劉 淼，杜 強，毛 剛，張 帆，周雪雷，萬學梅

（成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院脾胃病科，四川 成都 610013）

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種影響結(jié)腸黏膜的慢性自身免疫性疾病，其發(fā)病機制與免疫和感染因素相關(guān)，臨床表現(xiàn)為持續(xù)或反復發(fā)作的腹瀉、黏液膿血便、腹痛、里急后重和不同程度的全身癥狀[1]。該病遷延難愈，極易復發(fā)，且有癌變傾向，嚴重影響患者的生活質(zhì)量[2]。目前，UC的臨床治療主要以氨基水楊酸類制劑、腎上腺皮質(zhì)激素、免疫調(diào)節(jié)劑等為主[3]，短期可取得較好的療效，但停藥后復發(fā)風險高，安全性差[4]。中醫(yī)在潰瘍性結(jié)腸炎的預防與治療上有著獨特的見解與療效[5]。UC 屬于“腸澼”“痢疾”泄瀉”等范疇，與肝脾肺腎關(guān)系密切[6，7]。埋線療法可通過穴位線體的持續(xù)刺激，將針刺的留針理論與現(xiàn)代物理醫(yī)學相結(jié)合，具有刺激量大、作用持續(xù)的優(yōu)點[8，9]。本研究基于“俞募配穴”理論，將穴位埋線療法和穴位針刺兩種方法治療大腸濕熱型輕-中度活動性UC 的療效進行比較，以期為UC 的治療提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年1 月-2020 年12 月成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院收治的大腸濕熱型輕-中度活動性UC 患者80 例，年齡24～63 歲，中位年齡42歲。采用隨機數(shù)字表法將患者分為觀察組和對照組，均為40 例。觀察組男22 例，女18 例，年齡24～63 歲，平均年齡（40.13±11.87）歲，病程0.5～6.0 年，平均病程（2.69±1.54）年。對照組男23 例，女17 例，年齡26～62 歲，平均年齡（41.53±12.36）歲，病程0.6～4.5年，平均病程（2.36±1.43）年。兩組性別、年齡、病程比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院倫理委員會審核通過，患者均知情同意，自愿參加本研究，并簽署知情同意書。

1.2 診斷標準 西醫(yī)診斷參照《中國炎癥性腸病診斷治療規(guī)范的共識意見》中潰瘍性結(jié)腸炎的診斷標準[10]。中醫(yī)診斷參照《證候類中藥新藥臨床研究技術(shù)指導原則》[11]與《潰瘍性結(jié)腸炎中醫(yī)診療專家共識意見(2017)》[12]潰瘍性結(jié)腸炎的辨證標準。主癥為腹痛，腹瀉，便下黏液膿血；次癥為肛門灼熱，里急后重，身熱小便短赤，口干口苦口臭，脈滑數(shù)。主癥必備，次癥2 項以上即可診斷大腸濕熱證。

1.3 納入與排除標準 納入標準：①符合上述中、西醫(yī)診斷標準；②年齡18～65 歲；③病情為輕、中度的初發(fā)型或慢性復發(fā)型活動期患者。排除標準：①潰瘍型結(jié)腸炎臨床緩解期及重度活動患者；②合并有腫瘤、腸道結(jié)核、腸梗阻、腸穿孔者；③嚴重心、肝、腎功能異常者；④過敏體質(zhì)或?qū)ρ蚰c線材質(zhì)過敏者；⑤妊娠或哺乳期婦女。

1.4 方法 兩組均口服美沙拉嗪腸溶片（葵花藥業(yè)集團佳木斯鹿靈制藥有限公司，國藥準字H19980148，規(guī)格：0.25 g/片）作為基礎(chǔ)治療，口服1 g/次，3 次/d。

1.4.1 對照組 采用針刺治療（假埋線組）。取穴大腸俞、脾俞、中脘、天樞，患者側(cè)臥位，鋪好洞巾，0.2%碘伏常規(guī)消毒，采用一次性醫(yī)用7 號無菌注射針頭作為套管，不放入羊腸線，手持注射針頭尾部，將針頭刺入穴位，深度達皮下，捻轉(zhuǎn)半周，得氣后退針，檢查線體有無在體表外露或局部出血，予棉簽按壓數(shù)秒后，各穴予0.2%碘伏再次消毒，輸液貼固定2 h。各穴位逐一埋入。每2 周治療1 次，療程8 周。

1.4.2 觀察組 采用埋線療法治療。取穴大腸俞、脾俞、中脘、天樞。其中，大腸俞、脾俞、天樞每次單側(cè)埋線，左右交替進行。患者取側(cè)臥位，鋪好洞巾，0.2%碘伏常規(guī)消毒，采用一次性醫(yī)用7 號無菌注射針頭作為套管，將3.0 可吸收性外科縫線剪成10 mm線段若干，浸泡在75%乙醇內(nèi)備用。以消毒后的鑷子鑷取一段羊腸線，將其2/3 線體置入套管前端，將剩余1/3 裸露線體少許彎折，手持注射針頭尾部，將針頭刺入穴位，深度達皮下，捻轉(zhuǎn)半周，得氣后退針，檢查線體有無在體表外露或局部出血，予棉簽按壓數(shù)秒后，各穴予0.2%碘伏再次消毒，輸液貼固定2 h。各穴位逐一埋入。每2 周埋線1 次，療程8 周。

1.5 觀察指標 比較兩組臨床療效、臨床癥狀評分、電子結(jié)腸鏡表現(xiàn)、外周血中核轉(zhuǎn)錄因子κB（NFκB）、Toll 樣受體4（TLR4）蛋白及其mRNA 表達水平。

1.5.1 療效判定 治愈：中醫(yī)臨床癥狀、體征基本消失，中醫(yī)證候評分減少≥90%；顯效：中醫(yī)臨床癥狀、體征明顯改善，中醫(yī)證候評分減少70%～89%；有效：中醫(yī)臨床癥狀、體征均有好轉(zhuǎn)，中醫(yī)證候評分減少30%～69%；無效：中醫(yī)臨床癥狀、體征均無明顯改善，甚至加重，中醫(yī)證候評分減少不足30%?？傆行?（治愈+顯效+有效）/總例數(shù)×100%。

1.5.2 癥狀評分變化情況 參照《證候類中藥新藥臨床研究技術(shù)指導原則》改良Mayo 評分表總分分級相關(guān)內(nèi)容制訂評分標準，主癥腹痛、膿血便、腹瀉，按照無、輕度、中度、重度分別評為0、2、4、6 分，次癥肛門灼熱、里急后重、身熱小便短赤、口干口苦口臭，按照有、無分別評為1、0 分。癥狀分級標準：治愈：0分；輕度：2～7 分；中度：7～12 分；重度：≥12 分。

1.5.3 電子結(jié)腸鏡檢查 觀察患者病變黏膜在結(jié)腸鏡下的表現(xiàn)及組織病理表現(xiàn)，包括Sourtherland 疾病活動指數(shù)（DAI）評分[13]和結(jié)腸鏡表現(xiàn)評分。其中DAI是對患者腹瀉、便血、內(nèi)鏡下黏膜表現(xiàn)及醫(yī)師病情評估4 個方面進行綜合評估，每項根據(jù)輕重程度分別記0、2、4、6 分，評分越高說明病情活動越明顯；結(jié)腸鏡表現(xiàn)評分根據(jù)結(jié)腸鏡下觀察病變黏膜的輕重程度[14]，按照正常黏膜、輕度病變、中度病變、重度病變分別記0、2、4、6 分。

1.5.4 外周血NF-κB 及TLR4 mRNA 及蛋白水平檢測 分別于治療前、后抽取患者空腹靜脈血4 ml，分為2 份，均置于肝素抗凝管中。其中，一份生理鹽水1∶1 稀釋，在尖型離心管中按1∶1、1∶2 的比例加入淋巴細胞分離液（Ficoll 液），3000 r/min 離心10 min后收集白膜層，再次離心10 min 后取下層沉淀，加入1 ml 生理鹽水，槍頭反復吹打?qū)⑵涑浞只靹蚝筠D(zhuǎn)移至EP 管中離心10 min，收集細胞沉淀，獲得外周血單核細胞（PBMC）。Trizol 法提取總RNA，紫外分光光度計測定RNA 濃度與純度，然后按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書步驟操作，完成反轉(zhuǎn)錄獲取cDNA，實時熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測NF-κB 和TLR4 mRNA。另一份經(jīng)密度梯度離心后肝素抗凝后，按1∶6比例加入紅細胞裂解液，室溫靜置5 min，3000 r/min離心10 min，棄上清，抽提出核蛋白，酶聯(lián)免疫吸附法（ELASA）檢測NF-κB 及TLR4 蛋白表達水平。

1.6 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 22.0 軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料用（±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內(nèi)比較采用配對t檢驗。計數(shù)資料采用[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床療效比較 觀察組總有效率高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組臨床療效比較[n（%）]

2.2 兩組臨床癥狀評分比較 兩組腹痛評分、膿便血評分以及腹瀉評分均較治療前降低，且觀察組低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組臨床癥狀評分比較（±s，分）

表2 兩組臨床癥狀評分比較（±s，分）

注：與治療前比較，*P＜0.05

2.3 兩組電子結(jié)腸鏡檢查評分比較 兩組DAI 評分和結(jié)腸鏡表現(xiàn)評分均較治療前降低，且觀察組低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 兩組電子結(jié)腸鏡檢查評分比較（±s，分）

表3 兩組電子結(jié)腸鏡檢查評分比較（±s，分）

注：與治療前比較，*P＜0.05

2.4 兩組外周血NF-κB、TLR4 mRNA 和蛋白相對表達水平比較 兩組外周血NF-κB 和TLR4 mRNA 和蛋白相對表達水平均較治療前降低，且觀察組低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見圖1。

圖1 兩組外周血NF-κB、TLR4 mRNA 和蛋白相對表達量水平比較

3 討論

UC 是由遺傳基因易感性、環(huán)境、免疫以及心理等多因素參與的腸道炎癥性疾病。隨著現(xiàn)代生活方式、飲食習慣以及環(huán)境的改變，其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)均呈逐年上升趨勢[15]。目前研究普遍認為，機體免疫調(diào)節(jié)失衡、腸道黏膜的防御保護機制受損，從而導致腸道黏膜損傷，黏膜發(fā)生病變，表現(xiàn)為黏膜糜爛及潰瘍等損傷，進而導致體內(nèi)多種信號傳導通路及炎癥因子被激活[16]。這些活動共同參與了UC 的發(fā)生和發(fā)展。中醫(yī)認為，外感濕熱邪毒、飲食不節(jié)、情志失調(diào)等是UC 發(fā)生的主要病因。其病位在腸，濕熱蘊腸，氣血不調(diào)，熱毒蘊結(jié)，絡損血溢[17]。目前，UC 的西醫(yī)治療短期可取得較好療效，但復發(fā)風險高，安全性差。因此，尋找有效的管理方案對于UC 的治療非常重要。

本研究顯示，觀察組總有效率為87.50%，高于對照組的65.00%，提示“俞募配穴”與穴位埋線療法相結(jié)合治療UC 的效果較好。分析原因，可能與作用位置和時間有關(guān)。俞募穴是臨床上針灸常用的配穴法之一，募穴多用來治療六腑病癥，背俞穴常反映臟腑功能，背俞穴與腹募穴相配，可診察和治療相應臟腑病癥?！坝崮寂溲ā迸c穴位埋線療法相結(jié)合，在利用可吸收線持續(xù)刺激穴位的同時，延長了其作用時間，從而使觀察組總有效率高于僅使用針刺療法的對照組[18]。此外，觀察組癥狀改善、DAI 評分和結(jié)腸鏡表現(xiàn)評分均優(yōu)于對照組，證明“俞募配穴”穴位埋線療法可改善UC 患者臨床癥狀和黏膜病變情況。同時，本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組患者外周血TLR4 與NF-κB mRNA 及相應蛋白的相對表達水平均低于對照組。說明穴位埋線可降低機體炎癥水平，有助于UC 患者的康復。TLR4/NF-κB 信號通路在炎癥信號的傳遞中發(fā)揮著重要作用，能調(diào)節(jié)機體炎癥因子的表達水平，在UC 的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要的作用。Toll 樣受體（TLRs）是參與非特異性免疫的一類重要分子，也是連接非特異性免疫和特異性免疫的橋梁，在天然免疫識別以及獲得性免疫反應中具有重要價值[19]。研究表明[20]，TLR4 信號傳導對結(jié)腸炎乃至結(jié)腸癌的發(fā)生至關(guān)重要，抑制TLR4 可對結(jié)腸炎的發(fā)生起到保護作用。當黏膜受到刺激后，巨噬細胞超活化，TLR4 被過度激活，同時，TLR4 可刺激下游NF-κB 的激活，而NF-κB 是粘膜免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)的關(guān)鍵分子，可在結(jié)腸黏膜損傷部位釋放腫瘤壞死因子α (TNF-α)、白細胞介素18（IL-18）、IL-1β 等大量炎癥因子，促使腸道局部炎癥的發(fā)展。因此，抑制TLR4 信號傳導可有效調(diào)節(jié)炎癥細胞因子的表達[21]。

綜上所述，基于“俞募配穴”的穴位埋線療法可提高大腸濕熱型UC 患者的治療效果，改善結(jié)腸黏膜病變，有效降低患者體內(nèi)炎癥水平，具有良好的臨床應用價值。