楊 靜，吳 燕，劉 霞，陳 翔，趙子丹，茍春林

（寧夏農產品質量標準與檢測技術研究所，寧夏回族自治區(qū)農產品質量安全標準研究與評價重點實驗室，寧夏 銀川 750002）

枸杞含有大量的營養(yǎng)物質，具有美容養(yǎng)顏、保肝明目等多種保健功效[1-3]。它作為寧夏的特色農產品，深受大眾喜愛，但在生長過程中易受到病蟲害侵染[4-7]。丁氟螨酯作為一種新型酰基殺螨劑，主要用于蔬菜、茶樹、果樹等農作物和花卉的螨類防治[8-11]，與現有的殺蟲劑無交互抗性[12-17]，對幼蟲時期的螨類活性更高[18]。目前，我國丁氟螨酯僅在番茄、草莓和柑橘上有登記信息[19]。近年來，丁氟螨酯在農作物上的檢測方法已有報道。張鴻超等[20]采用QuEChERS-超高效液相色譜-串聯質譜技術測定了黃瓜中丁氟螨酯等6 種典型農藥；趙來成[21]采用超高效液質聯用儀測定了草莓中丁氟螨酯等4 種殺螨劑殘留量。但目前，關于枸杞中丁氟螨酯及其代謝物2-三氟甲基苯甲酸殘留分析方法的研究尚未見報道。本文建立了枸杞中丁氟螨酯及其代謝物2-三氟甲基苯甲酸的QuEChERS-超高效液相色譜-三重四級桿串聯質譜檢測方法，為該農藥在枸杞上的登記提供理論依據，以期為丁氟螨酯在枸杞上科學、合理、安全的使用提供保障。

1 材料與方法

1.1 材料與設備

1.1.1 材料與試劑

丁氟螨酯標準品（純度94.9%），上海安譜實驗科技股份有限公司；2-三氟甲基苯甲酸（純度99.2%），上海甄準生物科技有限公司；甲醇（色譜純），德國默克公司；氯化鈉和無水硫酸鎂（分析純），國藥集團化學試劑有限公司；乙腈（色譜純），美國Fisher 公司；甲酸（色譜純），光復精細化工研究所；乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）、石墨化炭黑（GCB）和十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18），均購于上海安譜實驗科技股份有限公司。

1.1.2 儀器與設備

Thermo Quantum Access 液相色譜串聯質譜儀，美國Thermo 公司；T25 型高速分散機，MS3 digital 型渦旋混合器，德國IKA 公司；TDL-40C 型離心機，上海安亭儀器廠；XS205 型、PL202-L 型電子天平，梅特勒托利多科技（中國）有限公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品的制備與保存

將田間枸杞鮮果除去青果、病果、爛果、果梗、葉子等雜質，充分混勻后分成兩份，一份用四分法縮分，取300 g 樣品，直接裝入樣品容器中，貼好標簽于-18 ℃冰柜冷凍保存，室內檢測時解凍后打成勻漿狀，待測。另一份制成枸杞干果，方法為：每公斤新鮮枸杞中直接加入10～20 g 食用級碳酸鈉或碳酸氫鈉，混勻，在封閉容器內放置20～30 min 進行脫蠟，再晾曬制干，貼好標簽后于-18 ℃冰柜冷凍保存，室內檢測時加液氮粉碎成粉末狀，待測。

1.2.2 標準溶液配制及標準曲線繪制

用甲醇將丁氟螨酯、2-三氟甲基苯甲酸標準品分別配制成質量濃度為1 000 mg/L 的標樣儲備液，分別移取單標儲備液各0.1 mL 配制成10 mg/L 的混合標準儲備液，于-18 ℃避光保存。上機測定0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L 系列的標準溶液，以質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

1.2.3 樣品前處理

1.2.3.1 枸杞鮮果

將采集的枸杞鮮果用組織搗碎機勻漿。稱取勻漿樣品10.00 g 置于50 mL 具塞離心管中，加入20.0 mL乙腈后勻漿2 min，然后加入4.00 g 氯化鈉，振搖約2 min，以4 000 r/min 離心6 min，吸取2 mL 上清液于盛有100 mg C18、100 mg MgSO4和5 mg GCB 的離心管中渦旋1 min，于4 000 r/min 離心5 min，上清液過0.22 μm 濾膜，待測。

1.2.3.2 枸杞干果

將另一份枸杞鮮果制干后，加液氮粉碎成粉末狀。稱取枸杞干果5.00 g 于50 mL 離心管中，加入10.00 mL 水，浸泡30 min 后加入20.0 mL 乙腈，勻漿2min，再加入4.00g 氯化鈉，振搖約2min，以4 000r/min離心6min，吸取2mL 上清液于盛有100mg C18、100 mg MgSO4和5 mg GCB 的離心管中渦旋1 min，以4 000 r/min 離心5 min，上清液過0.22 μm 濾膜，待測。

1.2.4 添加回收試驗

向枸杞鮮果和干果空白樣品中分別添加0.01、0.1、1.0 mg/kg 3 個水平的丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸標準溶液，按照所建立的方法進行測定。

1.2.5 穩(wěn)定性試驗

分別稱取枸杞鮮果空白樣品10.00 g，枸杞干果空白樣品5.00 g 于50 mL 離心管中，按照0.5 mg/kg的添加水平直接在空白樣品中分別添加丁氟螨酯及其代謝物2-三氟甲基苯甲酸標準溶液，將離心管密封保存于-18 ℃冰箱中。

1.2.6 儀器條件

1.2.6.1 液相色譜條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse plus C18（100 mm×2.1 mm,1.8 μm）；柱溫：45 ℃；流動相：甲醇-0.1%甲酸水；流速：0.30 mL/min；進樣量：2.0 μL。洗脫方式為梯度洗脫，洗脫條件見表1。

表1 液相色譜條件Table 1 Liquid chromatographi conditions

1.2.6.2 質譜（MS）條件

離子源：ESI+；噴霧電壓：3.5 kV；鞘氣：30 arb；輔氣：10 arb；毛細管傳輸溫度：350 ℃；碰撞壓力：0.199 5 Pa；掃描模式：選擇離子監(jiān)測（SRM）。質譜條件見表2。

表2 質譜條件Table 2 MS parameters

1.2.7 數據處理

使用Excel 2010 軟件分析試驗數據。

2 結果與分析

2.1 方法驗證

分別準確吸取質量濃度為0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L 的丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸標準溶液。在“1.2.6”檢測條件下進行測定。圖1 為0.1 mg/L 丁氟螨酯及其代謝物的色譜圖。以丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的質量濃度為橫坐標（x），峰面積為縱坐標（y），制作標準曲線。得到丁氟螨酯線性方程：y=8×106x+217 058，r=0.998 7；2-三氟甲基苯甲酸線性方程：y=2×106x+47 861，r=0.997 3?？梢姡》ズ?-三氟甲基苯甲酸在0.01～1.0 mg/L 范圍內相關系數均大于0.99，線性關系較好。

圖1 0.1 mg/L 丁氟螨酯及其代謝物的色譜圖Fig.1 Chromatograms of cyflumetofen and its metabolites(0.1 mg/L)

在不含目標化合物的枸杞鮮果和干果中分別添加0.1 mg/kg 的丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸標準溶液，結果見圖2。根據添加回收率試驗，丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的方法定量限均為0.01 mg/kg。

圖2 枸杞中丁氟螨酯及其代謝物的色譜圖Fig.2 The chromatograms of cyflumetofen and its metabolite in Goji berries

2.2 方法回收率和精密度

在枸杞鮮果和干果中分別添加0.01、0.1、1.0 mg/kg 3 個質量分數水平的丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸標準品，按“1.2.3”中前處理方法對樣品進行處理、測定，計算回收率和相對標準偏差，結果見表3。丁氟螨酯在枸杞鮮果中平均回收率在100.4%～102.7%之間，相對標準偏差在2.6%～11.6%之間，在枸杞干果中平均回收率在80.7%～103.2%之間，相對標準偏差在2.5%～7.1%之間。2-三氟甲基苯甲酸在枸杞鮮果中平均回收率在87.2%～110.0%之間，相對標準偏差在2.1%～6.2%之間，在枸杞干果中平均回收率在95.0%～111.1%之間，相對標準偏差在2.3%～6.1%之間?；厥章屎途芏染軌驖M足枸杞中丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的檢測要求，符合農藥殘留分析的要求[22-23]。

表3 枸杞中丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的添加回收率及相對標準偏差(n=5)Table 3 Recovery rate and relative standard deviations of cyflumetofen and its metabolite in Goji berries(n=5)

2.3 丁氟螨酯及其代謝物在枸杞中的穩(wěn)定性

樣品制備后，對丁氟螨酯及其代謝物進行測定，取樣間隔為0 d、1 個月、3 個月、6 個月、8 個月、12 個月、15 個月，檢測結果如表4 所示。枸杞鮮果中丁氟螨酯的降解率為10%～23%，2-三氟甲基苯甲酸的降解率為2%～27%；枸杞干果中丁氟螨酯的降解率為2%～26%，2-三氟甲基苯甲酸的降解率為3%～24%。每個取樣間隔的儲藏試驗樣品中丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸的降解率均小于30%，表明在儲藏溫度低于-18 ℃、儲藏時間為15 個月的試驗期間，丁氟螨酯和2-三氟甲基苯甲酸在枸杞鮮果、枸杞干果基質中均比較穩(wěn)定。

表4 丁氟螨酯及其代謝物在枸杞中的降解率Table 4 The degradation rate of cyflumetofen and its metabolite in Goji berries單位：%

2.4 丁氟螨酯在枸杞上的消解動態(tài)

在寧夏和青海兩地開展殘留消解試驗，將20%丁氟螨酯懸浮劑以1 000 倍液（有效成分：200 mg/kg）噴施于枸杞上，分別采集藥后2 h 及3、5、10、14、21 d的枸杞樣品，測定所采集樣品中丁氟螨酯的殘留量，結果如圖3 所示。青海地區(qū)的丁氟螨酯殘留量為0.089～1.400 mg/kg，消解動態(tài)方程為Ct=0.729 4 e-0.122t，半衰期為5.7 d；寧夏地區(qū)的丁氟螨酯殘留量為0.57～1.80 mg/kg，消解動態(tài)方程為Ct=1.472 8 e-0.042t，半衰期為16.5 d。消解動態(tài)的試驗結果表明：丁氟螨酯在枸杞中的殘留量隨著儲藏時間的延長而降低，且該農藥殘留量與時間呈指數關系，其消解動態(tài)曲線符合一級動態(tài)學方程Ct=C0e-kt。寧夏地區(qū)丁氟螨酯殘留量比青海地區(qū)高，且降解速率也較慢，說明枸杞生長環(huán)境對丁氟螨酯的降解有一定影響。

圖3 丁氟螨酯在枸杞上的消解動態(tài)曲線Fig.3 Digestion dynamic curve of cyflumetofen in Goji berries

3 結論

本文建立了一種QuEChERS-超高效液相色譜-三重四級桿串聯質譜檢測枸杞中丁氟螨酯及其代謝物的方法。在儲藏溫度-18 ℃、儲藏時間為15 個月的試驗期間，丁氟螨酯及其代謝物在枸杞基質中比較穩(wěn)定。消解動態(tài)試驗表明，環(huán)境對枸杞中丁氟螨酯的降解有一定影響。該方法操作簡單快速，準確度和精密度均較高，可用于枸杞中丁氟螨酯及其代謝物的檢測，也為其他農作物中丁氟螨酯及其代謝物的殘留檢測提供了參考依據。