陳海琛，李旭苗，劉立媛，曹茜，丁彩霞

1.西安高新醫(yī)院病理科，陜西 西安 710075；2.陜西省腫瘤醫(yī)院病理科，陜西 西安 710076

卵巢癌是發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子宮體惡性腫瘤而病死率居于女性生殖道惡性腫瘤之首的女性生殖系統(tǒng)腫瘤，其中約80%的卵巢癌為上皮性卵巢惡性腫瘤[1-2]。目前早期上皮性卵巢惡性腫瘤患者可經(jīng)單純手術(shù)治愈，但因該腫瘤病灶位于盆腔深部，早期缺乏特異性癥狀，尚未找到有效的早期篩查方法，大多數(shù)患者就診時(shí)已發(fā)展至中晚期，需接受腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)聯(lián)合放化療等綜合治療方案，預(yù)后較差[3-4]。增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)是細(xì)胞核脫氧核糖核酸復(fù)制所必需的聚合酶的輔助蛋白，參與腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲[5]。人表皮生長因子受體-2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)介導(dǎo)細(xì)胞的增殖、分化和抗凋亡等生理過程，與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，是目前腫瘤免疫治療研究中的重要靶分子之一[6]。此外，現(xiàn)有臨床研究指出，上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition，EMT)是腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移過程中的重要生理過程，而這一過程的生物學(xué)改變包括波形蛋白(Vimentin)表達(dá)上調(diào)和上皮鈣黏蛋白(E-Cadherin)下調(diào)[7-9]。基于PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中的重要作用，本研究檢測上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin的表達(dá)情況，并分析四者與臨床病理特征的關(guān)系，以期為上皮性卵巢惡性腫瘤臨床診療提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年3月至2022年3月期間于西安高新醫(yī)院、陜西省腫瘤醫(yī)院接受手術(shù)治療的92例上皮性卵巢惡性腫瘤患者作為癌癥組，年齡36～72歲，平均(56.59±6.52)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合上皮性卵巢惡性腫瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]，經(jīng)術(shù)后病理確診；(2)首次確診并接受手術(shù)治療；(3)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)有惡性腫瘤病史或合并其他惡性腫瘤；(2)標(biāo)本污染或不足以用于本研究。另選擇同期50例在西安高新醫(yī)院行卵巢良性囊腫剔除組織者作為對(duì)照組，年齡28～74歲，平均(52.88±5.79)歲。兩組患者的年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)以上兩家醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 檢測方法采用免疫組織化學(xué)染色法檢測腫瘤組織中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin蛋白表達(dá)情況，鼠抗人PCNA單克隆抗體、兔抗人HER2單克隆抗體、兔抗人Vimentin單克隆抗體、鼠抗人E-cadherin單克隆抗體、免疫組化試劑盒均購自福州邁新公司、美國羅氏公司。所有患者均于術(shù)中取卵巢腫瘤樣本，以10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋、3.0 μm連續(xù)切片，切片常規(guī)脫蠟至水；用羅氏Ventana Benchmark全自動(dòng)免疫組織化學(xué)平臺(tái)染色；染色完成后用洗潔精稀釋水沖洗，無水乙醇脫水兩次，2 min/次，中性樹膠封片。

1.3 PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin陽性表達(dá)判定標(biāo)準(zhǔn)采用半定量法判定，PCNA定位于細(xì)胞核，HER2、E-cadherin定位于細(xì)胞膜，Vimentin定位于細(xì)胞質(zhì)，每張切片于400倍光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)視野，各視野記100個(gè)細(xì)胞，對(duì)染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞百分比進(jìn)行評(píng)估：無色、淺黃色、棕黃色、棕褐色對(duì)應(yīng)計(jì)0分、1分、2分、3分，陽性細(xì)胞所占的百分比＜5%、5%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%對(duì)應(yīng)計(jì)0分、1分、2分、3分、4分，以染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞占比分值乘積分?jǐn)?shù)判定，0～3分陰性(-)，4～6分弱陽性(+)，7～9分為陽性(++)，10～12分強(qiáng)陽性(+++)，乘積＞3分即陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較行χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用四格表的關(guān)聯(lián)分析求Phi系數(shù)(φ)進(jìn)行檢驗(yàn)。以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者卵巢腫瘤組織中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin蛋白陽性表達(dá)水平比較癌癥組患者組織中的PCNA、HER2、Vimentin蛋白陽性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，E-Cadherin蛋白陽性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者卵巢腫瘤組織中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin蛋白陽性表達(dá)水平比較[例(%)]

2.2 不同臨床病理特征上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2和Vimentin陽性表達(dá)水平比較低級(jí)別、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤組織中PCNA陽性表達(dá)率均高于高級(jí)別、無淋巴結(jié)患者；FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、高級(jí)別、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者腫瘤組織中HER2陽性表達(dá)率高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、低級(jí)別、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者；FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、低級(jí)別、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者腫瘤組織中Vimentin陽性表達(dá)率均高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、高級(jí)別、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 不同臨床病理特征上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin陽性表達(dá)水平比較[例(%)]

2.3 不同臨床病理特征上皮性卵巢惡性腫瘤中E-Cadherin陽性表達(dá)水平比較FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、高級(jí)別、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者腫瘤組織中E-Cadherin陽性表達(dá)率均低于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、低級(jí)別、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 不同臨床病理特征上皮性卵巢惡性腫瘤中E-Cadherin陽性表達(dá)水平比較[例(%)]

2.4 上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin蛋白表達(dá)間的關(guān)系經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA表達(dá)與HER2、Vimentin表達(dá)呈正相關(guān)(φ=0.409，0.455，P＜0.05)，與E-Cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(φ=-0.903，P＜0.05)；HER2表達(dá)與Vimentin表達(dá)呈正相關(guān)(φ=0.597，P＜0.05)，與E-Cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(φ=-0.393，P＜0.05)；Vimentin表 達(dá) 與E-Cadherin表 達(dá) 呈 負(fù) 相 關(guān)(φ=-0.596，P＜0.05)，見表4～表6。

表4 上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA與HER2、Vimentin、E-Cadherin蛋白表達(dá)的關(guān)系(例)

表5 上皮性卵巢惡性腫瘤中HER2與Vimentin、E-Cadherin蛋白表達(dá)的關(guān)系(例)

表6 上皮性卵巢惡性腫瘤中Vimentin與E-Cadherin蛋白表達(dá)的關(guān)系(例)

3 討論

上皮性卵巢惡性腫瘤起源于卵巢上皮，多發(fā)于絕經(jīng)后女性群體中，具有發(fā)病率高、死亡率高、早期不易診斷、易轉(zhuǎn)移和易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)[11]。目前臨床推薦檢測CA125和HE4水平為上皮性卵巢惡性腫瘤的臨床診斷、病情評(píng)估和預(yù)后評(píng)估提供參考信息，但臨床實(shí)際中仍有約一半的早期患者CA125值檢測結(jié)果并無異常[12]?，F(xiàn)階段上皮性卵巢惡性腫瘤的分子機(jī)制尚未完全明晰，使得腫瘤診斷、病情評(píng)估級(jí)預(yù)后判斷更加困難，臨床仍需尋找新型有效的腫瘤標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)為該癌癥臨床診療提供有效的參考信息，從而提高患者生存質(zhì)量[13]。

PCNA為DNA復(fù)制過程中DNA聚合酶D的輔助蛋白，可反映細(xì)胞的增殖程度，參與腫瘤細(xì)胞的增殖過程，因此，檢測其表達(dá)水平可用于判斷腫瘤細(xì)胞增殖活性；此外，PCNA過表達(dá)時(shí)增加細(xì)胞間的張力而使細(xì)胞間的黏附能力降低，有利于腫瘤細(xì)胞脫落形成轉(zhuǎn)移灶，導(dǎo)致腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，故其表達(dá)水平還可反映腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)信息[14]。HER2是表皮生長家族員之一，具有促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制抑制凋亡、誘導(dǎo)血管和淋巴管新生、增強(qiáng)腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移等多種作用，作為原癌基因參與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。目前已有研究指出，卵巢癌中HER2過表達(dá)情況與乳腺癌相似，或可將其作為卵巢癌的生物標(biāo)志物，從而為臨床診療提供有效信息，但仍需更多研究驗(yàn)證[15]。

侵襲轉(zhuǎn)移是卵巢癌患者死亡的主要原因，而腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是多種基因多種分子生物學(xué)改變、多步驟完成的復(fù)雜過程，這一復(fù)雜過程以腫瘤細(xì)胞間黏附能力減低和遷移能力增強(qiáng)為始動(dòng)因素，相關(guān)概念即EMT。EMT是腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，目前臨床研究已證實(shí)在上皮性腫瘤的發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移中EMT會(huì)被激活，引起間質(zhì)性標(biāo)志物(Vimentin等)表達(dá)上調(diào)、細(xì)胞表面上皮性標(biāo)志物(E-cadherin等)表達(dá)下調(diào)，從而破壞細(xì)胞間的連接，使細(xì)胞間黏附能力降低、運(yùn)動(dòng)能力增加[16]。Vimentin主要表達(dá)于間質(zhì)起源的細(xì)胞中，在上皮源性的惡性腫瘤中也有表達(dá)，其作用是引起細(xì)胞遷。Vimentin引起的細(xì)胞遷移是惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，故Vimentin表達(dá)水平被認(rèn)為與胃腸道腫瘤、乳腺癌等多種類型腫瘤細(xì)胞的惡性程度有關(guān)[17]。E-Cadherin為鈣離子依賴性跨膜糖蛋白，參與極化上皮細(xì)胞間的黏附作用，強(qiáng)烈表達(dá)于黏附連接中，維持上皮細(xì)胞的完整性和極性，其表達(dá)下調(diào)或缺失影響腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT過程，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[18]?；谏鲜鯬CNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用，以上四者或可作為上皮性卵巢惡性腫瘤的生物標(biāo)志物為臨床診療提供有效參考信息。

本研究獲取上皮性卵巢惡性腫瘤患者和卵巢良性囊腫患者的腫瘤組織，檢測腫瘤組織中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin表達(dá)情況，結(jié)果顯示，相比于對(duì)照組，癌癥組PCNA、HER2、Vimentin蛋白陽性表達(dá)率更高，而E-Cadherin蛋白陽性表達(dá)率更低，說明在上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2、Vimentin過表達(dá)而E-Cadherin低表達(dá)。分析不同臨床病理特征上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2和Vimentin陽性表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)IGO分期越高，HER2、Vimentin蛋白陽性表達(dá)率越高而E-Cadherin蛋白陽性表達(dá)率越低，組織分化程度程度越低，HER2、Vimentin蛋白陽性表達(dá)率越高而PCNA、E-Cadherin蛋白陽性表達(dá)率越低，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者PCNA、HER2、Vimentin蛋白陽性表達(dá)率更高而E-Cadherin蛋白表達(dá)陽性率更低，說明上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin表達(dá)與組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān)，HER2、Vimentin及E-Cadherin表達(dá)與FIGO分期相關(guān)，其中在高級(jí)別上皮性腫瘤中HER2蛋白陽性表達(dá)率較低級(jí)別上皮性腫瘤中更高，原因是分化程度低的腫瘤細(xì)胞處于快速增殖分化期，HER2基因擴(kuò)增及其蛋白過表達(dá)加速腫瘤細(xì)胞生長[19]。此外，本研究中，上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2、Vimentin表達(dá)間均存在正相關(guān)關(guān)系，且三者均與E-Cadherin表達(dá)負(fù)相關(guān)，提示PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin可能在上皮性卵巢惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中相互作用、相互影響。

綜上所述，在上皮性卵巢惡性腫瘤中，PCNA、HER2、Vimentin蛋白過表達(dá)而E-Cadherin低表達(dá)，且四者異常表達(dá)均與組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，HER2、Vimentin及E-Cadherin表達(dá)與FIGO分期相關(guān)，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，檢測四者表達(dá)情況可為臨床診療提供一定診療信息，但四者參與調(diào)控上皮性卵巢惡性腫瘤的具體機(jī)制仍需深入研究。