郭小軍 范葉

(咸陽彩虹醫(yī)院，陜西 咸陽 712000)

大腸癌是臨床常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一[1]。微小RNA(miRNA)是一類在體內(nèi)廣泛表達的內(nèi)源性小RNA，其可作為癌基因或抑癌基因調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-145在大腸癌、食管癌、胃癌等消化系統(tǒng)惡性腫瘤中異常表達[3]。因此，本研究旨在進一步分析miRNA-145在大腸癌患者血清及手術(shù)前后患者血清中miRNA-145的表達及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年6月至2019年6月我院收治的74例大腸癌患者，所有患者均接受手術(shù)治療，均經(jīng)病理診斷確診為大腸癌，且術(shù)前均未接受發(fā)化療治療。74例大腸癌患者中，男43例，女31例，年齡46～72歲，平均年齡(62.57±10.28)歲，結(jié)腸癌46例，直腸癌28例，臨床分期：Ⅰ期12例、Ⅱ期24例、Ⅲ期27例、Ⅳ期11例，分化程度：高分化腺癌19例、中分化腺癌32例、低分化腺癌23例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者28例。另納入同期健康體檢者42例作為對照組，其中男26例，女16例，年齡45～70歲，平均年齡(61.05±8.73)歲。兩組的一般資料相比無顯著性差異(P>0.05)。

1.2主要試劑與儀器 miRNA-145引物購自生工生物工程(上海)股份有限公司，RNA提取試劑盒購自德國羅氏公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green II 熒光定量PCR試劑盒購自大連寶生物工程有限公司，NanoDrop 2000C超微量分光光度計購自美國Thermo公司，7 300型Real Time PCR擴增儀購自美國ABI 公司。

1.3方法 大腸癌組于手術(shù)前1 d及手術(shù)后1個月采集空腹外周靜脈血4 mL，對照組于體檢當(dāng)日采集空腹外周靜脈血4 mL，EDTA抗凝處理，室溫靜置60 min，3 500 rap/min離心20 min，分離上層血清，于-80℃保存?zhèn)溆?。按照RNA提取試劑盒說明書提取血清中總RNA，采用NanoDrop 2000C超微量分光光度計檢測RNA的純度及濃度。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明書進行操作，將miRNA-145逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，再按照SYBR Green II 熒光定量PCR試劑盒操作說明書擴增miRNA-145，以β-actin為內(nèi)參，每組設(shè)置三個復(fù)孔，采用2-△△CT方法計算miRNA-145的相對表達水平。引物序列：miRNA-14，上游引物:5’-GTCCAGTTTTCCCAVVAATCCCT-3’；下游引物:5’-TCCAGTCCTCTTGAATGTGGA-3’；β-actin，上游引物:5’- GGCATCCTCACCCTGAAGTA-3’；下游引物:5’-GGGGTGTTGAAGGTCTCAAA-3’。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清miRNA-14表達水平比較 大腸癌組患者術(shù)前血清中miRNA-145相對表達水平(1.34±0.97)明顯低于對照組(7.29±1.53)，比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=25.626，P=0.000)。

2.2手術(shù)前后大腸癌患者血清miRNA-145表達水平比較 大腸癌組患者術(shù)后血清中miRNA-145相對表達水平(3.93±1.12)明顯高于術(shù)前(1.34±0.97)，比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=15.037，P=0.000)。

2.3大腸癌患者血清miRNA-145表達水平與其臨床病理特征的關(guān)系 不同性別、年齡、腫瘤類型的患者血清中miRNA-145相對表達水平比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但不同TNM分期、分化程度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清中miRNA-145相對表達水平比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，即TNM分期越高、分化程度越低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，則患者血清中miRNA-145相對表達水平越低。見表1。

表1 大腸癌患者血清miRNA-145表達水平與其臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

miRNA是近年來備受關(guān)注的一類內(nèi)源性小RNA，其在惡性腫瘤細胞的增殖、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[4]。最近有文獻發(fā)現(xiàn)，miRNA成員中的miRNA-145可作為抑癌基因參與調(diào)控腫瘤細胞增殖及遷移相關(guān)基因的表達，從而抑制腫瘤細胞的分裂和轉(zhuǎn)移[5]。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，miRNA-145在多種消化系統(tǒng)惡性腫瘤中異常表達[6]。

本文結(jié)果顯示，大腸癌組患者術(shù)前血清中miRNA-145相對表達水平顯著低于對照組，表明miRNA-145可能作為一種抑癌因子參與大腸癌的發(fā)生。這一結(jié)果與黃偉等人[7]的報道結(jié)果相似，其報道也顯示miRNA-145在結(jié)直腸癌患者血漿中表達明顯低于對照者。由于miRNA-145基因位于染色體5q32上，而相距其較近的染色體5q31是一個脆性位點，故導(dǎo)致5q31位點極易發(fā)生基因缺失或突變，從而造成miRNA-145的缺失及下調(diào)[8]，推測這可能是導(dǎo)致miRNA-145在大腸癌患者血清中表達顯著下調(diào)的可能原因之一。

本文結(jié)果顯示，大腸癌組患者術(shù)后血清中miRNA-145相對表達水平明顯高于術(shù)前，表明術(shù)后監(jiān)測血清miRNA-145的表達變化對于大腸癌的預(yù)后評估可能具有一定的積極意義。

Wang等[9]研究發(fā)現(xiàn)，大腸癌組織中miRNA-145低表達者的臨床分期較差，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯高于高表達者。然而，Eriksen等[10]研究發(fā)現(xiàn)，大腸癌組織中miRNA-145表達與患者臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠端轉(zhuǎn)移等臨床病理特征并無明顯相關(guān)。本文結(jié)果顯示，TNM分期越高、分化程度越低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，則大腸癌患者血清miRNA-145表達水平越低，表明血清miRNA-145表達下調(diào)與大腸癌患者病情的惡性程度有關(guān)。

綜上，miRNA-145在大腸癌患者血清中表達下調(diào)，且與大腸癌的TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，其可能在大腸癌的發(fā)生及發(fā)展過程中發(fā)揮抑癌作用。miRNA-145有可能是預(yù)測大腸癌患者病情的分子指標(biāo)及潛在治療靶點。