射，藥品注入后，立即將小鼠從保定架內(nèi)取出，對小鼠進行觀察記錄。

1.2.1.2 仔兔試驗。同樣先將試驗仔兔進行預麻醉：保定好試驗仔兔，對仔兔的耳緣靜脈處進行剪毛，再用酒精棉球擦拭試驗仔兔耳緣靜脈處，使用1 mL注射器抽取鹽酸氯氨酮注射液5 mL/kg 對試驗仔兔進行耳緣靜脈注射。充分麻醉后再用5 mL 注射液抽取10%的KCl 注射液以150 mg/kg 快速對試驗仔兔進行耳緣靜脈注射，藥品注入后，立即將試驗仔兔從保定架內(nèi)取出，對試驗仔兔進行觀察并記錄。

1.2.2 戊巴比妥鈉法

1.2.2.1 小鼠試驗。保定好小鼠，用酒精棉球擦拭小鼠尾部，使用1 mL 注射器抽取以100 mg/kg 戊巴比妥鈉配制成的3%戊巴比妥鈉藥液，對試驗小鼠進行尾靜脈注射（戊巴比妥鈉藥液配比為1%～3%，為使試驗效果明顯，本試驗使用3%戊巴比妥鈉藥液），藥品注入后，立即將小鼠從保定架中取出，對小鼠進行觀察并記錄。

1.2.2.2 仔兔試驗。使用保定架對試驗用仔兔進行保定，對仔兔的耳緣靜脈處進行剪毛，再用酒精棉球擦拭試驗仔兔耳緣靜脈處，使用5 mL 注射器抽取以100 mg/kg 戊巴比妥鈉配制成的3%戊巴比妥鈉藥液對試驗仔兔進行耳緣靜脈注射（戊巴比妥鈉藥液配比為1%～3%，為使試驗效果明顯，本試驗使用3%戊巴比妥鈉藥液），藥品注入后，立即將試驗仔兔從保定架中取出，進行觀察并記錄。

1.2.3 飽和硫酸鎂法

1.2.3.1 小鼠試驗。保定好小鼠，用酒精棉球擦拭小鼠尾部，使用1 mL 注射器抽取飽和硫酸鎂注射液以150 mg/kg 快速尾靜脈注射，藥品注入后，立即將 小鼠從保定架中取出，對小鼠進行觀察并記錄。

1.2.3.2 仔兔試驗。保定好仔兔，對仔兔的耳緣靜脈處進行剪毛，再用酒精棉球擦拭仔兔的耳緣靜脈，使用5 mL 注射器抽取飽和硫酸鎂注射液150 mg/kg快速耳緣靜脈注射，藥品注入后，立即將小鼠從保定架中放開，對仔兔進行觀察并記錄。

2 結果

2.1 KCl-氯氨酮方法

注射鹽酸氯氨酮注射液30 s 后，試驗小鼠進入外科麻醉期，此時小鼠由興奮轉為安靜，意識消失，痛覺消失，呼吸變慢，瞳孔縮小，注射KCl 注射液10 min 后，小鼠抽搐并停止呼吸但仍有心跳。11 min 后小鼠心跳停止，小鼠死亡。

而仔兔注射鹽酸氯氨酮注射液50 s 后，試驗仔兔進入外科麻醉期，此時仔兔變得安靜，進入麻醉期，意識消失，痛覺消失，呼吸由不規(guī)則變?yōu)橐?guī)則，角膜充血，注射KCl 注射液15 min 后，仔兔抽搐并停止呼吸但仍有心跳，18 min 后心跳停止，死亡。

2.2 戊巴比妥鈉法

向小鼠尾靜脈注入3%戊巴比妥鈉藥液，3 s 后小鼠在睡眠中停止呼吸與心跳，小鼠死亡。過程中沒有出現(xiàn)抽搐、歪頭、掙扎等不適癥狀。

而向仔兔耳緣靜脈正確注入3%戊巴比妥鈉藥液，10 s 后仔兔在睡眠中停止呼吸與心跳，死亡。藥品注射后沒有出現(xiàn)抽搐、歪頭、掙扎、鳴叫等不適癥狀。

2.3 飽和硫酸鎂法

向小鼠尾靜脈注入飽和硫酸鎂注射液，5 s 后小鼠呼吸和心跳停止并死亡。注射藥品后出現(xiàn)輕微的抽搐、掙扎、歪頭等癥狀。

向仔兔耳緣靜脈正確注入飽和硫酸鎂注射液，20 s 后仔兔呼吸和心跳停止、死亡。過程中伴隨著輕微的抽搐、歪頭、掙扎現(xiàn)象，無明顯不適。

3 討論

3.1 對試驗結果的分析

試驗中試驗小鼠與仔兔的快速死亡可能與試驗動物的種類與給藥途徑有關。本試驗所選試驗動物的體積相對較小，較于其它動物藥物的作用時間較短。試驗中對試驗動物均采取靜脈注射，藥物直接進入血液循環(huán)，且試驗所使用的藥品劑量均為大劑量，因而導致試驗動物的快速死亡。

試驗中戊巴比妥鈉方法使動物的死亡最平穩(wěn)且時間最短，這可能是與試驗材料的選取有關。本試驗只選用了小鼠與仔兔，一定程度上影響試驗結果。也可能與戊巴比妥鈉常用于處死鼠和兔、不同動物的麻醉特點不同有關。試驗中KCl 注射液對動物刺激較大，可能是KCl 直接作用于動物神經(jīng)系統(tǒng)，造成動物呼吸抑制(暫停)后才失去意識,因此動物在無法轉動后亦遭受一段時間的痛苦和壓迫，預先麻醉能減緩動物的痛苦。

3.2 本試驗的臨床意義

通過本次試驗研究，可以清楚地比較出多種安樂死方法中效果相對較好的一種。為避免動物實施安樂死時產(chǎn)生痛苦做出貢獻，本次試驗中各種藥劑作用試驗動物產(chǎn)生的效果可以為相關研究提供數(shù)據(jù)，對動物安樂死方法的研究具有重要意義。

3.3 試驗動物的死亡時期

動物因麻醉而死亡的時期分為四期：鎮(zhèn)痛期、興奮期、外科麻醉期、延髓麻痹期。臨床一般在外科麻醉期進行手術。第一期-鎮(zhèn)痛期（隨意運動期）：動物靜臥，定向力消失，意識模糊，痛覺遲鈍，呼吸正常，眼球位置不固定，瞳孔無變化，角膜反射存在，骨骼肌張力正常，此期大約持續(xù)7 min；第二期-興奮期（不隨意運動期）：動物不隨意運動性興奮，意識模糊，幾乎全部消失，痛覺幾乎全部消失，呼吸加深，極不規(guī)則，眼球震顫，瞳孔散大，角膜反射仍然存在，骨骼肌張力收縮，有明顯的吞咽動作隨后嘔吐，此期大約持續(xù)5 min；第三期-外科麻醉期：動物由興奮轉為安靜，意識消失，痛覺消失，呼吸變慢，由不規(guī)則變?yōu)橐?guī)則，眼球由震顫到固定，瞳孔縮小，角膜反射仍然存在，骨骼肌張力松弛，舌頭伸出口外，此期大約持續(xù)8 min；第四期-死亡時期：在這一期動物因深度麻醉而死亡。對動物實施安樂死時，預先對動物進行麻醉應在第三期進行，在第四期進行動物的安樂死。

3.4 試驗中使用的方法

本試驗只對非吸入性藥劑方法進行研究比較，物理方法（頸椎脫臼,斷頭,放血,槍擊,電擊等）與吸入性藥劑法（常見藥物如乙醚、氮氣、一氧化碳、二氧化碳等麻醉藥劑）這里未做研究，有待進一步探討解決。

該方法要求操作人員須具有熟練的動物靜脈注射技術，這樣會將動物死亡的痛苦減少到最低，因而動物安樂死需要由專業(yè)人員進行。

3.5 試驗人員及環(huán)境

通過試驗感受到在對動物實施安樂死的過程中，人員需溫柔穩(wěn)固的保定動物,這樣能安撫即將實施安樂死的動物。在每次實施安樂死后若未徹底清洗殘留的血跡和氣味，會使等待實施安樂死的動物精神緊張，焦躁不安，沒有殘留氣味的設備和清新的空氣會給即將實施安樂死的動物帶來積極地影響。