李麗娟，侯延新，吳雪靜，孫宏偉，金鴻楠

(1.河北省承德市第三醫(yī)院婦瘤科，河北 承德 067000；2.河北省承德市婦幼保健院檢驗(yàn)科，河北 承德 067000；3.河北省平泉市醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北 平泉 067500)

子宮腺肌病好發(fā)于30～50歲女性，發(fā)病率10%～47%，且呈逐年升高趨勢[1]。子宮動(dòng)脈栓塞術(shù)(uterine artery embolization，UAE)治療子宮腺肌病在短期內(nèi)能取得一定療效，但中遠(yuǎn)期效果未明，選取適宜療效評(píng)估工具是當(dāng)前重點(diǎn)研究方向之一[2]。組織病理學(xué)檢查雖能有效鑒別子宮腺肌病，但其存在創(chuàng)傷性、療效評(píng)估有限等不足之處。最新研究表明，子宮腺肌病患者血循環(huán)及其他液體中存在豐富、穩(wěn)定的miRNA，如miR-103a-3p、miR-101-3p，但其在子宮腺肌病療效評(píng)估中仍缺乏大量循證支持[3-4]。另有學(xué)者指出，子宮腺肌病發(fā)病關(guān)鍵因素是在位內(nèi)膜向肌層侵襲、生成形成異位內(nèi)膜，可溶性細(xì)胞間黏附分子(soluble intercellular adhesion molecule-1，sICAM-1)是維持細(xì)胞穩(wěn)定重要因子，其表達(dá)異?？稍鰪?qiáng)細(xì)胞黏附侵襲能力，加劇疾病進(jìn)展，但具體機(jī)制未明[5]。本研究統(tǒng)計(jì)子宮腺肌病治療前后miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p表達(dá)，以期為調(diào)整治療方案提供有利依據(jù)。報(bào)告如下。

1 資 料 與 方 法

1.1一般資料 選取2019年7月—2021年7月承德市第三醫(yī)院子宮腺肌病患者125例作為研究組，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合子宮腺肌病診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]：表現(xiàn)為月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)等癥狀，結(jié)合超聲檢查確診；年齡27～50歲；病程≥5個(gè)月；子宮體積60～100 cm3；排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他生殖系統(tǒng)疾病(盆腔炎、陰道炎、宮頸癌)；重要臟器器質(zhì)性病變；采集相關(guān)資料時(shí)不配合；放置宮內(nèi)節(jié)育器；近4周內(nèi)接受性激素藥物治療。另選擇同期87例月經(jīng)正常、無痛經(jīng)的健康體檢者作為對(duì)照組，婦科檢查正常，無生殖系統(tǒng)疾病及全身性系統(tǒng)疾病。研究組：年齡30～50歲，平均(40.42±4.11)歲；體重50～65 kg，平均(57.11±2.24)kg；病理分級(jí)：Ⅰ級(jí)38例，Ⅱ級(jí)67例，Ⅲ級(jí)20例；痛經(jīng)程度：輕度41例，中度60例，重度24例；對(duì)照組：年齡28～50歲，平均(39.56±5.68)歲；體重48～65 kg，平均(55.96±3.72)kg。2組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)通過。所有患者及其家屬均知情同意且簽署知情同意書。

1.2方法 ①分別于治療前、治療6個(gè)月后清晨，采集2 mL空腹外周肘靜脈血，以3 000 r/min速度離心10 min，取上清液，采用Trizols試劑盒(美國Sigma公司)提取血清總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄為cDNA模板，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國BioRad公司)及試劑盒擴(kuò)增血清中miR-103a-3p、miR-101-3p，程序設(shè)置為95 ℃預(yù)變性90 s，95 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸20 s，共40個(gè)循環(huán)，以2-△△CT法進(jìn)行半定量分析，計(jì)算miR-103a-3p、miR-101-3p表達(dá)；取石蠟標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)法測定可溶性細(xì)胞間黏附分子1(soluble intercellular adhesion molecule-1，sICAM-1)水平，應(yīng)用HMIAS-200行全自動(dòng)醫(yī)學(xué)彩色圖像分析系統(tǒng)對(duì)免疫組織化學(xué)標(biāo)本進(jìn)行圖像分析，顯微鏡下測量平均吸光度值。②應(yīng)用視覺模擬評(píng)分法(visual analogue scale，VAS)[7]評(píng)估痛經(jīng)程度，0～3分為輕度，4～6分為中度，7～10分為重度。③研究組均接受UAE，平臥位，局部麻醉，采用Seldinger技術(shù)行一側(cè)股動(dòng)脈置管，5.0 F Cobra導(dǎo)管完成雙側(cè)子宮動(dòng)脈，結(jié)合患者實(shí)際選取適宜非球形聚乙烯醇(直徑300～500、500～700、700～900 μm)，X線透視下行子宮動(dòng)脈栓塞，栓塞結(jié)束后行數(shù)字減影血管造影檢查，以子宮動(dòng)脈血流中斷為宜。治療6個(gè)月后評(píng)估治療效果[8]，分為完全緩解(痛經(jīng)完全消失，子宮體積較治療前縮小≥50%，月經(jīng)規(guī)律，月經(jīng)量正常)、明顯緩解(疼痛評(píng)級(jí)降低2個(gè)級(jí)別以上，子宮體積較治療前縮小30%～49%，月經(jīng)周期及月經(jīng)量明顯改善)、部分緩解(疼痛評(píng)級(jí)降低2個(gè)級(jí)別以內(nèi))和無效(痛經(jīng)、子宮體積及月經(jīng)周期均無明顯變化，甚至出現(xiàn)盆腔不適)4個(gè)等級(jí)。完全緩解和部分緩解定義為臨床有效，部分緩解和無效確定為臨床無效。

1.3觀察指標(biāo) ①2組治療前、治療6個(gè)月后miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p水平。②研究組不同痛經(jīng)強(qiáng)度患者治療前、治療6個(gè)月后miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p水平。③研究組不同療效患者治療前、治療6個(gè)月后miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p水平。④miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p差值與痛經(jīng)強(qiáng)度、效果相關(guān)性。⑤miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p差值預(yù)測子宮腺肌病療效價(jià)值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、配對(duì)t檢驗(yàn)和SNK-q檢驗(yàn)，相關(guān)性研究采用Spearman分析，繪制受試者工作曲線(receiver operating characteristic，ROC)及曲線下面積(area under the ROC curve，AUC)分析各指標(biāo)對(duì)子宮腺肌病療效預(yù)測價(jià)值。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.12組治療前后各指標(biāo)表達(dá) 治療前研究組miR-103a-3p、miR-101-3p水平高于對(duì)照組，sICAM-1水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后，研究組miR-103a-3p、miR-101-3p水平低于治療前，sICAM-1水平高于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組治療前后各指標(biāo)表達(dá)

2.2研究組不同痛經(jīng)強(qiáng)度患者各指標(biāo)表達(dá) 治療前、治療6個(gè)月后研究組重度患者miR-103a-3p、miR-101-3p水平高于輕度、中度患者，sICAM-1水平低于輕度、中度患者，且中度患者miR-103a-3p、miR-101-3p水平高于輕度，sICAM-1水平低于輕度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后，2組miR-103a-3p、miR-101-3p水平低于治療前，sICAM-1水平高于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 研究組不同痛經(jīng)強(qiáng)度治療前后各指標(biāo)表達(dá)

2.3研究組不同效果患者各指標(biāo)表達(dá) 治療前、治療6個(gè)月后研究組有效患者miR-103a-3p、miR-101-3p水平低于無效患者，sICAM-1水平高于無效患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 研究組不同效果患者各指標(biāo)表達(dá)比較

2.4各指標(biāo)與痛經(jīng)強(qiáng)度、效果相關(guān)性分析 miR-103a-3p、miR-101-3p與痛經(jīng)強(qiáng)度呈正相關(guān)，與效果呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；sICAM-1與痛經(jīng)強(qiáng)度呈負(fù)相關(guān)，與效果呈正相關(guān)(P<0.05)。見表4。

表4 各指標(biāo)與痛經(jīng)強(qiáng)度、效果相關(guān)性分析

2.5各指標(biāo)對(duì)子宮腺肌病療效預(yù)測價(jià)值 ROC曲線顯示，miR-103a-3p差值預(yù)測子宮腺肌病療效的AUC為0.800(95%CI：0.719～0.866)，最佳截?cái)嘀?0.43，敏感度為64.00%，特異度為81.00%；sICAM-1差值預(yù)測子宮腺肌病療效的AUC為0.827(95%CI：0.749～0.889)，最佳截?cái)嘀怠?.21，敏感度為96.00%，特異度為63.00%；miR-101-3p差值預(yù)測子宮腺肌病療效的AUC為0.772(95%CI：0.689～0.843)，最佳截?cái)嘀?580.75，敏感度為64.00%，特異度為91.00%。見圖1。

圖1 各指標(biāo)對(duì)子宮腺肌病療效預(yù)測價(jià)值

2.6各指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測子宮腺肌病療效價(jià)值 根據(jù)2.5結(jié)果選取敏感度及特異度最佳指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合，其中敏感度最佳為sICAM-1，特異度最佳為miR-101-3p，2者差值聯(lián)合預(yù)測子宮腺肌病療效的AUC為0.909(95%CI：0.844～0.953)，敏感度為84.00%，特異度為81.00%。見圖2。

圖2 各指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測子宮腺肌病療效價(jià)值

3 討 論

子宮腺肌病多表現(xiàn)為痛經(jīng)，月經(jīng)過多及不孕等，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，盡早診治是控制子宮腺肌病進(jìn)展重要手段[9]。CT、超聲是鑒別子宮腺肌病重要手段，但隨其臨床應(yīng)用逐漸增多，誤診及漏診風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。因此，探索敏感度及特異度強(qiáng)的子宮腺肌標(biāo)志物尤為迫切。

miRNAs是一類小分子非編碼單鏈RNA大分子，具有高度穩(wěn)定性、組織特異性等特點(diǎn)，在疾病篩查及初步診斷中具有廣泛應(yīng)用前景，但有關(guān)miRNAs與子宮腺肌病相關(guān)研究報(bào)道較少[10]。miR-103a-3p是miRNA家族成員之一，在子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌等生殖系統(tǒng)疾病中均呈高表達(dá)，可促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、遷移[11]。陳新元等[12]研究顯示，子宮腺肌病患者血清miR-103a-3p表達(dá)顯著高于健康者，且其表達(dá)與痛經(jīng)程度呈正相關(guān)，推測原因與其調(diào)控多種核質(zhì)腺嘌呤核苷三磷酸結(jié)合的生物學(xué)過程有關(guān)，可促進(jìn)子宮腺肌病發(fā)展，加重痛經(jīng)程度。miR-101-3p是miRNA101家族成員，甘霖[13]研究顯示，子宮腺肌病患者血清miR-101-3p有顯著差異性表達(dá)，且其表達(dá)隨著月經(jīng)量增多、痛經(jīng)加重而升高，可作為生物標(biāo)志物單獨(dú)用于子宮腺肌病早期篩查。本研究顯示，研究組miR-101-3p、miR-103a-3p表達(dá)均高于對(duì)照組，且與痛經(jīng)程度呈正相關(guān)，與上述研究結(jié)論相似，說明miR-101-3p、miR-103a-3p在子宮腺肌病病情評(píng)估中具有重要作用。本研究結(jié)果顯示，治療前、治療6個(gè)月后研究組有效患者miR-103a-3p、miR-101-3p水平低于無效患者，且差值小于無效患者。痛經(jīng)是子宮腺肌病常見主訴，痛經(jīng)緩解情況是評(píng)價(jià)子宮腺肌病療效重要指標(biāo)[14]，故本研究中療效評(píng)估以痛經(jīng)緩解情況為主。UAE可切斷子宮血流，減少病灶組織血供，縮小病灶組織，緩解痛經(jīng)程度，下調(diào)血清miRNAs表達(dá)[15]。ROC曲線顯示，miR-103a-3p、miR-101-3p預(yù)測子宮腺肌病UAE療效的AUC為0.800、0.772，提示血清miR-103a-3p、miR-101-3p對(duì)于評(píng)估子宮腺肌病患者UAE治療效果具有一定臨床價(jià)值，可將其作為本病治療靶點(diǎn)之一。

ICAM-1是一種跨膜免疫球蛋白，主要分布于子宮內(nèi)膜腺上皮和間質(zhì)細(xì)胞、白細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞，其機(jī)制為調(diào)節(jié)細(xì)胞間、細(xì)胞和基質(zhì)間黏膜作用；參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、腫瘤轉(zhuǎn)移浸潤、血管生長、免疫炎性反應(yīng)等生理病理過程[16-18]。一般情況下，ICAM-1多以sICAM-1形式存在體液中，現(xiàn)有資料顯示，ICAM-1在正常內(nèi)膜中呈高表達(dá)，其次是子宮腺肌病、子宮異位癥，符合本研究結(jié)論[19]。這可能與子宮腺肌病在位內(nèi)膜細(xì)胞間黏膜作用下降，基底膜細(xì)胞間隙增大，物理屏障功能減弱有關(guān)，導(dǎo)致內(nèi)膜突破基底膜向肌層浸潤、轉(zhuǎn)移。sICAM-1表達(dá)隨著痛經(jīng)程度增加而降低，可見其水平持續(xù)降低提示病情程度嚴(yán)重。本研究還顯示，治療前、治療6個(gè)月后有效患者sICAM-1水平高于無效患者，且單純預(yù)測子宮腺肌病UAE療效的AUC為0.827，佐證sICAM-1可作為評(píng)價(jià)子宮腺肌病UAE療效重要工具之一。

從圖1結(jié)果來看，miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p單純預(yù)測子宮腺肌病UAE療效價(jià)值仍存在提升空間，加以子宮腺肌病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，三者參與子宮腺肌病不同發(fā)病機(jī)制，納入敏感度和特異度最佳的2個(gè)指標(biāo)聯(lián)合預(yù)測更為全面、準(zhǔn)確。研究顯示，聯(lián)合預(yù)測子宮腺肌病UAE療效的AUC為0.909，敏感度及特異度分別為84.00%、81.00%，提示聯(lián)合預(yù)測子宮腺肌病UAE療效價(jià)值高，可為后續(xù)治療方案調(diào)整及預(yù)后評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

綜上所述，子宮腺肌病患者miR-103a-3p、sICAM-1、miR-101-3p呈異常表達(dá)，其表達(dá)與痛經(jīng)強(qiáng)度、UAE治療效果有關(guān)，聯(lián)合檢測有助于提高療效預(yù)測價(jià)值，促進(jìn)預(yù)后改善。但本研究仍存在不足之處，即樣本來源單一，樣本量過少，且未考慮病變范圍對(duì)子宮腺疾病患者各指標(biāo)影響，日后仍需多中心、多渠道選取樣本，擴(kuò)大樣本量，增設(shè)病變范圍這一概念進(jìn)行研究證實(shí)。