孫 倩，張 賀

北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室，遼寧 沈陽(yáng) 110016

大面積全層皮膚缺損是臨床和戰(zhàn)創(chuàng)傷中的常見病、多發(fā)病，皮膚移植術(shù)是其治療的基本手段，也是盡早封閉創(chuàng)面的的有效方法。建立皮膚移植動(dòng)物模型是臨床研究的前提。大鼠由于價(jià)格低廉，實(shí)驗(yàn)操作方便簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)用抗體種類齊全等優(yōu)點(diǎn)被許多實(shí)驗(yàn)者采用[1-2]，但大鼠皮膚皮下有肌肉層，滑動(dòng)范圍較大，其愈合過程以收縮愈合為主，大鼠的植皮模型制作一直是實(shí)驗(yàn)外科研究的難點(diǎn)。開發(fā)一種針對(duì)大鼠皮膚特點(diǎn)的植皮模型在皮膚再生領(lǐng)域研究中具有十分重要的意義[3-4]。本課題組針對(duì)此難點(diǎn)成功開發(fā)了大鼠“環(huán)形固定法”皮膚移植模型?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及設(shè)計(jì) 選取30只體質(zhì)量260～300 g的SPF級(jí)雄性SD大鼠[北京華富康生物科技股份有限公司提供，許可證號(hào)SCXK(京)2019-0008]，移植后單籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食進(jìn)水。設(shè)計(jì)4處植皮對(duì)比實(shí)驗(yàn)：在大鼠背部設(shè)計(jì)4個(gè)直徑約10 mm的圓形全層皮膚缺損創(chuàng)面位置，分別標(biāo)記為1、2、3、4號(hào)位(圖1)，1號(hào)位采用“環(huán)形固定法”移植大鼠尾部皮膚，2號(hào)位采用“環(huán)形固定法”移植大鼠背部皮膚，3號(hào)位采用“環(huán)形固定法”移植大鼠側(cè)腹部皮膚，4號(hào)位采用常規(guī)移植法移植大鼠尾部皮膚[5]。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

圖1 4處預(yù)植皮位 圖2 1號(hào)位和3號(hào)位取皮處(a.尾部；b.側(cè)腹部)

1.2 儀器與試劑 0.3%戊巴比妥鈉溶液(福州飛凈生物科技有限公司)；10%氯化鈉注射液(華仁藥業(yè)股份有限公司，產(chǎn)品批號(hào)T2008064)；4%多聚甲醛溶液(福州飛凈生物科技有限公司)；0.5%碘伏溶液(上海利康消毒高科技有限公司，產(chǎn)品批號(hào)20200623S)；推子(深圳科德士電器有限公司)。

1.3 動(dòng)物模型制作 適應(yīng)性飼養(yǎng)觀察5～7 d后，戊巴比妥鈉溶液腹腔注射麻醉。全身無(wú)疼痛反應(yīng)后，大鼠背部和腹部備皮，碘伏溶液進(jìn)行全身消毒，手術(shù)全程為無(wú)菌操作[5-7]。取大鼠尾尖部皮膚，用線在距離尾尖4 cm處結(jié)扎，然后用剪刀剪掉尾尖(圖2a)，剝離皮膚，平鋪剪成直徑10 mm左右的形狀，放入10%生理鹽水中，備用。取側(cè)腹部皮膚，在腹部左側(cè)用記號(hào)筆畫好直徑約10 mm的圓形(圖2b)，用鑷子提起皮膚，用剪刀沿著圓形邊緣剪出一個(gè)切口，沿著切口鈍性分離皮膚和肌肉，沿著圓形邊緣剪掉整塊腹皮，備用。取背部皮膚，在背部用記號(hào)筆畫好4個(gè)直徑約10 mm的圓形，用鑷子提起皮膚，用剪刀沿著圓形邊緣剪出一個(gè)切口，沿著切口鈍性分離皮膚和肌肉，沿著圓形邊緣剪掉背皮[8-10](圖3a)。1號(hào)位采用“環(huán)形固定法”(圖3b)，將取好的尾皮底部平鋪到創(chuàng)面，與創(chuàng)面貼合，用固定環(huán)壓住尾皮，固定環(huán)的中間凹槽部位用線與大鼠皮膚縫合以防脫落；2號(hào)位用背皮，3號(hào)位用側(cè)腹皮，方法同1號(hào)位。4號(hào)位采用常規(guī)移植法(圖3c)，將尾皮平鋪到創(chuàng)面上，背部原皮壓住尾皮，原皮的邊緣與創(chuàng)面邊緣縫合。移植皮取材見圖4。

圖3 1～4號(hào)植皮位及植皮方法(a.1～4號(hào)植皮位；b.環(huán)形固定法；c.常規(guī)移植法) 圖4 移植皮取材

1.4 觀察指標(biāo) 比較1～4號(hào)植皮位的植皮成功率，體表觀察結(jié)果[11-12]，以及HE染色表現(xiàn)。HE染色：各組皮膚標(biāo)本均常規(guī)固定，組織脫水，石蠟包埋后切片，脫蠟水化處理后進(jìn)行HE染色。

2 結(jié)果

2.1 植皮成功率及體表觀察結(jié)果 1～3號(hào)位植皮成功率為85%，4號(hào)位為60%。1～3號(hào)位皮膚成活后均表現(xiàn)出與供皮區(qū)類似的外觀結(jié)構(gòu)，毛發(fā)繼續(xù)生長(zhǎng)，證明毛囊存活；4號(hào)位存活皮膚有部分壞死，依賴瘢痕愈合。2號(hào)位創(chuàng)面愈合效果最佳，術(shù)后5周左右基本愈合。見圖5。

2.2 HE染色表現(xiàn) 1～4號(hào)位存活皮膚均保持供區(qū)皮膚結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：背部皮膚真皮層厚，毛囊粗大；側(cè)腹部皮膚真皮層和表皮層較薄，毛囊弱??；尾部皮膚皮脂腺分布較多，毛囊傾斜角度大[13]。2號(hào)位創(chuàng)面愈合效果最佳，1號(hào)位創(chuàng)面愈合效果優(yōu)于4號(hào)位。見圖6。

圖5 體表觀察結(jié)果(a.1號(hào)位；b.2號(hào)位；c.3號(hào)位；d.4號(hào)位)

圖6 術(shù)后14 d HE染色表現(xiàn)(a.1號(hào)位；b.2號(hào)位；c.3號(hào)位；d.4號(hào)位)

3 討論

創(chuàng)面愈合是一個(gè)動(dòng)態(tài)過程，涉及多種細(xì)胞的生物學(xué)功能，包括角質(zhì)細(xì)胞增殖、成纖維細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)、毛細(xì)血管生成及膠原合成等。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：1～3號(hào)位植皮成功率為85%，4號(hào)位為60%；1～3號(hào)位皮膚成活后均表現(xiàn)出與供皮區(qū)類似的外觀結(jié)構(gòu)，毛發(fā)繼續(xù)生長(zhǎng)，毛囊存活，4號(hào)位存活皮膚有部分壞死，依賴瘢痕愈合，2號(hào)位創(chuàng)面愈合效果最佳，術(shù)后5周左右基本愈合；HE染色中，2號(hào)位創(chuàng)面愈合效果最佳，1號(hào)位創(chuàng)面愈合效果優(yōu)于4號(hào)位。這提示，“環(huán)形固定法”的創(chuàng)面愈合效果優(yōu)于常規(guī)移植法，且以背部皮移植最佳。

在實(shí)驗(yàn)過程中，防止大鼠抓咬掉新移植的皮膚是關(guān)鍵，“環(huán)形固定法”能夠有效防止植皮早期皮片移動(dòng)、脫落及大鼠自身抓撓，促進(jìn)創(chuàng)面更好地恢復(fù)，使大鼠自由活動(dòng)不被束縛?！碍h(huán)形固定法”成功率高[14-15]，術(shù)后未使用抗生素藥物，動(dòng)物未出現(xiàn)感染及死亡。

綜上所述，隨著皮膚移植術(shù)的發(fā)展和進(jìn)步，皮膚移植動(dòng)物模型的應(yīng)用范圍將越來越廣泛，本研究建立的“環(huán)形固定法”皮膚移植模型可為更多相關(guān)研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。