張 云 李壽軍 周 星 卜曉敏

江蘇省儀征市人民醫(yī)院兒科 211400

EB病毒屬于嗜人外周血B淋巴細胞的DNA病毒，能夠誘發(fā)淋巴瘤、鼻咽癌、IM等臨床疾病，因該病毒引發(fā)的血液系統(tǒng)疾病極為常見，且其引發(fā)的疾病性質(zhì)多為惡性[1]。IM發(fā)生后，早期無典型臨床表現(xiàn)，且經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查研究表明，全球感染過該病毒的群體高達90%，在兒童被感染者中，該病毒會存在4d到半個月的潛伏期，且多數(shù)患者在發(fā)病時僅會出現(xiàn)上呼吸道癥狀，僅有少數(shù)患者會延發(fā)為IM[2-3]。雖多數(shù)患者在患病后預(yù)后較佳，但也存在部分患者會延發(fā)為嗜血綜合征等并發(fā)癥，對其生命安全造成威脅。故對該疾病的早期診斷與治療至關(guān)重要。目前，臨床對該疾病的診斷主要是通過測定EBV-DNA完成。但受 EBV潛伏期較長影響，早期會出現(xiàn)無法檢出的情況，故為了提高疾病早期檢出率，探究其他生化指標的測定勢在必行。LDH屬于糖酵解以及糖異生過程中的重要參與酶，而ADA是核酸代謝酶，現(xiàn)為探究將這兩項指標與EBV-DNA聯(lián)合應(yīng)用于該疾病中的具體診斷價值，特對2018年1月—2022年4月間在我院接受治療的IM患兒70例以及同期在我院接受體檢的健康兒童70例進行上述三種指標的聯(lián)合測定，并對測定結(jié)果進行總結(jié)分析，現(xiàn)匯總?cè)缦隆?/p>

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018年1月—2022年4月我院接受的兒童IM患兒70例為觀察組。再選取同期在我院接受體檢的健康兒童70例為對照組。本研究在院倫理委員會通過并批準。觀察組中男38例，女32例，年齡4～12歲，平均年齡(8.01±0.34)歲；對照組中男37例，女33例，年齡4～12歲，平均年齡(7.98±0.33)歲。兩組患兒基礎(chǔ)資料對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。參與此次研究的患者及其家屬均對研究過程知情且同意。納入標準：(1)與《諸福棠實用兒科學(xué)》[4]中該疾病診斷標準相符；(2)入組前未接受免疫抑制劑、抗感染等相關(guān)治療；(3)EBV特異性抗體陽性。排除標準：(1)合并惡性腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病者；(2)合并咽峽炎、扁桃體炎、肺炎等其他炎性疾病者；(3)非EB病毒引發(fā)的疾病者。

1.2 方法 兩組患兒均在入院1d內(nèi)/入組時對其進行空腹靜脈血的采集，采集2份血液標本，第1份采集量在3～5ml，第2份采集量為2ml。將采集的3～5ml血液置入含乙二胺四乙酸抗凝劑的試管中進行充分混勻后送檢。將血液標本放置到低速自動平衡離心機(長沙湘智離心機儀器有限公司生產(chǎn)的TD24-WS)中，在10cm半徑，4℃，3 000r/min的條件下進行持續(xù)15min的離心。將離心后的標本進行血清提取，并將提取出的血清放置到-80℃的超低溫冰箱中進行保存準備ADA指標以及LDH指標的測定，并在2d內(nèi)完成相關(guān)指標的測定。其中，ADA指標的測定在全自動生化分析儀(雅培Aeroset)中完成，采用寧波美康科技有限公司提供的測定試劑盒，測定方法為過氧化酶法；LDH指標的測定是在AttuneCytPix 流式細胞儀(賽默飛世爾科技有限公司)中完成的，采用上海雅吉生物科技有限公司提供的DTNB速率比色法測定試劑盒，測定方法為速率比色法。

將采集到的2ml血液置入含乙二胺四乙酸抗凝劑的試管中抗凝后，將其放置到含有淋巴細胞分離液的試管中，將該試管放置在離心機中，在18cm半徑，2 000r/min的條件下進行持續(xù)20min的離心。離心完成后，對白細胞層進行提取至1.5ml的離心管中，再將離心管放置在離心機中，在10cm半徑，12 000r/min的條件下進行持續(xù)5min的離心。離心完成后，將上清液棄去，將DNA 提取液加入沉淀物中，并通過c1000熒光定量PCR儀(南京貝登電子商務(wù)有限公司)以及默克DNA試劑盒[西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易]進行EBV-DNA指標的測定，測定方法為熒光PCR技術(shù)。

1.3 觀察指標 對比兩組間EBV-DNA陽性率以及LDH以及ADA水平。通過Pearson相關(guān)分析LDH、ADA及EBV-DNA三項指標之間的相關(guān)性。通過ROC曲線計算LDH、ADA及EBV-DNA三項指標之間的診斷效能。

2 結(jié)果

2.1 兩組EBV-DNA陽性率對比 觀察組EBV-DNA陽性率高于對照組(χ2=124.559，P=0.000<0.05)。見表1。

表1 兩組EBV-DNA陽性率對比[n(%)]

2.2 兩組LDH、ADA水平對比 觀察組LDH、ADA水平均高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組LDH、ADA水平對比

2.3 LDH、ADA及EBV-DNA三項指標之間的相關(guān)性對比 LDH、ADA及EBV-DNA三項指標之間存在相關(guān)性(P<0.05)。見表3。

表3 LDH、ADA及EBV-DNA三項指標的相關(guān)性對比

2.4 LDH、ADA及EBV-DNA三項指標之間的診斷效能 ROC曲線表明，EBV-DNA以703.22copies/ml為臨界值時，診斷效能最高，再依次為ADA、LDH。詳情見表4及圖1。

表4 LDH、ADA及EBV-DNA三項指標診斷效能對比

圖1ROC曲線

3 討論

IM由支原體、腺病毒、巨細胞病毒以及EB病毒等多種病原體感染誘發(fā)的傳染性自限性疾病，以兒童以及青少年為主要高發(fā)群體[5]。其中，EB病毒是誘發(fā)該疾病發(fā)生的主要致病菌，以外周血異型淋巴細胞增多、肝脾腫大、淋巴結(jié)腫大以及發(fā)熱為典型臨床表現(xiàn)[6]。多數(shù)患者還會伴有上呼吸道感染癥狀以及輕度咽炎，少數(shù)患兒還會伴有噬血細胞綜合征、溶血性貧血、血小板減少性紫癜等血液系統(tǒng)疾病，突發(fā)性耳聾、視神經(jīng)炎、腦炎等神經(jīng)系統(tǒng)疾病，并可能會出現(xiàn)呼吸道梗阻、喉頭水腫、肺炎、心肌炎等并發(fā)癥。故為保障患兒的預(yù)后，早期的診斷與治療至關(guān)重要[7-8]。

本文結(jié)果表明，觀察組EBV-DNA陽性率以及LDH、ADA水平高于對照組(P<0.05)；LDH、ADA及EBV-DNA三項指標之間存在相關(guān)性(P<0.05)；ROC曲線表明，EBV-DNA以703.22copies/ml為臨界值時，其診斷IM患兒的特異性為0.949、敏感性為0.897，診斷效能最高，之后依次為ADA、LDH。結(jié)果證實血清LDH 、ADA及EBV-DNA聯(lián)合應(yīng)用在IM患兒的疾病診斷中具有較高的臨床價值。這與胡杰等[9]的觀點一致。結(jié)合本文結(jié)果進行分析，ADA參與了嘌呤核苷代謝過程，是將腺嘌呤核苷催化成次黃嘌呤核苷，再在核苷磷酸化酶的輔助下轉(zhuǎn)化成次黃嘌呤，以尿酸為代謝緩和終產(chǎn)物[10-11]。因此，在機體的不同組織中均有其存在，但以淋巴細胞、脾、胸腺處存在量更大，以骨骼肌、腎、肺、肝處含量較少；該指標在淋巴細胞的成熟、分化以及增殖過程中具有所參與，且主要參與T 淋巴細胞的活化過程，屬于該淋巴細胞的非特異性指標之一[12-13]。且該指標還與機體細胞免疫活性具有較大的關(guān)系，通過與體液、血液中該指標及其同工酶的測定，可有效對疾病進行鑒別診斷；而在IM疾病中，由于該疾病由EBV 感染引發(fā)，而EBV基因是由B 淋巴細胞攜帶，并對相應(yīng)的抗原做出表達，故會對 T 淋巴細胞刺激而引發(fā)其異常的分化、增殖，故導(dǎo)致ADA水平急劇增加[14]。因此，EBV-DNA指標在診斷IM患兒方面具有較高的特異度和靈敏度。而LDH 屬于酶類物質(zhì)，參與了糖酵解與對丙酮酸以及乳酸的催化之間氧化還原反應(yīng)，其在機體任何組織細胞胞質(zhì)內(nèi)均存在，但在腎臟組織中分布最廣，能夠用于惡性腫瘤以及肝臟疾病的鑒別診斷[15]。在IM疾病中，EB病毒結(jié)合B 淋巴細胞上的 EBV 受體，進而導(dǎo)致B 細胞在受到感染后，其表面抗原發(fā)生改變，誘發(fā)了T 細胞異?；钚?，對B細胞造成殺傷，進而對組織造成損害，誘發(fā)LDH水平急劇增多。

綜上所述，在IM的診斷中，EBV-DNA、LDH及ADA具有較高的診斷效能，應(yīng)用價值顯著。