李憲秀，何濤，毛建衛(wèi)，2，沙如意

（1 浙江科技學(xué)院生物與化學(xué)工程學(xué)院，浙江 省農(nóng)產(chǎn)品化學(xué)與生物加工技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 省農(nóng)業(yè)生物資源生化制造協(xié)同創(chuàng)新中心，浙江 杭州 310023；2 浙江工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江 紹興 312000）

離子交換色譜是蛋白質(zhì)分離純化中被廣泛使用的一種關(guān)鍵技術(shù)，通過(guò)離子交換配基與蛋白質(zhì)之間的靜電相互作用不同來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)的分離[1-2]。為了進(jìn)一步提高介質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)的吸附容量和傳質(zhì)速率，以聚合物為配基的接枝型色譜介質(zhì)被成功研發(fā)并報(bào)道[3-6]。

表面引發(fā)原子轉(zhuǎn)移自由基聚合反應(yīng)（SI-ATRP）是一種通過(guò)調(diào)節(jié)引發(fā)劑和單體用量以及反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)短，可實(shí)現(xiàn)對(duì)聚合物的接枝密度、分子量、分子結(jié)構(gòu)精準(zhǔn)控制的技術(shù)[7-9]，用于制備聚合物接枝型介質(zhì)并展現(xiàn)出了優(yōu)良的蛋白質(zhì)吸附性能[10-12]。聚二甲胺基丙基丙烯酰胺（pDMAPAA）接枝型陰離子交換介質(zhì)（FF-pDMAPAA）對(duì)牛血清白蛋白（BSA）的吸附容量和傳質(zhì)速率隨著接枝鏈長(zhǎng)度的增加呈現(xiàn)先上升后下降的現(xiàn)象，在離子交換容量（IC）為458mmol/L 時(shí)達(dá)到最高水平，此時(shí)動(dòng)態(tài)結(jié)合容量可在流速為150～1350cm/h 條件下保持在180mg/mL 以上[13]。研究表明，通過(guò)SI-ATRP法可開(kāi)發(fā)高性能的離子交換色譜介質(zhì)，聚合物接枝鏈提供的三維立體吸附空間和“鏈傳遞”現(xiàn)象促進(jìn)了蛋白質(zhì)吸附容量和傳質(zhì)速率的提升。然而，高電荷密度的聚合物配基會(huì)造成蛋白質(zhì)結(jié)合強(qiáng)度增大、空間位阻效應(yīng)以及鏈間的靜電排斥效應(yīng)增強(qiáng)，進(jìn)而對(duì)蛋白質(zhì)吸附造成不利影響[14-15]。例如，采用甲基丙烯酸鈉（MA）陰離子單體通過(guò)SI-ATRP 法制備得到的一系列不同IC 值（接枝鏈長(zhǎng)度）的聚甲基丙烯酸鈉（pMA）接枝型陽(yáng)離子交換介質(zhì)在IC 值（接枝鏈長(zhǎng)度）較高時(shí)，對(duì)γ-球蛋白的吸附容量較低，并且對(duì)溶菌酶和γ-球蛋白的傳質(zhì)速率也較低[16]。

為了進(jìn)一步提高聚合物接枝型離子交換介質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)的傳質(zhì)速率，研究者們基于電荷中和原理對(duì)帶電聚合物進(jìn)行了修飾和改造[17-19]。利用乙酸鈉對(duì)聚乙烯亞胺（PEI）接枝型介質(zhì)的聚合物配基電荷進(jìn)行部分中和，介質(zhì)的蛋白質(zhì)吸附容量基本保持不變，但其傳質(zhì)速率提升了3 倍[17]。在對(duì)PEI 衍生型陽(yáng)離子交換介質(zhì)進(jìn)行乙醇胺電荷中和修飾后，也發(fā)現(xiàn)介質(zhì)的蛋白質(zhì)傳質(zhì)速率有了明顯提升[20]。因此，通過(guò)部分電荷中和反應(yīng)降低聚合物配基的電荷密度，進(jìn)而減弱蛋白質(zhì)與配基之間的結(jié)合強(qiáng)度以及配基之間的靜電排斥效應(yīng)，可促進(jìn)蛋白質(zhì)傳質(zhì)速率的提升。

在對(duì)pMA接枝型陽(yáng)離子交換介質(zhì)的研究中發(fā)現(xiàn)，IC 值為320mmol/L 的pMA 接枝型介質(zhì)（FF-pMA-320）對(duì)γ-球蛋白的吸附容量最高，對(duì)溶菌酶的吸附容量也處于較高水平，但其對(duì)兩種蛋白質(zhì)的傳質(zhì)速率較低。因此，為了提高pMA 接枝型陽(yáng)離子交換介質(zhì)的蛋白質(zhì)傳質(zhì)速率，并探究電荷密度變化對(duì)pMA 接枝型介質(zhì)的蛋白質(zhì)吸附行為的影響，選取FF-pMA-320 為初始介質(zhì)，對(duì)其含有的帶電配基（羧基）進(jìn)行乙醇胺中和修飾，并以尺寸大小不同的溶菌酶和γ-球蛋白為模型蛋白，考察不同種類(lèi)的蛋白質(zhì)在介質(zhì)上的吸附行為隨配基電荷密度的變化規(guī)律，豐富接枝型陽(yáng)離子交換介質(zhì)的種類(lèi)和應(yīng)用。

1 材料和方法

1.1 材料

MA，梯希愛(ài)（上海）化成工業(yè)發(fā)展有限公司；溶菌酶（來(lái)自于雞卵清，純度約96%，Mw約14300，pI約11.4），Sigma-Aldrich（St.Louis,MO,USA）；γ-球蛋白（來(lái)源于牛血清，純度約99%，Mw約150000，pI 約6.9），北京中生瑞泰科技有限公司；三(羥甲基)氨基甲烷（Tris），上海生工生物工程技術(shù)有限公司；1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC），Alfa Sesar (Ward Hill, MA, USA)；N,N-二甲基甲酰胺（DMF，優(yōu)級(jí)純）、三乙胺（TEA，優(yōu)級(jí)純）以及其他分析純?cè)噭?，天津江天化工技術(shù)股份有限公司。

FF-pMA-320源自前期研究工作[16]。通過(guò)將γ-球蛋白和溶菌酶分別溶解在20mmol/L 乙酸鹽緩沖液（pH 5.0）和20mmol/L Tris-HCl（pH 8.0）中得到實(shí)驗(yàn)所需的蛋白質(zhì)溶液。

1.2 乙醇胺中和修飾FF-pMA-320

乙醇胺中和修飾FF-pMA-320的方法如圖1 所示。稱(chēng)取5g FF-pMA-320 溶于15mL 去離子水中，加入乙醇胺1mL，然后向混合液中加入一定質(zhì)量的EDC，于25℃用鹽酸調(diào)節(jié)混合懸浮液pH至4.75～5，置于25℃、170r/min 的恒溫水浴搖床中振蕩反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后用大量去離子水清洗介質(zhì)，制備得到不同IC值的介質(zhì)。

圖1 乙醇胺中和修飾FF-pMA-320示意圖

1.3 陽(yáng)離子交換容量的測(cè)定

取1g 抽干的介質(zhì)，加入10mL 0.1mol/L 的鹽酸（HCl），將混合物置于25℃、170r/min 水浴搖床中平衡30min以質(zhì)子化接枝聚合物中的羧基。然后將懸濁液轉(zhuǎn)移到離心管中，于3000r/min離心5min，棄上清，再次加入上述體積和濃度的鹽酸，重復(fù)兩次。將含有介質(zhì)的懸浮液倒入G3 砂芯漏斗后加入去離子水進(jìn)行清洗，直到檢測(cè)出抽濾得到的液體變?yōu)橹行?。將介質(zhì)抽干后進(jìn)行稱(chēng)量，然后將其加入到盛有25mL NaOH 和NaCl 混合液的錐形瓶中，其中NaCl濃度為0.5mol/L，NaOH濃度為0.05mol/L。置于25℃、170r/min 水浴搖床平衡3h。將懸濁液于3000r/min離心5min，取5mL 上清，以甲基橙作指示劑，用0.05mol/L的鹽酸滴定上清液中NaOH含量，當(dāng)溶液由黃色轉(zhuǎn)變?yōu)槌壬催_(dá)到滴定終點(diǎn)。然后對(duì)初始NaOH 和NaCl 混合溶液進(jìn)行滴定，確定初始液中NaOH 的含量，計(jì)算NaOH 的消耗量，就可得到介質(zhì)的IC值。

1.4 蛋白質(zhì)靜態(tài)和動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)

蛋白質(zhì)靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)采用間歇搖瓶法[21]進(jìn)行，可獲得介質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)的相關(guān)吸附性能參數(shù)。首先用平衡緩沖液將經(jīng)過(guò)去離子水洗凈抽干的介質(zhì)平衡12h。然后向25mL 錐形瓶中加入約0.05g 抽干的介質(zhì)，之后加入已知濃度的蛋白質(zhì)溶液。其中，蛋白質(zhì)溶液體積為5mL，濃度范圍是0.5～5mg/mL。將錐形瓶密封后，置于25℃的恒溫水浴搖床中，溶菌酶170r/min 振蕩24h，γ-球蛋白100r/min 振蕩24h，使介質(zhì)能夠充分吸附上蛋白。最后將蛋白質(zhì)與介質(zhì)的懸浮液取出放于離心管中，靜置30min。將平衡緩沖液作為參比，在280nm 下測(cè)定上清液的吸光值。根據(jù)物料衡算得到介質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)的吸附量，再通過(guò)Langmuir 方程[22-23]擬合吸附曲線，從而得到蛋白質(zhì)的qm值和Kd值，如式(1)。

式中，qm為蛋白質(zhì)的飽和吸附容量，mg/mL；Kd為解離常數(shù)，mg/mL；c和q分別為達(dá)到吸附平衡時(shí)蛋白質(zhì)在液相和固相上的濃度，mg/mL。

采用間歇攪拌法[24]可測(cè)定陽(yáng)離子交換介質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)的吸附動(dòng)力學(xué)，進(jìn)而獲得動(dòng)力學(xué)參數(shù)。首先使用平衡緩沖液配置100mL 濃度為1mg/mL 的蛋白質(zhì)溶液并對(duì)其進(jìn)行脫氣處理，然后將其放入150mL三口圓底燒瓶中。將攪拌槳放入三口圓底燒瓶中的蛋白質(zhì)液面以下進(jìn)行攪拌，使蛋白質(zhì)溶液混合均勻，采用恒溫水浴將溫度穩(wěn)定在25℃。蛋白質(zhì)溶液通過(guò)蠕動(dòng)泵循環(huán)流經(jīng)?KTA ExplorerTM 100（Uppsala,Sweden）上的UV-900紫外檢測(cè)器，流速為20mL/min。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液的紫外吸光值穩(wěn)定后，稱(chēng)取一定量用平衡緩沖液預(yù)平衡12h并抽干的介質(zhì)加入燒瓶里的蛋白溶液中，在線檢測(cè)液相不同時(shí)間下蛋白質(zhì)吸光值的變化，從而確定蛋白質(zhì)在液相中的濃度與時(shí)間的關(guān)系曲線。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)用有效孔擴(kuò)散模型[25-26]進(jìn)行擬合，并利用MathWorks Corporation 開(kāi)發(fā)的Matlab 軟件（Natick,MA,USA）求解得到蛋白質(zhì)在介質(zhì)中的有效擴(kuò)散系數(shù)（De）。

實(shí)驗(yàn)所用蛋白質(zhì)為γ-球蛋白和溶菌酶，所對(duì)應(yīng)的平衡緩沖液分別為20mmol/L 乙酸鹽緩沖液（pH 5.0）和20mmol/L Tris-HCl（pH 8.0）。在動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)中，溫度為25℃時(shí)γ-球蛋白在自由溶液中的擴(kuò)散系數(shù)（D0）為4.4×10-11m2/s[27]，溶菌酶的D0值為11×10-11m2/s[16]，蛋白質(zhì)在介質(zhì)中的有效擴(kuò)散系數(shù)與在自由溶液中的擴(kuò)散系數(shù)的比值（De/D0）代表介質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)的傳質(zhì)速率。

1.5 動(dòng)態(tài)結(jié)合容量的測(cè)定

本實(shí)驗(yàn)在?KTA Start 層析系統(tǒng)（GE Healthcare,Uppsala, Sweden） 中進(jìn)行。首先將介質(zhì)填裝進(jìn)TricornTM5/50（50mm×5mm）層析柱（GE Healthcare,Uppsala,Sweden）中，并將層析柱連接到層析系統(tǒng)中。然后經(jīng)1.5mL/min 的流速形成體積為(1.05±0.05)mL 的固定床層。將層析柱用平衡緩沖液平衡15～20個(gè)柱體積，待紫外檢測(cè)器信號(hào)穩(wěn)定后將紫外吸光值歸零。然后將用平衡緩沖液配制的1mg/mLγ-球蛋白溶液以上述流速上樣至50%穿透。停止進(jìn)樣后將吸附的蛋白質(zhì)用0.5mol/L NaCl洗脫下來(lái)，再對(duì)層析柱進(jìn)行再生，再生液為0.5mol/L的NaOH。

蛋白質(zhì)的動(dòng)態(tài)結(jié)合容量（DBC）以10%穿透進(jìn)行計(jì)算[24]，如式(2)。

式中，Vp為達(dá)到10%穿透時(shí)蛋白質(zhì)的進(jìn)樣量，mL；Vh為系統(tǒng)死體積，mL；cp為上樣蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；Vb為填充層析柱體積，mL。

此實(shí)驗(yàn)中，平衡緩沖液為20mmol/L 乙酸鹽緩沖液（pH 5.0），操作流速為0.5～2.5mL/min (150～750cm/h)。

2 結(jié)果與討論

FF-pMA-320對(duì)γ-球蛋白的吸附容量較高，然而，由于可利用孔空間的減小以及接枝鏈間排斥作用增加，導(dǎo)致其對(duì)γ-球蛋白的傳質(zhì)速率與IC 值較低的MA接枝型介質(zhì)相比較小。為了提高此介質(zhì)對(duì)γ-球蛋白的傳質(zhì)速率，采用乙醇胺中和修飾FFBr-pMA-320以降低接枝鏈電荷密度，制備得到IC值分別為(170±6)mmol/L 和(234±5)mmol/L 的介質(zhì)，命名為pMA-320-R170和pMA-320-R230，研究電荷密度對(duì)蛋白質(zhì)吸附行為的影響機(jī)制。

2.1 靜態(tài)吸附

鹽濃度為0 時(shí)，測(cè)定了γ-球蛋白和溶菌酶在pMA-320-R170和pMA-320-R230上的靜態(tài)吸附情況，并與初始介質(zhì)FF-pMA-320 作對(duì)比。通過(guò)Langmuir 方程擬合得到的吸附等溫線如圖2 所示，吸附平衡參數(shù)見(jiàn)表1。

圖2 兩種蛋白質(zhì)在陽(yáng)離子交換介質(zhì)中的吸附等溫線

表1 γ-球蛋白和溶菌酶在陽(yáng)離子交換介質(zhì)上的吸附平衡參數(shù)

對(duì)于兩種蛋白來(lái)說(shuō)，隨著IC值的降低，qm均呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)（表1），當(dāng)IC值下降至170mmol/L時(shí)，介質(zhì)對(duì)γ-球蛋白和溶菌酶的qm值與初始介質(zhì)相比分別下降了36%和29%。這與文獻(xiàn)中報(bào)道的研究結(jié)果不同，例如溶菌酶在乙醇胺中和修飾的聚乙烯亞胺接枝型陽(yáng)離子交換介質(zhì)（FF-PEI-CR）中的吸附容量隨IC 值下降呈現(xiàn)出先輕微上升后逐漸下降趨勢(shì)[20]，BSA 在乙酸鈉中和修飾的PEI 接枝型陰離子交換介質(zhì)中的吸附容量隨IC 值下降基本保持不變[17]。本研究中所用的初始介質(zhì)的IC 值（320mmol/L）與PEI接枝型介質(zhì)的IC值（970mmol/L 或740mmol/L）相比較低，并且聚合物pMA 的電荷密度（9.25mmol/g polymer）小于PEI的電荷密度（23.25mmol/g polymer），造成了初始介質(zhì)FF-pMA-320 的蛋白質(zhì)吸附位點(diǎn)較少。FF-pMA-320 經(jīng)過(guò)乙醇胺中和修飾后，接枝鏈的電荷密度降低，使得與蛋白質(zhì)結(jié)合的可及性結(jié)合位點(diǎn)數(shù)減少，導(dǎo)致介質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)的qm值呈現(xiàn)降低趨勢(shì)。經(jīng)過(guò)中和修飾后，介質(zhì)對(duì)兩種蛋白尤其是γ-球蛋白的Kd值降低（表1），表明蛋白質(zhì)與帶電配基之間結(jié)合強(qiáng)度隨介質(zhì)電荷密度的降低而增大。這是因?yàn)殡姾擅芏冉档蜁?huì)減弱聚合物接枝鏈間的靜電排斥作用，使得三維立體接枝層對(duì)蛋白質(zhì)入孔產(chǎn)生的空間位阻作用減弱，從而使蛋白質(zhì)更易與吸附位點(diǎn)結(jié)合，導(dǎo)致蛋白質(zhì)與帶電配基之間結(jié)合強(qiáng)度增大。同一種減電荷介質(zhì)對(duì)γ-球蛋白的吸附容量明顯小于其對(duì)溶菌酶的吸附容量，這與未經(jīng)中和修飾的FF-pMA-320對(duì)兩種蛋白質(zhì)吸附容量的差異表現(xiàn)一致。蛋白質(zhì)尺寸不同造成其在入孔以及進(jìn)入孔內(nèi)與配基發(fā)生吸附作用的過(guò)程中所受到的空間阻力大小不同[28]；此外，帶電配基在不同蛋白質(zhì)吸附條件下解離程度不同，造成配基與蛋白質(zhì)之間的靜電相互作用力大小有所差異，二者共同影響了不同蛋白質(zhì)在同一介質(zhì)上的吸附量。

與其他聚合物接枝型陽(yáng)離子交換介質(zhì)相比，乙醇胺中和修飾的pMA 接枝型介質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)的吸附容量處于較高水平。當(dāng)IC 值相近時(shí)，pMA-320-R230 對(duì)溶菌酶的吸附容量是海藻酸鈉接枝型介質(zhì)Alg-FF-240吸附容量（225mg/mL）的1.4倍，是商品化介質(zhì)CM Sepharose FF 吸附容量（194mg/mL）的1.6 倍[24]。相同吸附條件下，pMA-320-R170 對(duì)γ-球蛋白的吸附容量高于Alg-FF-160[27]。

2.2 吸附動(dòng)力學(xué)

以γ-球蛋白和溶菌酶為模型蛋白，對(duì)pMA-320-R170和pMA-320-R230兩種介質(zhì)在0mmol/L NaCl時(shí)進(jìn)行吸附動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，所得吸附動(dòng)力學(xué)曲線如圖3所示，擬合得到的吸附動(dòng)力學(xué)參數(shù)De/D0如圖4所示。

圖3 兩種蛋白質(zhì)在陽(yáng)離子交換介質(zhì)上的吸附動(dòng)力學(xué)曲線

圖4表明，隨著IC值的降低，兩種蛋白的De/D0值均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，當(dāng)IC值下降至170mmol/L時(shí)，γ-球蛋白的De/D0值是其在初始介質(zhì)FF-pMA-320 上的5.5倍，溶菌酶的傳質(zhì)速率是其在初始介質(zhì)上的1.6倍。相同吸附條件下，pMA-320-R170對(duì)γ-球蛋白的傳質(zhì)速率是Alg-FF-160（De/D0=0.045）的4.9倍，是CM Sepharose FF（De/D0=0.074）的3 倍[27]。這種De/D0值上升的趨勢(shì)類(lèi)似于文獻(xiàn)報(bào)道的乙醇胺中和修飾PEI接枝型陽(yáng)離子交換介質(zhì)FF-PEI-CR，當(dāng)FFPEI-CR 的IC 值下降至430mmol/L 時(shí)，溶菌酶在介質(zhì)中的De/D0值是初始介質(zhì)FF-PEI-C970的15 倍[20]。此外，電荷密度降低導(dǎo)致De/D0值上升的現(xiàn)象也發(fā)生在陰離子交換介質(zhì)中，F(xiàn)F-PEI-R440 對(duì)BSA 的傳質(zhì)速率是FF-PEI-L740 的3 倍[17]。pMA 接枝鏈因乙醇胺中和修飾降低了電荷密度，使得接枝鏈之間的靜電排斥作用減弱，增加了接枝鏈在蛋白質(zhì)傳質(zhì)過(guò)程中的靈活性；另外，蛋白質(zhì)的吸附容量降低減弱了介質(zhì)孔道入口存在的“蛋白質(zhì)排阻”作用[29]，導(dǎo)致其傳質(zhì)速率經(jīng)乙醇胺中和修飾后明顯增加。

圖4 兩種蛋白在陽(yáng)離子交換介質(zhì)中的De/D0值

2.3 動(dòng)態(tài)結(jié)合容量

經(jīng)過(guò)乙醇胺中和修飾后，pMA 接枝型介質(zhì)的γ-球蛋白傳質(zhì)速率提升較為明顯，為了探究電荷密度變化對(duì)DBC 值的影響，測(cè)定了不同流速下γ-球蛋白在FF-pMA-320、pMA-320-R170 和pMA-320-R230 中的DBC 值，穿透曲線如圖5 所示，計(jì)算得到的DBC值如圖6所示。

圖5 不同流速下γ-球蛋白在三種陽(yáng)離子交換介質(zhì)中的歸一化穿透曲線

由圖6可以看出，隨著流速的提高，三種介質(zhì)對(duì)γ-球蛋白的DBC 值均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。在流速為150～750cm/h時(shí)，pMA-320-R170對(duì)γ-球蛋白的DBC值明顯大于其他兩種介質(zhì)，在最低流速下是FF-pMA-320 的2.8 倍。這種DBC 值隨介質(zhì)電荷密度降低而升高的現(xiàn)象與其他減電荷介質(zhì)類(lèi)似，例如流速為150cm/h 時(shí)，F(xiàn)F-PEI-R440對(duì)BSA 的DBC 值是初始介質(zhì)的兩倍[17]，流速高于150cm/h時(shí)，F(xiàn)F-pAEM513-R339對(duì)BSA的DBC值高于初始介質(zhì)FF-pAEM513[19]。由介質(zhì)對(duì)γ-球蛋白傳質(zhì)行為研究結(jié)果可知，乙醇胺中和修飾可顯著提高介質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)的傳質(zhì)速率，彌補(bǔ)了吸附容量降低對(duì)蛋白質(zhì)DBC 值帶來(lái)的不利影響，從而使介質(zhì)的DBC 值受傳質(zhì)速率的大小影響更大，這與文獻(xiàn)[30]結(jié)果相似。因此，pMA-320-R170對(duì)γ-球蛋白的DBC值在所研究的流速范圍內(nèi)高于另外兩種介質(zhì)。

圖6 不同流速下γ-球蛋白在陽(yáng)離子交換介質(zhì)上的DBC值

3 結(jié)論

通過(guò)乙醇胺中和修飾pMA 接枝型介質(zhì)FFpMA-320，降低介質(zhì)的電荷密度，得到兩種IC 值較低的介質(zhì)pMA-320-R170 和pMA-320-R230，研究電荷密度對(duì)pMA 接枝型介質(zhì)的蛋白質(zhì)吸附性能的影響，結(jié)果表明：由于電荷密度的降低導(dǎo)致蛋白質(zhì)吸附位點(diǎn)較少，介質(zhì)對(duì)溶菌酶和γ-球蛋白的吸附容量均隨電荷密度（IC 值）的降低而減少。接枝鏈之間的靜電排斥效應(yīng)隨電荷密度的降低而減弱，使得鏈的靈活性增加，蛋白質(zhì)吸附容量的降低減弱了被吸附的蛋白質(zhì)對(duì)后續(xù)蛋白質(zhì)入孔產(chǎn)生的空間位阻效應(yīng)，造成介質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)的傳質(zhì)速率隨電荷密度的減小而提高。因此，在流速為150～750cm/h時(shí)，具有最低電荷密度的介質(zhì)（pMA-320-R170）對(duì)γ-球蛋白的DBC 值最高。上述研究結(jié)果證明乙醇胺中和修飾法有助于提高pMA 接枝型介質(zhì)的蛋白質(zhì)的吸附性能（傳質(zhì)速率和動(dòng)態(tài)結(jié)合容量），為將經(jīng)過(guò)電荷中和修飾的pMA 接枝型介質(zhì)應(yīng)用于蛋白質(zhì)的實(shí)際分離純化過(guò)程提供理論依據(jù)。