溫曉梨,蔡芳燕,單 思,廖永安,劉紅寧*

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué),江西 南昌 330004;2.南昌醫(yī)學(xué)院,江西 南昌 330004)

根據(jù)世界衛(wèi)生組織癌癥研究機(jī)構(gòu)發(fā)布的2020年世界癌癥報(bào)告,2020年中國(guó)癌癥新發(fā)病例增長(zhǎng)至456.9萬人,死亡病例增長(zhǎng)至300.3萬人,相較2015年,我國(guó)新發(fā)與死亡病例分別提升了16.3%與28.4%,癌癥已成為危害我國(guó)居民健康的最主要疾病之一[1]。目前癌癥治療缺乏有效手段,死亡率仍居高不下,且醫(yī)療費(fèi)用高昂,而中醫(yī)藥在腫瘤防治方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。中醫(yī)理論認(rèn)為,機(jī)體的陰陽失調(diào)是導(dǎo)致疾病發(fā)生發(fā)展的根本原因,惡性腫瘤也是如此[2]。惡變組織細(xì)胞的不斷增殖,是處于“陽”過亢狀態(tài),而機(jī)體的陰不足,不能抑制陽的過亢,出現(xiàn)“陰消散過度,陽生成過盛”,即“陰”不能“勝陽”“斂陽”,其必然的結(jié)果便是屬于“陽”性的組織細(xì)胞超常分裂與增生,并且這種增生細(xì)胞因失去“陰”的約束而必然發(fā)生惡性腫瘤。惡性腫瘤一旦發(fā)生,患者由于消耗多,氣血虛損,以陰虛、血虛為多見;而手術(shù)后的放療易傷人體的陰液,又可加劇陰虛。因此,無論是在腫瘤發(fā)生之前,腫瘤發(fā)生期間還是放療后,人體都會(huì)出現(xiàn)陰虛,陰虛始終貫穿于腫瘤發(fā)生發(fā)展的過程中。2008年本課題組提出機(jī)體“陰虛”是惡性腫瘤發(fā)病主要起因的“陰虛癌瘤相關(guān)”假說,并認(rèn)為滋陰可有效防治惡性腫瘤[3]。近年來臨床上使用滋陰補(bǔ)腎的經(jīng)典復(fù)方六味地黃丸防治腫瘤起到很好的療效[4-6]。本研究從調(diào)控MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路;協(xié)同增效,增強(qiáng)自殺基因治療效果;增強(qiáng)免疫功能,減輕化療毒副作用;抑制炎癥因子的表達(dá);抑制腫瘤血管生長(zhǎng)等五個(gè)方面,對(duì)滋陰方六味地黃丸防治腫瘤的機(jī)制進(jìn)行總結(jié),以期更好地展示六味地黃丸抗腫瘤的機(jī)制研究現(xiàn)狀,為后續(xù)的進(jìn)一步研究提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 調(diào)控MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

六味地黃丸可通過調(diào)控Ras/Raf/MAPK/ERK信號(hào)通路抑制腫瘤的生長(zhǎng)[7]。MAPK是一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,在真核生物中高度保守,其在細(xì)胞的增殖、應(yīng)激反應(yīng)、凋亡、免疫應(yīng)答等生命活動(dòng)進(jìn)程中起著非常重要的作用。MAPK信號(hào)通路不僅參與正常的細(xì)胞生理過程,也參與了腫瘤等多種疾病的病理過程,MAPK包括ERK、JNK、P38三條下游信號(hào)通路,它們通過磷酸化激活下游蛋白來調(diào)控生理病理過程。ERK的表達(dá)對(duì)腫瘤的發(fā)展至關(guān)重要,其過度活化在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。Ras/Raf/MAPK/ERK通路是所有MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中最重要的信號(hào)級(jí)聯(lián),在腫瘤細(xì)胞的生存和發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用[8]。

MAP3K1可激活MAPK信號(hào)通路,活化的MAPK能夠調(diào)控下游關(guān)鍵基因的轉(zhuǎn)錄。SOX2亦是MAPK信號(hào)通路的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,SOX2可通過MAPK信號(hào)通路調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移,沉默SOX2可抑制咽喉癌的增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移[9]。六味地黃丸可上調(diào) MAP3K1 的蛋白表達(dá),下調(diào)SOX2的表達(dá)來調(diào)控MAPK信號(hào)通路,從而發(fā)揮抑制乳腺癌生長(zhǎng)的作用[10]。MAP3K1、KLF4可抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖及遷移,而且在乳腺癌組織中MAP3K1、KLF4低表達(dá)[11-12]。在自發(fā)三陰性乳腺癌小鼠模型中,六味地黃丸可上調(diào)MAP3K1的表達(dá),從而激活KLF4的表達(dá),發(fā)揮抑制三陰性乳腺癌的作用[13]。因此滋陰方六味地黃丸可通過上調(diào) MAP3K1 的蛋白表達(dá)、激活KLF4的表達(dá)、下調(diào) SOX2 的表達(dá)來調(diào)控MAPK信號(hào)通路,從而發(fā)揮抑制乳腺癌生長(zhǎng)的作用。

2 協(xié)同增效,增強(qiáng)自殺基因系統(tǒng)的殺傷效果

六味地黃丸協(xié)同增效作用主要與增強(qiáng)旁殺傷效應(yīng)密切相關(guān),旁殺傷效應(yīng)的主要機(jī)制是縫隙連接(GJ)機(jī)制[14]。細(xì)胞縫隙連接通訊(GJIC)的基本結(jié)構(gòu)蛋白是縫隙連接蛋白(Cx),Cx是細(xì)胞之間存在的孔道,在免疫系統(tǒng)中扮演著重要的角色,參與抗原的提呈、T細(xì)胞活化,可增強(qiáng)免疫殺傷效應(yīng)[15-16]。在肝癌中Cx介導(dǎo)的GJIC表達(dá)出現(xiàn)下調(diào)或喪失,而上調(diào)Cx的表達(dá)或改善GJIC功能可達(dá)到抗腫瘤效果[17]。

在大鼠肝癌細(xì)胞(CBRH7919)中,六味地黃丸主要入血成分對(duì)HSV-tk/GCV自殺基因系統(tǒng)的殺傷具有增效作用,其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)可能是六味地黃丸主要入血成分刺激淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的活性物質(zhì)[18]。在小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞模型中,六味地黃丸可協(xié)同增效HSV-tk/GCV自殺基因療法,其機(jī)制為上調(diào)小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞中Cx43的表達(dá),改善GJIC功能,促進(jìn)腫瘤抗原的提呈,促進(jìn)CD8+T細(xì)胞活化,從而增強(qiáng)其對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用[19-20]。在大鼠肝癌細(xì)胞CBRH7919模型中,六味地黃丸可明顯增加Cx32、Cx43 mRNA和蛋白的表達(dá),并促使Cx32、Cx43 從細(xì)胞質(zhì)移位至細(xì)胞膜,增加其在細(xì)胞膜上的定位,從而增強(qiáng)GJIC功能,發(fā)揮增效作用[21-22]。因此滋陰方六味地黃丸可通過增加Cx32、Cx43 mRNA和蛋白的表達(dá),促使Cx32、Cx43蛋白移位至細(xì)胞膜,增強(qiáng)GJIC功能,促進(jìn)CD8+T細(xì)胞活化,來達(dá)到協(xié)同增效作用。

3 增強(qiáng)免疫功能,減輕化療毒副作用

增強(qiáng)免疫功能可有效抑制腫瘤生長(zhǎng),樹突狀細(xì)胞(DCs)是眾多免疫細(xì)胞中的一種,具有抗原提呈功能。DCs是激發(fā)體內(nèi)特異性免疫反應(yīng)的關(guān)鍵細(xì)胞,為T細(xì)胞活化提供信號(hào)[23]。腫瘤免疫以T淋巴細(xì)胞為主,CD4+T淋巴細(xì)胞被稱為輔助性T淋巴細(xì)胞,可分泌細(xì)胞因子來調(diào)節(jié)腫瘤免疫,在機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。然而在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)DCs分化障礙、成熟過程異常、表型缺陷及腫瘤微環(huán)境中的外泌體阻斷其分化,致使腫瘤免疫逃逸[23]。

體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)六味地黃丸可促進(jìn)樹突狀細(xì)胞分化與成熟,從而提高機(jī)體對(duì)胃癌細(xì)胞的殺傷能力[24]。六味地黃丸可顯著增加宮頸癌患者、非小細(xì)胞肺癌患者血清中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平,提高機(jī)體免疫功能,抑制腫瘤的生長(zhǎng)[4,5]。因此六味地黃丸可通過促進(jìn)樹突狀細(xì)胞分化與成熟,增加患者血清中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平,以提高機(jī)體免疫功能,從而發(fā)揮抗腫瘤效果。

西醫(yī)對(duì)惡性腫瘤的治療采用手術(shù)治療聯(lián)合化療、放療等手段,然而在臨床上放化療會(huì)導(dǎo)致多種毒副反應(yīng),而六味地黃丸可有效減輕化療毒副作用。

宮頸癌患者服用六味地黃丸治療后粒細(xì)胞減少、血紅蛋白減少、腎功能損害、惡心嘔吐和腹痛腹瀉等毒副反應(yīng)癥狀減輕[4]。結(jié)腸癌化療患者加服六味地黃丸能減輕化療所致的骨髓抑制、血小板減少等癥狀[25]。六味地黃丸聯(lián)合化療治療非小細(xì)胞肺癌可明顯改善心肺功能[5]。六味地黃丸聯(lián)合CHOP方案治療非霍奇金淋巴瘤,能顯著減輕化療引起的肝腎毒副反應(yīng),改善患者中醫(yī)證候[6]。六味地黃丸聯(lián)合XELOX方案可有效抑制老年晚期結(jié)直腸癌生長(zhǎng),提高化療效果,提高生存質(zhì)量評(píng)分,降低化療引起的乏力、納差、惡心、嘔吐、腹瀉、貧血、白細(xì)胞減少、血小板減少、手足綜合征等毒副反應(yīng)[26]。六味地黃丸聯(lián)合FOLFOX6方案治療晚期胃癌可抑制腫瘤生長(zhǎng)、提高化療效果、改善生存質(zhì)量,減少化療引起的骨髓抑制、消化道反應(yīng)等毒副作用[27]。通過對(duì)腎陰虛型乳腺癌骨轉(zhuǎn)移患者的臨床研究,發(fā)現(xiàn)在唑來膦酸治療基礎(chǔ)上加服六味地黃丸,能有效改善患者臨床癥狀和活動(dòng)能力,提高腫瘤患者生活質(zhì)量[28]。因此六味地黃丸可減輕多種腫瘤化療患者心、肺、肝、腎、骨髓造血系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)毒副反應(yīng),改善患者中醫(yī)證候和生存質(zhì)量,有效減輕化療毒副作用。因此六味地黃丸不僅可以增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能,亦能減輕化療毒副作用。

4 抑制炎癥因子的表達(dá)

腫瘤的發(fā)生與慢性炎癥息息相關(guān),控制慢性炎癥的發(fā)生可有效防治腫瘤,而多種炎癥因子參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程,控制相關(guān)炎癥因子的表達(dá)在抗腫瘤中具有重要意義。

在烏拉坦誘發(fā)的小鼠肺癌模型中,六味地黃丸可通過降低炎癥因子TNF-α的水平、下調(diào)PCNA的表達(dá)來抑制腫瘤生長(zhǎng)[29]。在N-甲基-N-亞硝基脲誘導(dǎo)的小鼠胃癌模型中,糖尿病可明顯增加小鼠胃異型增生,增加胃癌的發(fā)生,六味地黃丸可抑制Ⅱ型糖尿病相關(guān)胃癌的發(fā)生,其機(jī)制可能與抑制IGF-1/IGF-1R/AKT信號(hào)通路的活性,降低血清及胃組織中IL-6、TNF-α、1L-1β、1L-10相關(guān)炎性因子的表達(dá)有關(guān)[30,31]。因此,六味地黃丸可通過降低炎癥因子TNF-α、IL-6、TNF-α、1L-1β、1L-10的表達(dá),從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)。

5 抑制腫瘤血管生長(zhǎng)

血管生長(zhǎng)因子(VEGF)、血管生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)是刺激血管生長(zhǎng)的最主要因素,參與了腫瘤血管的生成?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP),可特異性降低細(xì)胞外基質(zhì)成分,并通過調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附,參與新生血管形成,被認(rèn)為是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要分子標(biāo)記,在癌細(xì)胞的快速增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移的過程中起到很重要的作用[32]。

在小鼠自發(fā)性乳腺癌模型中,與對(duì)照組相比,高劑量組(4.6g·kg-1·d-1)和低劑量組(2.3g·kg-1·d-1)均能抑制腫瘤的生長(zhǎng),延長(zhǎng)小鼠生存時(shí)間,其中的機(jī)制是六味地黃丸高劑量組和低劑量組均可明顯抑制腫瘤組織中VEGF、ERK和Cyclin D1的表達(dá)[33]。在DMBA誘發(fā)性乳腺癌小鼠模型中,滋陰方藥六味地黃湯可抑制乳腺癌的發(fā)生及惡化,免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示六味地黃湯1.6g·kg-1·d-1和6.4g·kg-1·d-1劑量組均可明顯抑制MMP-9和VEGF的表達(dá),經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示,VEGF與MMP-9的表達(dá)呈正相關(guān)[34]。在移植性原發(fā)性肝癌小鼠模型中,六味地黃丸可明顯抑制腫瘤生長(zhǎng),促使G0-G1期細(xì)胞聚集,減少S期細(xì)胞,促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡,降低血清VEGF水平,從而產(chǎn)生良好的抗腫瘤作用[35]。在荷瘤H22肝癌小鼠模型中,六味地黃湯聯(lián)合CTX對(duì)荷瘤H22肝癌小鼠抑瘤率達(dá)到76.1%,通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腫瘤組織中VEGF、VEGFR2、MMP9蛋白的表達(dá)水平,結(jié)果顯示六味地黃湯組和六味地黃湯聯(lián)合CTX組均可抑制荷瘤H22肝癌小鼠組織VEGF、VEGFR2、MMP9蛋白表達(dá),從而減少肝癌組織血管生長(zhǎng)[36-37]。因此六味地黃丸可通過抑制VEGF、VEGFR2、MMP9的表達(dá)來抑制腫瘤血管的生長(zhǎng),發(fā)揮抗腫瘤效果。

6 結(jié)語

中藥復(fù)方是我國(guó)特有的藥物應(yīng)用形式,因其多成分多靶點(diǎn)的特點(diǎn),應(yīng)對(duì)復(fù)雜性疾病,展示了獨(dú)特的療效優(yōu)勢(shì)。西醫(yī)針對(duì)腫瘤的治療多用放化療法,以縮小腫塊為最終目的,而中醫(yī)除考慮抑瘤以外,還以緩解癌癥患者的各種癥狀,提高生存質(zhì)量、延長(zhǎng)生存期為目的。六味地黃丸作為滋陰經(jīng)典名方,在臨床上可有效防治腫瘤,減輕化療副作用,但目前對(duì)其作用機(jī)制研究還不夠深入,亟需運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)深入解析六味地黃丸防治腫瘤的作用機(jī)制,為六味地黃丸的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。本研究通過對(duì)六味地黃丸抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行總結(jié)歸納,旨在為六味地黃丸的臨床應(yīng)用及深入研究提供參考。