楊啟堯

(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319)

牛結(jié)節(jié)性皮膚病(Lumpy Skin Disease, LSD)，又稱為牛結(jié)節(jié)疹、牛疙瘩病，由結(jié)節(jié)性皮膚病病毒(LumpySkinDiseaseVirus, LSDV)引起的患病牛全身皮膚出現(xiàn)結(jié)節(jié)為特征的一種疾病[1，2]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將 LSD列為法定報(bào)告的動(dòng)物疫病，我國(guó)暫將該病按二類動(dòng)物疫病處理[3，4]。我國(guó)2019年在新疆首次出現(xiàn)該病，自2020年開始，我國(guó)多個(gè)省份均有 LSD的報(bào)道[5]?，F(xiàn)階段還沒有治療LSD的特效藥，主要治療方式是使用消炎、鎮(zhèn)痛、抗菌的藥物護(hù)理皮膚患病部位，防止繼發(fā)感染[6]。

1 病原

1.1 病原分類

LSDV屬于痘病毒科，山羊痘病毒屬(Capripoxvirus)，有囊膜的雙股DNA病毒。當(dāng)下，LSDV只有1個(gè)血清型，代表毒株為Neethling株[7]。

1.2 形態(tài)結(jié)構(gòu)

LSDV是一種磚塊形狀的包膜病毒，大小為320 nm×260 nm，屬于雙鏈線性DNA單分子環(huán)狀結(jié)構(gòu)，基因組大小約為151 kbp，在其中心包含一個(gè)主要編碼區(qū)，中心編碼區(qū)由相同的2.4 kbp反向末端重復(fù)序列界定，包含了156個(gè)假定基因(ORF開放式閱讀框)[8]。

1.3 理化性質(zhì)

LSDV具有穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，對(duì)理化因素有強(qiáng)抵抗性。LSDV在結(jié)節(jié)中可存活10年(-80 ℃)；在組織液中可存活6個(gè)月(4 ℃)[6]；皮膚痂皮中存活時(shí)間長(zhǎng)達(dá)40 d。LSDV對(duì)乙醚和甲醇敏感，不耐受強(qiáng)酸強(qiáng)堿[9]。

2 牛結(jié)節(jié)性皮膚病流行狀況

2.1 國(guó)外流行狀況

1929年，該病首次在贊比亞被發(fā)現(xiàn)[10]。1943—1945年，博茨瓦納、津巴布韋出現(xiàn)LSD病例。1957年，該病傳入肯尼亞。1972年，該病在蘇丹地區(qū)出現(xiàn)。1974年傳入尼日爾、乍得[11-13]。1981—1986年，肯尼亞、坦桑尼亞、索馬里等發(fā)生該病[12]。1988年該病在埃及出現(xiàn)大面積暴發(fā)[14]。1989年，該病首次在以色列造成暴發(fā)性流行[15]。2013年，該病傳播至土耳其并在其全境流行[16]。2014—2015年，該病發(fā)展到歐洲東南部和東北部[17]。2016年7月，哈薩克斯坦出現(xiàn)首例LSD[18]。2019年8月LSD傳入印度[19]。2020年6月，該病在尼泊爾的養(yǎng)牛場(chǎng)首次被報(bào)告[20]。

2.2 國(guó)內(nèi)流行狀況

1987年9月，河南省報(bào)道類似癥狀的病牛。2002年，黑龍江省也出現(xiàn)過類似奶牛病例。這2篇報(bào)道都只是臨床癥狀相似，并沒有通過實(shí)驗(yàn)室確診，所以無法確認(rèn)[21]。

2019年8月，實(shí)驗(yàn)室首次確診我國(guó)新疆存在該病[21，22]。自新疆地區(qū)發(fā)生該病以來，我國(guó)多個(gè)地區(qū)都有該病的發(fā)生。2020年6月，安徽省的黃牛發(fā)生該病[23]。2020年6月，LSD在福建省肉牛身上發(fā)現(xiàn)[24]。2020年7月，LSD蔓延至廣西、云南等地區(qū)[25，26]。2020年10月，該病傳入內(nèi)蒙古、寧夏[27，28]。2020年11月，山東省確診該病[29]。

2.3 傳播途徑及易感動(dòng)物

該病常發(fā)生于夏季，病原能夠感染多種動(dòng)物，如黃牛、水牛、藍(lán)角馬、長(zhǎng)頸鹿、跳羚等。該病的主要傳播方式是接觸傳播，通過節(jié)肢動(dòng)物進(jìn)行傳播，蠅類、蚊類以及蜱類都是該病毒的中間宿主[30，31]。2010年Vanin等[32]對(duì)該病的研究發(fā)現(xiàn)，東南亞不同種類昆蟲傳播LSD的能力不同，廄螫蠅很可能是該病在東南亞傳播的主要媒介之一。2003年Chihota等[33]研究LSD與媒介的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，致倦庫(kù)蚊(Culexquinquefasciatus)可傳播LSD，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)埃及伊蚊(Aedesaegypti)、斑須按蚊(Anophelesstephensi)都可傳播LSD，而且埃及伊蚊傳播該病的能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他蚊蟲。2014年Jimmy等[34]研究LSDV發(fā)現(xiàn)，LSDV不僅感染蜱的唾液腺，對(duì)蜱血細(xì)胞、神經(jīng)節(jié)、卵巢、脂肪體和中腸都有感染。

牛和水牛都是LSD的易感動(dòng)物，各個(gè)生長(zhǎng)階段的牛均能感染，但犢牛、奶牛、耕牛(參與頻繁勞作的)和免疫力低下的牛更為易感[8]。Lakshmi 等[35]研究發(fā)現(xiàn)犢牛比成年牛更容易感染這種疾病，犢牛的死亡率比成年牛高，這可能是由于感染病毒后的繼發(fā)性細(xì)菌并發(fā)癥。

3 牛結(jié)節(jié)性皮膚病臨床癥狀

LSD是一種病毒性疾病，患病牛常表現(xiàn)出食欲減退、精神沉郁、眼角膜渾濁、流產(chǎn)等癥狀[36]。該病可引起患病牛皮膚和內(nèi)部病變，影響產(chǎn)奶量、皮毛質(zhì)量，還可能導(dǎo)致受感染動(dòng)物死亡[37]。在嚴(yán)重感染的病例中，患病牛全身均顯示結(jié)節(jié)性病變，而在癥狀較輕的病例中，結(jié)節(jié)性病變局限于面部、頸部、下頜、背部、乳房和陰囊[35]。皮膚結(jié)節(jié)最開始略微隆起，隨后逐步發(fā)展為直徑達(dá)3～5 cm的結(jié)節(jié)，經(jīng)過7～14 d，形成一個(gè)暗紅色或黑色的凹陷深洞[9]。

4 牛結(jié)節(jié)性皮膚病檢測(cè)

常用的實(shí)驗(yàn)室診斷方法分為血清學(xué)檢測(cè)與病原學(xué)檢測(cè)。血清學(xué)檢測(cè)無法區(qū)分山羊痘病毒屬中的三個(gè)病毒(綿羊痘病毒、山羊痘病毒、結(jié)節(jié)性皮膚病病毒)。通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，最有效的檢測(cè)方法是用病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)；蛋白免疫印跡(Western Blot)雖然在應(yīng)用中具有敏感度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，但實(shí)際應(yīng)用的成本也較高；酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)在山羊痘病毒屬檢測(cè)中已經(jīng)相對(duì)成熟，目前已經(jīng)研發(fā)出試劑盒，并得到一定范圍的推廣應(yīng)用[38]。

痘病毒在電子顯微鏡下形態(tài)為磚塊狀或短管狀，該病毒大小約為290 nm×270 nm。雖然病毒分離具有耗時(shí)較長(zhǎng)、成本較高等缺點(diǎn)，但在聯(lián)合PCR使用后，能有效確定樣品中是否含有活病毒[38]。熒光PCR具有靈敏、快速、特異性強(qiáng)和重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，是LSD監(jiān)測(cè)防控的有效技術(shù)手段?？子穹降萚39]在研究LSDV時(shí)，根據(jù)保守基因序列設(shè)計(jì)了特異性的引物和探針，并且建立的熒光定量PCR與其他幾個(gè)相似疾病均無交叉反應(yīng)，建立的熒光定量PCR對(duì)LSDV陽(yáng)性檢出率為100%，比OIE推薦的普通PCR方法高出很多。原耀賢等[40]研究LSDV時(shí)建立了qPCR檢測(cè)方法，該方法具有敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，能夠應(yīng)用于臨床診斷。除了上述的常用方法外，還有間接免疫熒光抗體試驗(yàn)(IFAT)、免疫過氧化物酶單層試驗(yàn)(IPMA)、瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)(AGP)、重組酶聚合酶擴(kuò)增法(RPA)、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增試驗(yàn)(LAMP)等多種方法應(yīng)用于LSDV檢測(cè)[41，42]。

5 牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治措施及疫苗研究進(jìn)展

5.1 防治措施

LSD主要易感動(dòng)物為牛，發(fā)病率在5%～45%，致死率在1%～10%[43]。因發(fā)病以后會(huì)影響牛的生產(chǎn)性能，比如產(chǎn)奶量下降，對(duì)皮張也有一定的影響，給養(yǎng)殖業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失，所以在養(yǎng)殖過程中應(yīng)該做到防重于治，在發(fā)病季節(jié)到來之前做好滅蟲、接種疫苗等工作，降低發(fā)病率，減少經(jīng)濟(jì)損失[44]。

5.1.1緊急處理

養(yǎng)殖場(chǎng)一旦發(fā)生該病應(yīng)及時(shí)對(duì)疑似?；虬l(fā)病牛進(jìn)行隔離并上報(bào)有關(guān)部門，對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境進(jìn)行消毒，根據(jù)病毒特性，可選用過氧乙酸、氫氧化鈉、石灰粉等消毒劑進(jìn)行消毒，同時(shí)滅蚊滅蠅，對(duì)其他牛進(jìn)行緊急接種預(yù)防(可大劑量接種山羊痘疫苗)。

5.1.2治療

病牛體表的結(jié)節(jié)可使用碘伏、碘甘油等刺激性較小的消毒液進(jìn)行消毒，聯(lián)合抗生素使用，以加快傷口結(jié)痂。重癥牛治療時(shí)可選用氟尼辛葡甲胺(Flunxin meglumine)，皮膚潰爛的病?？刹捎妙^孢類抗生素進(jìn)行治療；對(duì)于眼部有癥狀的患病牛，可使用環(huán)丙沙星溶液沖洗[44]。

5.1.3加強(qiáng)生物安全意識(shí)

外地引進(jìn)牛時(shí)要按照國(guó)家防疫程序進(jìn)行檢疫，隔離30 d以上，檢疫合格以后方可混群飼養(yǎng)。盡量做到自繁自養(yǎng)，減少引進(jìn)其他病的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)人員進(jìn)行嚴(yán)格管理，外來人員禁止進(jìn)入養(yǎng)殖區(qū)，外出員工應(yīng)進(jìn)行隔離、消毒以后才能進(jìn)入養(yǎng)殖區(qū)。養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)該定期進(jìn)行消毒，減少細(xì)菌滋生及病毒傳播。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，制定免疫程序，合理使用抗生素。對(duì)無疫情的養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)當(dāng)進(jìn)行表?yè)P(yáng)和支持，對(duì)發(fā)生疫情的養(yǎng)殖場(chǎng)及時(shí)處理，減少經(jīng)濟(jì)損失。

5.2 疫苗研究進(jìn)展

疫苗接種是預(yù)防、控制和根除疾病的有效方法。目前，在我國(guó)LSD應(yīng)用最多的疫苗是山羊痘疫苗，一般接種量為山羊接種量的五倍，歐洲國(guó)家主要使用LSDV同源減毒活疫苗(Neethling)進(jìn)行免疫接種[45]。弱毒疫苗、載體疫苗也有研究，但還沒有大量投入使用。Andy等[46]研究的減毒疫苗雖然具有臨床保護(hù)作用，但該疫苗的病毒基因組含量以及對(duì)診斷方法的影響仍然受到懷疑。LSDV的弱毒株作為重組疫苗載體越來越受到更多人的認(rèn)可[47]，大量研究發(fā)現(xiàn)山羊痘病毒屬病毒(CaPV)是研發(fā)重組多價(jià)疫苗理想的候選病毒載體，GPCR基因適合作為CaPV基因組的插入位點(diǎn)，是研發(fā)重組疫苗株的重要方向[48]。

6 展望

隨著人們生活水平的提高，牛奶和牛肉的需求量越來越大。目前，LSD對(duì)牛養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的危害，雖然死亡率不是很高，但是牛發(fā)病以后會(huì)影響其生長(zhǎng)性能，為了減少經(jīng)濟(jì)損失，該病應(yīng)該受到重視。當(dāng)下，針對(duì)LSD的疫苗還相對(duì)較少，疫苗研究將是重要研究方向。只有研究出有效疫苗，才能減少該病的發(fā)生，同時(shí)應(yīng)該加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高生物安全意識(shí)，以減少經(jīng)濟(jì)損失。