馬 磊，郝岸華，胡欣欣，趙真真，周 林，辛永寧

1青島市城陽(yáng)區(qū)人民醫(yī)院感染科，山東 青島 266109；2青島大學(xué)附屬青島市市立醫(yī)院a.臨床研究中心，b.感染科，山東 青島 266071

非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）成為世界范圍內(nèi)肝病發(fā)病和死亡的主要原因。目前確定的NAFLD疾病進(jìn)展的危險(xiǎn)因素包括高齡、脂肪性肝炎、存在肝纖維化以及代謝綜合征的特征，如肥胖、胰島素抵抗和高血壓［1］。遺傳因素也被證明影響NAFLD的疾病進(jìn)展，這種影響被認(rèn)為是遺傳變異和環(huán)境因素之間復(fù)雜相互作用的結(jié)果。

脂肪量和肥胖相關(guān)基因（fat mass－and obesity－associated gene，F(xiàn)TO）位于染色體16q12.2。FTO多態(tài)性與代謝性疾病的關(guān)系已被廣泛研究。據(jù)報(bào)道［2－5］，F(xiàn)TO多態(tài)性與代謝綜合征、2型糖尿病和肥胖有關(guān)。肝細(xì)胞的脂質(zhì)積累和免疫細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)是引起NAFLD發(fā)生發(fā)展的兩個(gè)重要的因素。作為代謝紊亂的預(yù)測(cè)因子，F(xiàn)TO在NAFLD患者和動(dòng)物模型的肝臟中表達(dá)上調(diào)［6－8］，F(xiàn)TO的肝臟信號(hào)通路異?；顒?dòng)與NAFLD代謝障礙有關(guān)［9］。NAFLD與代謝紊亂密切相關(guān)，如胰島素抵抗和肥胖［10］，也與一些基因多態(tài)性（PNPLA3和TM6SF2）有關(guān)［11］。目前為止，F(xiàn)TO多態(tài)性與NAFLD易感性的相關(guān)性尚不明確。本研究旨在探討我國(guó)青島地區(qū)漢族人群FTO多態(tài)性與NAFLD易感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究人群 納入2018年6月—2019年6月就診于青島市市立醫(yī)院及城陽(yáng)區(qū)人民醫(yī)院的NAFLD患者及體檢人群。NAFLD患者診斷符合《非酒精性脂肪性肝病防治指南（2018年更新）》［12］，排除乙型、丙型等病毒性肝炎、自身免疫性肝病、藥物性肝病等其他可能導(dǎo)致脂肪肝的疾病，并除外每周飲酒量＞140 g者。健康對(duì)照為隨機(jī)收集同期體檢中心健康者。兩組均為青島地區(qū)長(zhǎng)期的漢族人群，無(wú)血緣關(guān)系。

1.2 數(shù)據(jù)采集 通過(guò)問(wèn)卷調(diào)查的方法收集了參與者的年齡、性別、飲酒、病史等。測(cè)量身高、體質(zhì)量并計(jì)算BMI。所有受試者，抽取空腹靜脈血4 mL。取其中2 mL置于EP管保存于－80℃冰箱，用作DNA的提取和檢測(cè)。另外2 mL血液送至青島市市立醫(yī)院檢驗(yàn)科，進(jìn)行血液相關(guān)指標(biāo)的化驗(yàn)，包括血脂及生化指標(biāo)的檢測(cè)。

1.3 基因分型 采用全血DNA提取試劑盒，提取基因組DNA。對(duì)3個(gè)FTO多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)（rs1421085、rs9939609、rs8050136）。基因分型采用PCR結(jié)合測(cè)序的方法，流程參見參考文獻(xiàn)［13］，引物見表1。

表1 FTO基因引物序列Table 1 Primer sequence of FTO gene

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS 23.0進(jìn)行。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料采用±s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布的計(jì)量資料采用M（P25～P75）表示，兩組間比較采用Mann－Whitney U檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)。并計(jì)算等位基因頻率風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)比值比（OR）和95%CI，評(píng)估等位基因與NAFLD風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 本文共納入NAFLD患者及健康對(duì)照共計(jì)306例（其中NAFLD組119例，對(duì)照組187例），兩組基本信息的比較結(jié)果如表2所示。兩組間年齡、BMI、ALT、GGT、TG、FPG及膽紅素（Bil）差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均＜0.05）。

表2 兩組一般臨床資料及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較Table 2 Comparison of general clinical data and related laboratory indicators between NAFLD and control group

2.2 FTO基因型及等位基因的頻率分布 本研究結(jié)果顯示，rs1421085具有TT、CT、CC 3種基因型，rs8050136具有TT、CT、CC 3種基因型，rs9939609具有TT、AT、AA 3種基因型。NAFLD和對(duì)照組等位基因頻率和基因型比較，分布差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均＞0.05）（表3）。

表3 FTO基因型及等位基因的頻率分布Table 3 Frequency distribution of FTO genotypes and alleles

2.3 FTO不同等位基因患者攜帶者生化指標(biāo)比較 對(duì)FTO rs1421085、rs8050136、rs9939609不同等位基因攜帶者生化指標(biāo)進(jìn)行了分析，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)rs1421085 C等位基因、rs8050136 A等位基因、rs9939609 A等位基因攜帶與否與BMI及生化指標(biāo)水平有關(guān)系（P值均＞0.05）（表4）。

表4 rs1421085、rs9939609、rs8050136不同等位基因攜帶生化指標(biāo)比較Table 4 Comparison of biochemical indices of different alleles of rs1421085、rs9939609、rs8050136

3 討論

目前研究已證實(shí)NAFLD的數(shù)個(gè)基因易感因素［14－15］，而新的遺傳標(biāo)記的發(fā)現(xiàn)可提高對(duì)該病易患個(gè)體的識(shí)別能力。先前研究［16］表明，F(xiàn)TO多態(tài)性通常與代謝紊亂相關(guān)，尤其是與NAFLD密切相關(guān)的中心性肥胖、LDL、胰島素抵抗和高甘油三酯血癥。因此，F(xiàn)TO多態(tài)性可能對(duì)NAFLD的易感性具有重要意義。在本研究中，對(duì)3個(gè)FTO多態(tài)性與NAFLD易感性進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)FTO rs1421085、rs9939609、rs8050136多態(tài)性與NAFLD易感性并無(wú)顯著相關(guān)性（P值均＞0.05）。

Inandikliogˇlu等［17］研究發(fā)現(xiàn)，rs1421085（CC/CT）和rs9939609（AA/AT）多態(tài)性與兒童肥胖有關(guān)，且與高密度脂蛋白膽固醇和TG水平相關(guān)。我國(guó)相關(guān)研究［18］亦發(fā)現(xiàn)FTO rs1421085與兒童肥胖風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。而本研究并未發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)與BMI以及脂質(zhì)水平的相關(guān)性，考慮可能與成年人代謝水平及BMI影響因素較多有關(guān)，尚需更大樣本分層研究來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證。近期研究［19］發(fā)現(xiàn)，rs1421085位點(diǎn)與代謝相關(guān)脂肪性肝?。╩etabolic dysfunction－associated fatty liver disease，MAFLD）人群的易感性相關(guān)，尚無(wú)與NAFLD相關(guān)性的報(bào)道，本研究亦未發(fā)現(xiàn)rs1421085與NAFLD相關(guān)性，可能是由于NAFLD和MAFLD概念及診斷標(biāo)準(zhǔn)的差異導(dǎo)致納入的人群并不完全一致。

研究［20］發(fā)現(xiàn)，我國(guó)上海NAFLD男性人群中多個(gè)與NAFLD有關(guān)的FTO多態(tài)性位點(diǎn)，但并未發(fā)現(xiàn)FTO rs9939609、rs8050136多態(tài)性與NAFLD易感性有關(guān)系，結(jié)果與本研究相一致。本研究對(duì)不同基因型攜帶者的臨床指標(biāo)進(jìn)行比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均＞0.05）。NAFLD作為一個(gè)多因素相關(guān)代謝性疾病，遺傳因素僅為其中一個(gè)可能的易感因素。盡管FTO其他位點(diǎn)被證實(shí)與NAFLD易感性相關(guān)，而本研究中FTO rs1421085、rs9939609、rs8050136多態(tài)性與青島地區(qū)NAFLD易感性并無(wú)關(guān)系。

通過(guò)基因多態(tài)性對(duì)非酒精性單純性脂肪肝的高風(fēng)險(xiǎn)群進(jìn)行篩查和適當(dāng)干預(yù)可能有助于減輕NAFLD對(duì)個(gè)人和社會(huì)的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。盡管尚未發(fā)現(xiàn)新的NAFLD易感性位點(diǎn)，本研究仍對(duì)NAFLD易感基因的篩選工作做出了一定貢獻(xiàn)。此外，本研究存在一些局限性。首先，這項(xiàng)研究?jī)H青島地區(qū)漢族人群，將該結(jié)果應(yīng)用于其他地區(qū)時(shí)應(yīng)注意地域種族等差異。其次，本研究的樣本量限制了后續(xù)的分層分析，例如按NAFLD的嚴(yán)重程度及肥胖等因素進(jìn)行分析，使研究更細(xì)致。

倫理學(xué)聲明：本研究遵守國(guó)家所有相關(guān)法規(guī)、機(jī)構(gòu)政策和赫爾辛基宣言，并于2017年10月11日經(jīng)由青島市市立醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，批號(hào)：2017臨審字第20號(hào)（快）。所納入患者均簽署知情同意書。

利益沖突聲明：本研究不存在研究者、倫理委員會(huì)成員、受試者監(jiān)護(hù)人以及與公開研究成果有關(guān)的利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：馬磊、辛永寧負(fù)責(zé)課題設(shè)計(jì)，資料分析，撰寫論文；郝岸華、胡欣欣、趙真真、周林參與收集數(shù)據(jù)，修改論文；馬磊負(fù)責(zé)擬定寫作思路，指導(dǎo)撰寫文章并最后定稿。