姜 珊 聶艷艷 張亞云 王 佳 趙 瑩△

1上海實(shí)驗(yàn)動物研究中心應(yīng)用技術(shù)部，上海 201210 2雷允上藥業(yè)集團(tuán)有限公司研發(fā)部，江蘇蘇州 215009

乳腺增生是一種以乳腺組織導(dǎo)管和乳腺小葉發(fā)生結(jié)構(gòu)上的退行性改變和進(jìn)行性結(jié)締組織增生為特征的乳房疾病，發(fā)病率較高，可能發(fā)展成乳腺癌，嚴(yán)重威脅患者健康?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究[1-2]認(rèn)為，乳腺增生大多數(shù)是由于內(nèi)分泌系統(tǒng)失調(diào)所致，雌激素與孕激素分泌失調(diào)是最終導(dǎo)致乳腺增生的主要原因之一。消癥丸由柴胡、香附、大黃、青皮、浙貝母、白芍、王不留行等11味中藥材組成，具有疏肝行氣、活血化痰、軟堅散結(jié)的功效，主治氣滯血瘀痰凝所致的乳腺增生病。前期研究[3-4]表明，消癥丸具有抗乳腺增生作用，能減輕乳房疼痛，緩解有關(guān)癥狀，但確切的作用機(jī)制尚未完全清楚。本研究旨在通過構(gòu)建大鼠乳腺增生模型，觀察中成藥消癥丸對乳腺增生大鼠性激素水平及抗氧化能力的影響，以期為進(jìn)一步研究消癥丸治療乳腺增生癥的機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

40只雌性未孕SD大鼠，體質(zhì)量180～220 g，購自上海市計劃生育科學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動物經(jīng)營部，動物合格證編號0041927，許可證號SCXK(滬)2018-0006。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑

消癥丸(雷允上藥業(yè)集團(tuán)有限公司，國藥準(zhǔn)字Z20100057)，藥物組成為柴胡、香附、大黃(酒炙)、青皮、川芎、莪術(shù)、土鱉蟲、浙貝母、當(dāng)歸、白芍、王不留行。苯甲酸雌二醇注射液、黃體酮注射液購自寧波三生生物科技有限公司。枸櫞酸他莫昔芬購自揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司。

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)及谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)試劑盒購自南京建成生物工程研究所。雌二醇(estradiol，E2)、孕酮(progesterone，P)及催乳素(prolactin，PRL)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒購自上海鑫樂科技有限公司。

1.3 造模及干預(yù)方法

乳腺增生大鼠造模方法參照文獻(xiàn)[5]，適應(yīng)性喂養(yǎng)后，大鼠分別予以0.5 mg/kg苯甲酸雌二醇注射液肌肉注射，1次/d，連續(xù)25 d；再予以5 mg/kg黃體酮注射液肌肉注射，1次/d，連續(xù)5 d；共30 d。

40只SD大鼠隨機(jī)分為5組，分別為空白對照組、模型對照組、陽性對照組、低劑量治療組、高劑量治療組，每組8只。除空白對照組外，模型對照組、陽性對照組、低劑量治療組、高劑量治療組大鼠均進(jìn)行造模處理。空白對照組大鼠則予以等量無菌大豆油肌肉注射，1次/d。

造模10 d后，陽性對照組予以2 mg/kg他莫昔芬灌胃給藥，低劑量治療組予以0.62 g/kg消癥丸灌胃給藥，高劑量治療組予以2.48 g/kg消癥丸灌胃給藥，空白對照組和模型對照組則予以等體積蒸餾水灌胃處理，均為1次/d，連續(xù)干預(yù)4周。實(shí)驗(yàn)期間，大鼠自由進(jìn)食、進(jìn)水，保持墊料干燥，12 h交替照明。本動物實(shí)驗(yàn)經(jīng)上海實(shí)驗(yàn)動物研究中心福利倫理委員會審批(No.210518044)。

1.4 檢測指標(biāo)及方法

1.4.1 乳腺形態(tài)、病理學(xué)表現(xiàn)觀察

末次干預(yù)給藥24 h后，游標(biāo)卡尺精確測量大鼠第2對乳頭直徑和高度，并取下第2對完整的乳頭，用10%中性福爾馬林固定24 h后石蠟包埋、切片、HE染色，制作病理切片，在光學(xué)顯微鏡下觀察乳腺組織病理學(xué)表現(xiàn)。

1.4.2 性激素、氧化應(yīng)激水平檢測

末次干預(yù)給藥24 h后，麻醉大鼠，腹主動脈采血，4 ℃、3000 r/min離心10 min，吸取上層血清，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，采用ELISA法檢測各組大鼠血清E2、P、PRL水平，采用比色法檢測各組大鼠血清SOD、GSH-Px、MDA水平。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 乳頭直徑、乳頭高度比較

與空白對照組比較，模型對照組大鼠乳頭直徑顯著增大(P<0.05)，乳頭高度顯著增高(P<0.05)。與模型對照組比較，陽性對照組、低劑量治療組、高劑量治療組大鼠乳頭直徑顯著縮小(P<0.05)，乳頭高度顯著降低(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠乳頭直徑、乳頭高度比較

2.2 乳腺組織病理學(xué)變化

光學(xué)顯微鏡下，空白對照組大鼠乳腺組織未見明顯病理性改變。相比空白對照組，模型對照組大鼠乳腺組織中腺泡數(shù)量增多，乳腺小葉呈纖維腺瘤樣增生，腺腔擴(kuò)張充滿分泌物，導(dǎo)管增生擴(kuò)張充滿分泌物，腺泡上皮增生明顯，小葉內(nèi)纖維組織增多。相比模型對照組，陽性對照組大鼠乳腺增生情況得到改善，腺泡開始萎縮，數(shù)目減少，導(dǎo)管內(nèi)分泌物減少，增生情況得到改善。高劑量治療組可觀察到乳腺小葉和腺泡數(shù)目顯著減少。見圖1。

圖1 各組大鼠乳腺組織病理表現(xiàn)(×100)

2.3 血清E2、P、PRL水平比較

與空白對照組比較，模型對照組大鼠血清E2、PRL水平顯著升高(P<0.05)，P水平顯著降低(P<0.05)。與模型對照組比較，陽性對照組、高劑量治療組大鼠E2、PRL水平明顯降低(P<0.05)，P水平顯著升高(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠血清E2、P、PRL水平比較

2.4 血清SOD、GSH-Px、MDA水平比較

與空白對照組比較，模型對照組大鼠血清SOD、GSH-Px水平顯著降低(P<0.05)，MDA水平顯著升高(P<0.05)。與模型對照組比較，陽性對照組、高劑量治療組大鼠SOD、GSH-Px水平顯著升高(P<0.05)，MDA水平顯著降低(P<0.05)。見表3。

表3 各組大鼠血清SOD、GSH-Px、MDA水平比較

3 討論

乳腺增生性疾病是女性最為常見的乳房疾病之一，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為其發(fā)病是由于內(nèi)分泌失調(diào)或其他因素導(dǎo)致的腺體正常結(jié)構(gòu)紊亂及乳腺增生。主要表現(xiàn)為乳房包塊和乳房疼痛，常見為單側(cè)或雙側(cè)乳房脹痛或觸痛，伴有月經(jīng)失調(diào)、情志改變等，且隨月經(jīng)呈周期性變化，病程長、發(fā)展緩慢。中醫(yī)學(xué)關(guān)于乳腺增生具有獨(dú)特的理論體系，本病可歸屬于“乳癖”范疇?！锻饪普凇氛J(rèn)為本病的病因在于“憂郁傷肝，思慮傷脾，積想在心，所愿不得，致經(jīng)絡(luò)痞澀，聚結(jié)成核”，多與患者的情志、飲食、過度勞累有關(guān)。

乳腺為性激素的靶器官，乳腺組織主要接受E2、P和PRL的調(diào)控。E2可促進(jìn)乳腺導(dǎo)管及管周纖維組織生長，P可促進(jìn)乳腺小葉及腺泡組織的發(fā)育，PRL可促進(jìn)乳腺發(fā)育生長、發(fā)育并維持泌乳。PRL的升高也會直接刺激乳腺組織并進(jìn)一步抑制黃體期P的分泌，同時能刺激E2的合成，有助于E2水平升高而持續(xù)刺激乳腺組織進(jìn)而引起乳腺增生。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型對照組相比，空白對照組、消癥丸高劑量治療組大鼠血清E2、PRL水平顯著降低，P水平顯著升高；提示乳腺增生模型大鼠會出現(xiàn)血清性激素水平異常，同時消癥丸具有一定的調(diào)節(jié)性激素水平作用。

乳腺增生癥患者常伴有全身或乳腺局部炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激狀態(tài)[6]。雌激素能夠刺激乳腺細(xì)胞的生長和增殖從而使乳腺發(fā)育，并且能夠產(chǎn)生大量的活性氧并導(dǎo)致高水平的氧化應(yīng)激[7]。SOD、MDA和GSH-Px是反應(yīng)體內(nèi)抗氧化能力的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型對照組相比，空白對照組和消癥丸高劑量治療組大鼠血清SOD、GSH-Px水平顯著升高，MDA水平顯著降低；提示消癥丸可顯著改善乳腺增生大鼠的氧化應(yīng)激反應(yīng)，增強(qiáng)抗氧化能力。

綜上所述，消癥丸可有效改善大鼠乳腺增生，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)性激素水平、增強(qiáng)抗氧化能力有關(guān)。