李玄丹 李材忠 唐詠婕 蔡瀟陽（儋州市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，儋州 571799）

慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）是一種以持續(xù)性呼吸道癥狀和氣流受限為主要特征的常見呼吸系統(tǒng)疾病。慢性阻塞性肺疾病急性加重期（acute exacerbation chronic obstructive pulmonary disease，AECOPD）是由COPD患者氣道炎癥反應(yīng)進一步加重引發(fā)的急性呼吸道疾病，可導致肺功能惡化，增加了患者的住院時間、經(jīng)濟負擔及病死率，嚴重危害患者的生命健康［1］。目前研究認為，AECOPD的發(fā)生發(fā)展與多種類型的炎癥細胞、炎癥介質(zhì)和各種趨化因子有關(guān)［2］。CX3趨化因子配體1（CX3 chemokine ligand 1，CX3CL1）是一種具有趨化和促進炎癥反應(yīng)功能的跨膜糖蛋白，可活化T淋巴細胞及單核細胞募集，進而釋放促炎因子，參與肺部疾病的炎癥反應(yīng)過程［3］。CX趨化因子配體10（CX chemokine ligand 10，CXCL10）是一種與免疫調(diào)節(jié)相關(guān)的趨化因子，可激活T細胞、巨噬細胞及殺傷細胞，參與免疫性炎癥反應(yīng)，在調(diào)節(jié)呼吸道疾病的免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用［4］。CXCL5作為一種趨化粒細胞的小分子蛋白，可參與調(diào)節(jié)氣道的免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)，在呼吸道疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用［5］。由此推測CX3CL1、CXCL10及CXCL5在AECOPD中具有巨大潛在價值。然而，CX3CL1、CXCL10及CXCL5在AECOPD中的表達情況及其與患者病情進展的關(guān)系尚未明確。為此，本研究通過檢測COPD患者血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5表達水平，分析其對AECOPD預(yù)后評估的價值，以期為AECOPD的治療提供幫助。

1 資料與方法

1.1資料

1.1.1臨床資料 選取2018年1月至2021年6月儋州市人民醫(yī)院收治的COPD患者226例，其中男性141例，女性85例，年齡35～83歲，平 均 年 齡（62.85±11.42）歲。納入標準：①COPD的診斷符合《慢性阻塞性肺疾病診治指南（2021年修訂版）》［6］；②均為首次入院，病例資料完整，同意配合本次研究。排除標準：①合并惡性腫瘤、其他肺部疾病、感染性疾病及免疫性疾病者；②妊娠期、哺乳期女性。另選取體檢正常的健康志愿者60例作為對照組，其中男性36例，女性24例，年齡37～80歲，平均年齡（63.48±10.50）歲。本研究經(jīng)儋州市人民醫(yī)院倫理委員會批準，患者知情同意。

1.1.2主要試 劑 與儀器CX3CL1、CXCL10及CXCL5 ELISA試劑盒均購自R&D公司；680型全自動酶標分析儀購自美國Bio-Rad公司。

1.2方法

1.2.1臨床分組 所有患者入院后行心電監(jiān)護，根據(jù)情況做機械通氣，同時對患者進行去痰、吸氧、抗感染、糾正電解質(zhì)及營養(yǎng)支持治療。根據(jù)病情嚴重程度將226例COPD患者分為穩(wěn)定期COPD組（124例）和AECOPD組（102例），并根據(jù)AECOPD患者發(fā)病入院后28 d的死亡情況將其分為存活組（64例）和死亡組（38例）。記錄患者入院時的基線資料，包括年齡、性別、基礎(chǔ)疾病、體質(zhì)指數(shù)、心率、血壓、白細胞數(shù)、動脈氧分壓、動脈二氧化碳分壓、第1秒用力呼氣容積占預(yù)計值百分比（FEV1%）、第1秒用力呼氣容積占用力肺活量的比值（FEV1/FVC）等。

1.2.2CX3CL1、CXCL10及CXCL5表 達 水 平 檢測 所有受試者均于入院時或體檢時采集空腹靜脈血5 ml，以3 500 r/min、離心半徑15.0 cm離心10 min分離血清待測。ELISA法檢測CX3CL1、CXCL10及CXCL5表達水平。嚴格按照操作常規(guī)做高濃度和低濃度兩個水平的室內(nèi)質(zhì)控，CX3CL1高濃度為＞

205.60 pg/ml、低濃度為＜145.30 pg/ml，CXCL10高濃度為＞50.10 pg/ml、低濃度為＜30.20 pg/ml，CXCL5高濃度為＞120.40 pg/ml、低濃度為＜95.80 pg/ml，質(zhì)控結(jié)果均在控后才能進行樣本檢測。CX3CL1標準品的上限濃度為710.50 pg/ml、下限濃度為20.35 pg/ml，CXCL10標準品的上限濃度為350.60 pg/ml、下限濃度為5.20 pg/ml，CXCL5標準品的上限濃度為510.40 pg/ml、下限濃度為20.60 pg/ml。CX3CL1、CXCL10及CXCL5表達水平檢測值均在標準品規(guī)定的上下限范圍內(nèi)。

1.3統(tǒng)計學方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組內(nèi)采用SNK-q檢驗比較；兩組間采用t檢驗比較。計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗。應(yīng)用多因素Logistic回歸分析影響AECOPD預(yù)后的危險因素。繪制受試者工作特征（ROC）曲線分析CX3CL1、CXCL10及CXCL5對AECOPD患者預(yù)后評估的價值。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1AECOPD患者死亡組和存活組臨床資料比較 死亡組病程、FEV1%與存活組相比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）；其他指標比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 AECOPD患者死亡組和存活組臨床資料比較Tab.1 Comparison of clinical data between death group and survival group of AECOPD patients

2.2AECOPD組、COPD組和對照組血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平比較AECOPD組和COPD組血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平均明顯高于對 照 組，且AECOPD組 血 清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平均明顯高于COPD組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。見表2。

表2 AECOPD組、COPD組 和 對 照 組 血 清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平比較（±s，pg/ml）Tab.2 Comparison of serum CX3CL1，CXCL10 and CXCL5 levels in AECOPD group，COPD group and control group（±s，pg/ml）

表2 AECOPD組、COPD組 和 對 照 組 血 清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平比較（±s，pg/ml）Tab.2 Comparison of serum CX3CL1，CXCL10 and CXCL5 levels in AECOPD group，COPD group and control group（±s，pg/ml）

Note：Compared with control group，1）P＜0.05；compared with COPD group，2）P＜0.001.

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2.3AECOPD患者死亡組和存活組血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平比較 死亡組患者血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平均明顯高于存活組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。見表3。

表3 AECOPD患者死亡組和存活組血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平比較（±s，pg/ml）Tab.3 Comparison of serum CX3CL1，CXCL10 and CXCL5 levels between death group and survival group of AECOPD patients（±s，pg/ml）

表3 AECOPD患者死亡組和存活組血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平比較（±s，pg/ml）Tab.3 Comparison of serum CX3CL1，CXCL10 and CXCL5 levels between death group and survival group of AECOPD patients（±s，pg/ml）

Note：Compared with survival group，1）P＜0.001.

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2.4多因素Logistic回歸分析影響AECOPD預(yù)后的危險因素 以AECOPD患者28 d是否發(fā)生死亡為因變量，有統(tǒng)計學意義的因素為自變量，進行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示病程、CX3CL1、CXCL10及CXCL5是影響AECOPD預(yù)后的危險因素。見表4。

表4 多因素Logistic回歸分析影響AECOPD預(yù)后的危險因素Tab.4 Multivariate Logistic regression analysis of risk factors affecting prognosis of AECOPD

2.5CX3CL1、CXCL10及CXCL5對AECOPD患者預(yù)后評估的價值 以AECOPD患者28 d發(fā)生死亡組為研究對象，存活組作為參考線繪制ROC曲線，結(jié) 果 顯 示CX3CL1為390.42 pg/ml、CXCL10為

124.38 pg/ml及CXCL5為241.35 pg/ml時，其 對AECOPD患者預(yù)后評估的曲線下面積（AUC）均＞0.810。CX3CL1、CXCL10及CXCL5三 項 聯(lián) 合 對AECOPD患者預(yù)后評估的AUC高達0.937，敏感度為96.8%，特異度為84.5%。見表5、圖1。

表5 CX3CL1、CXCL10及CXCL5對AECOPD患者預(yù)后評估的價值Tab.5 Value of CX3CL1，CXCL10 and CXCL5 in evaluating prognosis of AECOPD patients

圖1 CX3CL1、CXCL10及CXCL5對AECOPD患者預(yù)后評估的ROC曲線Fig.1 ROC curve of CX3CL1，CXCL10 and CXCL5 for prognosis of AECOPD patients

2.6CX3CL1、CXCL10及CXCL5間 的 相 關(guān) 性 分析Pearson相關(guān)分析顯示，AECOPD患者血清CX3CL1水 平 與CXCL10呈 正 相 關(guān)（r=0.852，P＜0.001），CX3CL1水平與CXCL5呈正相關(guān)（r=0.807，P＜0.001），CXCL10水平與CXCL5呈正 相 關(guān)（r=0.783，P＜0.001）。見圖2。

圖2 CX3CL1、CXCL10及CXCL5間的相關(guān)性Fig.2 Correlation between CX3CL1，CXCL10 and CXCL5

3 討論

AECOPD患者在短期內(nèi)可出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)癥狀加重，并加速肺功能下降及病情惡化，進而導致肺心病和呼吸衰竭的發(fā)生，是造成患者病死的主要原因［7］。目前，關(guān)于AECOPD患者的預(yù)后評估尚缺乏可靠的生物學指標，尋找一種有效的分子標志物對AECOPD患者進行早期預(yù)后評估，有助于指導患者的救治及提高患者存活率。近年研究認為，氣道炎癥反應(yīng)的放大和趨化功能、免疫調(diào)節(jié)功能的紊亂在AECOPD進展中發(fā)揮極為關(guān)鍵的作用［8］。CX3CL1是一種具有獨特結(jié)構(gòu)和功能的趨化因子，可通過誘導促炎因子的產(chǎn)生調(diào)節(jié)機體炎癥反應(yīng)，在肺部疾病炎癥反應(yīng)中具有重要促炎作用［9］。CXCL10作為趨化因子家族的重要成員之一，是定位于染色體4q21上的小分子分泌蛋白，可促進機體炎癥反應(yīng)，對COPD的發(fā)生發(fā)展過程發(fā)揮重要調(diào)控作用［10］。CXCL5是由上皮中性粒細胞產(chǎn)生的趨化因子，具有強大的粒細胞趨化作用，可促使中性粒細胞參與炎癥反應(yīng)及免疫應(yīng)答，在炎癥性呼吸疾病中發(fā)揮重大影響［11］。

本研究顯示，AECOPD組和COPD組血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平均明顯高于對照組，且AECOPD組明顯高于COPD組，說明CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平與COPD患者病情嚴重程度有關(guān)，其水平越高，患者病情進展越快。WANG等［12］研究顯示，CXCL10在COPD患者中高表達，與COPD患者肺功能的嚴重程度明顯相關(guān)，可為COPD的診斷及預(yù)后提供重要信息。本研究中死亡組血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平均明顯高于存活組，說明CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平與AECOPD患者預(yù)后有關(guān)，其水平越高，患者預(yù)后越差，發(fā)生死亡的風險較高。HAO等［13］研究發(fā)現(xiàn)，與健康對照組相比，COPD患者血清中CXCL10及CX3CL1水平顯著提高，其參與COPD的發(fā)病機制，并對預(yù)測COPD患者的進展具有一定價值。另有研究認為，COPD患者血清CX3CL1水平顯著升高，其水平升高與COPD患者的全身炎癥、小氣道阻塞有關(guān)，在COPD的發(fā)病機制中起關(guān)鍵作用，可能為COPD的診斷及治療提供幫助［14］。

本研究多因素Logistic回歸分析顯示，病程、CX3CL1、CXCL10及CXCL5是影響AECOPD預(yù)后的危險因素。HAO等［15］研究也顯示，COPD患者血清CX3CL1水平明顯升高，且高水平的CX3CL1與COPD患者病情加重及肺氣腫密切相關(guān)，是預(yù)測COPD患者病情加重的危險因素（OR=2.617，95%CI：1.018～6.121）。此外，本研究中病程長可加重AECOPD病情，對AECOPD患者的預(yù)后產(chǎn)生較大影響，與既往研究結(jié)果相似［16］。本研究應(yīng)用ROC曲線 分 析 發(fā) 現(xiàn)CX3CL1為390.42 pg/ml、CXCL10為

124.38 pg/ml及CXCL5為241.35 pg/ml時，其 評 估AECOPD患者預(yù)后的AUC均大于0.810，三項聯(lián)合的AUC高達0.937（95%CI：0.874～0.986），敏感度最高。相關(guān)性分也顯示CX3CL1、CXCL10及CXCL5間具有良好的正相關(guān)性，說明三項聯(lián)合評估AECOPD患者預(yù)后的效能最好，具有很好的臨床應(yīng)用價值。這可能是CX3CL1及CXCL10通過誘導促炎因子產(chǎn)生，促進CXCL5對中性粒細胞的趨化作用，三者間相互作用參與了機體炎癥反應(yīng)，在AECOPD的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用。CHEN等［17］研究也發(fā)現(xiàn)，血清CXCL5水平在COPD患中顯著升高，其與COPD發(fā)病過程及病情嚴重程度相關(guān)，可能作為COPD診斷及預(yù)后評估的潛在標志物。另有研究表明，與健康者相比，COPD患者CX3CL1水平顯著升高，CX3CL1的上調(diào)與COPD患者肺功能不良顯著相關(guān)，CX3CL1升高是導致COPD患者臨床療效差和預(yù)后差的獨立因素，可作為COPD預(yù)后評估的可靠生物標志物［18］。

綜上所述，血清CX3CL1、CXCL10及CXCL5水平在AECOPD患者中明顯升高，是影響AECOPD預(yù)后的危險因素，三項聯(lián)合檢測對AECOPD患者預(yù)后評估具有較好的價值，有望作為評估AECOPD患者28 d死亡情況的生物學指標。但本研究為單中心的臨床研究，隨訪時間短，無法全面評估CX3CL1、CXCL10及CXCL5在AECOPD中的長期變化，今后仍需更多的大樣本前瞻性研究來進行深入分析。