景聯(lián)鵬，顧麗莉，師君麗，李增良，楊發(fā)容，李國棟

（1 昆明理工大學(xué)化學(xué)工程學(xué)院，云南 昆明 650500；2 云南省煙草農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，云南 玉溪 653100）

戊唑醇和三唑酮屬于三唑類殺菌劑，因其低毒、殺菌廣譜和活性高等特點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于小麥、蔬菜和煙草等農(nóng)作物的病蟲防治[1]。由于戊唑醇和三唑酮用量大，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不易降解，半衰期長，因此在使用過程中可能對動植物及環(huán)境造成危害，從而嚴(yán)重威脅人類健康和生態(tài)安全[2-3]，故而對農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境中戊唑醇和三唑酮的殘留分析具有十分重要的意義。

目前，檢測三唑類殺菌劑的方法主要包括液相色譜法（LC）[4]、氣相色譜法（GC）[5]、高效液相色譜法（HPLC）[6]、氣質(zhì)聯(lián)用法（GC-MS）[7]、分光光度法[8]、液質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS）[9]、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UHPLC-MS/MS）[10]等。農(nóng)產(chǎn)品成分越復(fù)雜，對低含量三唑類殺菌劑的檢測要求越高，故需探索出一種干擾小、富集能力強(qiáng)的前處理技術(shù)，以排除樣品中基質(zhì)的影響，確保檢測的準(zhǔn)確性。

分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymer,MIPs）是一種具有與目標(biāo)分子完全匹配印跡空腔的功能材料[11]。因MIPs 對模板分子具有“記憶”功能，能對其進(jìn)行特異性識別，并且制備簡單，物理化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，目前已被廣泛應(yīng)用于固相萃取[12-14]、色譜固定相[15]、藥物釋放[16]、傳感器[17-18]和催化劑[19]等領(lǐng)域。

分子印跡固相萃?。╩olecularly imprinted solid phase extraction，MISPE）作為一種高選擇性前處理技術(shù)，在針對其研究與應(yīng)用上，當(dāng)前大多局限于單模板印跡體系的研究，不能實(shí)現(xiàn)多種物質(zhì)的同時高效分離與富集。趙春娟等[20]將以三唑醇、烯唑醇和腈菌唑?yàn)槟０逯苽涞腗IPs 按質(zhì)量比為1∶1∶1混合作為固相萃取柱的填充物用于樣品的前處理，雖取得了較好的效果，但該方式也僅僅是物理復(fù)合，并未實(shí)現(xiàn)真正的化學(xué)復(fù)合，而且聚合物顆粒不均勻也會導(dǎo)致吸附不均勻。

本文在本文作者課題組前期研究工作的基礎(chǔ)上，以戊唑醇和三唑酮為雙模板分子，MAA 為功能單體，通過沉淀聚合法制備雙模板分子印跡聚合物，并將其應(yīng)用于煙葉中三唑類農(nóng)藥的殘留分析，建立煙葉中戊唑醇、三唑酮及其結(jié)構(gòu)類似物農(nóng)藥殘留的MISPE-UHPLC-MS/MS檢測方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與試劑

戊唑醇（tebuconazole, TBZ, 98%）、三唑酮（triadimefon,TDF,98%）、三唑醇（triadimenol,TDM,98%）、莠去津（atrazine, ARZ, 98%） 和西草凈（simetryn, SMT, 98%），德國Dr.Ehrenstorfer 公司；腈菌唑（myclobutanol, MYC, 98.5%），上海阿拉丁公司；乙二醇二甲基丙烯酸酯（ethylene glycol dimethacrylate，EGDMA，分析純），北京百靈威科技有限公司；偶氮二異丁腈[2,2'-azobis(2-methylpropionitrile)，AIBN，分析純]，天津光復(fù)精細(xì)化工研究所；其他試劑如甲基丙烯酸（methacrylic acid,MAA）、乙腈和冰乙酸等皆為分析純，天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

場發(fā)射掃描電子顯微鏡（SEM），Tecnai G2 TF30 STwin 型，荷蘭FEI 公司；傅里葉紅外光譜儀（FTIR），Equinox55 型，德國BRUKER公司；臺式高速離心機(jī)，TG16-WS 型，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，RE-2000A型，上海亞榮生化儀器廠；氣浴恒溫振蕩器，ZD-85型，金壇市城東新瑞儀器廠；超高效液相色譜儀，Agilent 1290 InfinityUHPLC 型，美國Agilent Technologies；質(zhì)譜儀，AB Sciex Qtrap(TM)3200 MS/MS 型，美國ABSciex，CA。

1.3 分子印跡聚合物的制備

1.3.1 功能單體的篩選

篩選步驟：①采用Gaussian view 5.0分別構(gòu)建了模板分子和4種功能單體（AA、AM、MAA、TFMAA）的分子模型，運(yùn)用Gaussian 09 軟件中B3LYP 基組的6-31G+(d,p)水平對模板分子和4 種功能單體的結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化與計(jì)算，得出各分子優(yōu)化構(gòu)象；②研究模板分子與各功能單體可能形成的復(fù)合物情況，并從氫鍵鍵長、氫鍵數(shù)目及氫鍵作用的活性位點(diǎn)分析比較模板分子與各功能單體的作用原理及作用力；③按式(1)計(jì)算模板-單體復(fù)合物的結(jié)合能。

式中，ΔEinteraction為模板分子與功能單體的結(jié)合能，kJ/mol；Ecorrected為消除了因單體基組重疊造成的能量降低后的A-B 復(fù)合物能量，kJ/mol；EBSSE為矯正能，kJ/mol；EA,bAB為A、B基組下A的能量，kJ/mol；EB,bAB為A、B基組下B的能量，kJ/mol。

1.3.2 沉淀聚合法制備雙模板MIPs

于100mL 玻璃瓶中依次加入0.1mmol TBZ、0.1mmol TDF、0.8mmol MAA和50mL乙腈，超聲溶解后通N2除氧，隨后置于氣浴恒溫振蕩器中預(yù)聚合12h；在預(yù)聚合結(jié)束后的溶液中依次加入4mmol EGDMA 和30mg AIBN，混合均勻后通N2除氧15min，然后置于60℃的氣浴恒溫振蕩器中熱聚合24h；熱聚合結(jié)束后，將樣品冷卻至室溫，再以10000r/min分離聚合物，倒掉上清液，將所得聚合物干燥至恒重后放入索氏提取器中，用甲醇-乙酸（體積比9∶1）循環(huán)洗脫聚合物，直至洗脫液中無TBZ 和TDF 為止，再用甲醇將聚合物洗滌至中性；最后將聚合物干燥至恒重，即得到TBZ-TDFMIPs。作為對照，非分子印跡聚合物（NIPs）的制備除了不加TBZ 和TDF 以外，其他步驟均與TBZTDF-MIPs的制備一致[21-22]。

1.4 MIPs吸附性能探究

1.4.1 動態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)

稱取若干份MIPs 和NIPs 各10mg 于10mL 離心管中，分別加入20mg/L的TBZ或TDF乙腈標(biāo)準(zhǔn)溶液5mL，混勻后置于室溫下分別吸附10min、30min、50min、70min、90min、110min、130min、150min和170min后過濾膜，收集濾液并用UHPLC-MS/MS檢測濾液中TBZ 或TDF 的濃度，按式(2)計(jì)算不同時間下聚合物對TBZ或TDF的吸附量（Q）。

式中，Q為MIPs 或NIPs 對TBZ 或TDF 分子的吸附容量，mg/g；C0和C分別為TBZ 或TDF-乙腈溶液的初始濃度和吸附結(jié)束后的濃度，mg/L；V為溶液的體積，L；M為MIPs或NIPs的質(zhì)量，mg。

1.4.2 靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)

稱取若干份MIPs 和NIPs 各10mg 于10mL 離心管中，分別加入5mL 不同濃度的TBZ 或TDF 乙腈標(biāo)準(zhǔn)溶液（1～80mg/L），室溫下吸附24h后過濾膜，收集濾液并用UHPLC-MS/MS 檢測濾液中TBZ 或TDF的濃度，通過式(2)計(jì)算聚合物對TBZ或TDF的吸附容量。

1.4.3 選擇性吸附實(shí)驗(yàn)

稱取若干份MIPs 和NIPs 各10mg 于10mL 離心管中，分別加入20mg/L 的不同農(nóng)藥（TBZ、MYC、TDM、TDF、SMT 和ARZ）的乙腈標(biāo)準(zhǔn)溶液5mL，混勻后置于室溫下吸附24h后過濾膜，收集濾液并用UHPLC-MS/MS 檢測濾液中TBZ、MYC、TDM、TDF、SMT和ARZ的濃度，通過式(2)計(jì)算聚合物對上述6種農(nóng)藥的吸附容量，探究聚合物的選擇性吸附性能。

1.5 分子印跡固相萃取柱的裝填及應(yīng)用

1.5.1 加標(biāo)煙葉樣品的制備

準(zhǔn)確稱取3g 干燥后的煙葉樣品分別置于20mL離心管中，添加3mL 3種濃度（0.2mg/L、0.5mg/L、1mg/L）的農(nóng)殘混標(biāo)溶液，再加入10mL 乙腈溶液，振蕩混勻后超聲提取1h，經(jīng)離心、過濾和旋蒸后用3mL乙腈復(fù)溶，即得加標(biāo)煙葉提取液。

1.5.2 分子印跡固相萃取吸附實(shí)驗(yàn)

分別取100mg TBZ-MIPs 和TBZ-TDF-MIPs 制備分子印跡固相萃?。∕ISPE）小柱，依次加入5mL水和5mL甲醇對萃取柱進(jìn)行活化后，取2mL的加標(biāo)煙葉提取液進(jìn)行上樣，待小柱充分吸附農(nóng)藥后用5mL 水對萃取柱進(jìn)行淋洗，再用10mL 甲醇-乙酸溶液（體積比9∶1）對農(nóng)殘進(jìn)行洗脫，收集洗脫液并旋蒸除去洗脫劑，再用1mL 乙腈復(fù)溶后過濾膜，供UHPLC-MS/MS分析。

1.6 UHPLC-MS/MS分析條件

色譜條件：ACQUITY UHPLC BEH-C18色譜柱（10㎝×2.1mm，1.8μm），流速0.4mL/min，檢測波長228nm，流動相A（0.1%甲酸-水溶液），流動相B（0.1%甲酸-乙腈溶液）。

質(zhì)譜條件：離子噴射電壓5500V，霧化溫度550℃，掃描方式為正離子掃描，檢測方法為多反應(yīng)檢測模式。

2 結(jié)果與討論

2.1 功能單體的種類及其與模板結(jié)合比例選擇

2.1.1 模板分子與功能單體結(jié)合位點(diǎn)分析

優(yōu)化后的模板分子與功能單體的幾何構(gòu)型及其靜電勢分布如圖1所示，根據(jù)顏色標(biāo)尺可知，顏色越藍(lán)的部位表示該位點(diǎn)電正性越強(qiáng)，易失去電子；顏色越紅的部位表示該位點(diǎn)電負(fù)性越強(qiáng)，易得到電子。理論上電正和電負(fù)性越強(qiáng)的位點(diǎn)即為形成氫鍵的潛在位點(diǎn)[23]，模板與單體的潛在位點(diǎn)情況如表1所示。

表1 TBZ與4種功能單體的潛在結(jié)合位點(diǎn)與可能結(jié)合氫鍵數(shù)

圖1 模板TBZ與單體AA、AM、MAA和TFMAA的靜電勢分布

2.1.2 模板-單體復(fù)合物構(gòu)型及其配比優(yōu)化

根據(jù)靜電勢分布圖將TBZ與各功能單體之間以氫鍵形式相連，并在B3LYP 基組的6-31G+(d,p)下對模板-單體復(fù)合物的空間構(gòu)型進(jìn)行優(yōu)化，篩除不符合條件的連接方式并再次優(yōu)化，最終復(fù)合物構(gòu)型及氫鍵鍵長如圖2所示。

圖2 TBZ與4種功能單體形成復(fù)合物的幾何結(jié)構(gòu)

基于上述復(fù)合物構(gòu)型及模板-單體配比優(yōu)化，對復(fù)合物構(gòu)型進(jìn)行能量計(jì)算，并進(jìn)行平衡校正，結(jié)果如表2所示。由表2可知，TBZ與MAA結(jié)合能最大，其次分別是AA、AM 和TFMAA，結(jié)合能ΔE越大，表明功能單體與模板分子之間的相互作用力就越強(qiáng)，所得聚合物印跡空腔的活性位點(diǎn)能量就越高，親和性和選擇性也就越強(qiáng)。因此MAA是制備TBZMIPs 的最佳功能單體，且TBZ 與MAA 結(jié)合比例為1∶3。針對三唑酮（TDF），其功能單體的篩選過程與TBZ一致，根據(jù)本文作者課題組之前的研究結(jié)果，MAA 與TDF 之間的結(jié)合能最大，且TDF 與MAA 結(jié)合比例也為1∶3[21]。為使模板分子與功能單體之間的預(yù)組裝更加充分，實(shí)際制備時常適當(dāng)增加功能單體的比例，因此，制備復(fù)合模板分子印跡聚合物的摩爾比選為TBZ∶TDF∶MAA=1∶1∶8。

表2 TBZ與4種功能單體相互作用的作用能（ΔE）和氫鍵數(shù)

2.2 聚合物的物理表征

2.2.1 微觀形貌表征

采用掃描電子顯微鏡（SEM）對MIPs 和NIPs的微觀形貌進(jìn)行表征。如圖3 所示，MIPs 和NIPs均為納米級的球形聚合物，并且微球粒徑均一，球形度高，彼此之間無粘連現(xiàn)象。另外MIPs 微球表面粗糙，存在很多孔穴，這些微孔結(jié)構(gòu)有利于MIPs對TBZ和TDF的吸附，而NIPs微球表面則比較光滑。

圖3 聚合物的場發(fā)射掃描電鏡圖

2.2.2 紅外光譜表征

為考察雙模板分子印跡聚合物是否制備成功，對兩種模板分子、MIPs 洗脫前后和NIPs 的紅外光譜進(jìn)行分析，如圖4所示。由圖可以看出，在MIPs洗脫前后以及NIPs 洗脫后的紅外譜圖中，在1732cm-1附近的吸收峰為交聯(lián)劑EGDMA中C==O振動峰，1635cm-1附近的吸收峰為EGDMA中C==C振動峰，MIPs 洗脫前后以及NIPs 洗脫后均在1157cm-1處出現(xiàn)尖銳的峰，該峰為EGDMA中O—C—O振動峰，1257cm-1處出現(xiàn)尖銳的峰，該峰為功能單體MAA中C—O振動峰，這些特征吸收峰表明聚合物制備成功。另外TBZ、TDF 和MIPs 洗脫前均在672cm-1處出現(xiàn)吸收峰，這是TBZ和TDF中的C—Cl吸收峰，而該峰未在MIPs和NIPs洗脫后的譜圖中出現(xiàn)，并且MIPs洗脫后和NIPs的譜圖中主要峰形基本一致，表明模板分子TBZ和TDF已經(jīng)被完全洗脫。

圖4 聚合物洗脫前后和TBZ、TDF的紅外光譜圖

2.3 聚合物吸附性能

2.3.1 動態(tài)吸附性能

測試了MIPs和NIPs對TBZ及TDF的吸附量（Q）隨時間的變化關(guān)系，如圖5所示。由圖5可知，MIPs對TBZ和TDF的吸附量均隨時間的延長而增加，在150min 時接近吸附平衡，表明MIPs 對TBZ 和TDF具有較快的吸附動力學(xué)。盡管NIPs 對TBZ 和TDF的吸附量隨時間的增加而緩慢增加，但是吸附量始終低于MIPs，這是因?yàn)镸IPs 表面及內(nèi)部具有與模板分子大小及結(jié)構(gòu)互補(bǔ)的三維印跡空腔，故MIPs對模板分子的吸附是化學(xué)吸附和物理吸附并存的，而NIPs對模板分子的吸附僅為物理吸附。

圖5 MIPs與NIPs的動態(tài)吸附曲線

2.3.2 靜態(tài)吸附性能及Scatchard模型分析

通過靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)考察聚合物對模板分子的吸附性能，繪制MIPs 和NIPs 對TBZ 及TDF 的靜態(tài)吸附曲線，如圖6所示。由圖中曲線走勢可知，MIPs對TBZ 或TDF 的吸附量始終高于NIPs，這是因?yàn)镸IPs 微球中含有與TBZ 或TDF 分子互補(bǔ)的三維印跡空腔，對TBZ或TDF具有記憶功能，能對其進(jìn)行特異性吸附，而NIPs 無與之互補(bǔ)的印跡空腔，僅通過物理作用吸附TBZ及TDF分子。

圖6 MIPs與NIPs的靜態(tài)吸附曲線

采用Scatchard 模型分析MIPs 對模板分子的吸附位點(diǎn)種類、解離常數(shù)以及最大吸附量[24]。Scatchard模型如式(3)所示。

式中，Qmax為結(jié)合位點(diǎn)的最大表觀結(jié)合量，mg/g；Q為MIPs對模板分子的吸附量，mg/g；C為吸附液中模板分子的平衡濃度，mg/L；K為結(jié)合位點(diǎn)的平衡解離常數(shù)，mg/L。

由圖7 可知，Q/C對Q是非線性關(guān)系，MIPs 對TBZ 及TDF 的Scatchard 曲線分成了兩部分，表明MIPs對TBZ或TDF分子的吸附是不均勻的，存在兩類吸附位點(diǎn)。原因可能是在熱聚合過程中，TBZ或TDF分子與功能單體MAA產(chǎn)生了不同的作用方式，同時自由基聚合過程的不穩(wěn)定性也導(dǎo)致MIPs 表面及內(nèi)部的印跡空腔大小和數(shù)量有所差異，而且除了模板分子的印跡作用，還存在其他共存物的非印跡作用。為研究兩類吸附位點(diǎn)的結(jié)合效能，對兩個線性部分進(jìn)行擬合，分別計(jì)算出戊唑醇與三唑酮的平衡解離常數(shù)K和飽和吸附量Qmax，結(jié)果如表3所示。

圖7 MIPs的Scatchard模型分析

表3 MIPs靜態(tài)吸附曲線的Scatchard分析及親和位點(diǎn)分布

2.3.3 選擇性吸附性能

為考察MIPs 的特異性吸附能力，選擇含TBZ、MYC、TDM 和TDF 4 種三唑類殺菌劑，以及SMT和ARZ 兩種三嗪類除草劑的標(biāo)準(zhǔn)液作為吸附液，通過平衡吸附實(shí)驗(yàn)測定MIPs對6種農(nóng)藥的吸附量，結(jié)果如圖8所示。

圖8 MIPs對6種農(nóng)藥的選擇性吸附性能

由圖8可知，MIPs對6種農(nóng)藥均有一定的吸附能力，且吸附能力由大到小依次為：TBZ、TDF、MYC、TDM、ARZ和SMT。其中MIPs對TBZ和TDF的吸附效果最好，吸附量分別達(dá)到了3.48mg/g 和3.32mg/g，對MYC和TDM的吸附容量也較高，吸附量分別為2.36mg/g和2.32mg/g，而對ARZ和SMT的吸附效果最差，吸附容量僅為1.44mg/g和1.08mg/g。這是因?yàn)镸IPs 內(nèi)部存在與TBZ 和TDF 相匹配的印跡空腔，表現(xiàn)出對TBZ 和TDF 特異性吸附，而MYC 和TDM 分子結(jié)構(gòu)與模板分子結(jié)構(gòu)類似，但SMT 和ART 的分子結(jié)構(gòu)與模板分子結(jié)構(gòu)差異大，故MIPs表現(xiàn)出良好的組選擇性以及特異選擇性。

2.4 戊唑醇-三唑酮-MISPE-UHPLC-MS/MS 檢測煙葉中農(nóng)藥殘留

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別以6 種農(nóng)藥（TBZ、TDF、TDM、MYC、ARZ和SMT）的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如表4所示。由表可知，在0.0005～0.1mg/L 濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2為0.9991～1.0000。

表4 6種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)

2.4.2 戊唑醇-三唑酮-MISPE對樣品的凈化能力

為評價(jià)戊唑醇-三唑酮-MISPE柱對煙葉樣品中農(nóng)藥的凈化能力，以C18-SPE柱和HLB-SPE柱作為對比，將加標(biāo)煙葉用3種固相萃取柱進(jìn)行前處理，然后用UHPLC-MS/MS檢測，對應(yīng)色譜圖如圖9所示。

圖9 戊唑醇-三唑酮-MISPE對樣品的凈化能力

由圖9 可知，TBZ-TDF-MISPE 柱、C18-SPE 柱和HLB-SPE柱對煙葉樣品均有一定的凈化能力，6種農(nóng)藥的峰都能很好地分離開來，但3種固相萃取柱的凈化能力差異較大。其中TBZ-TDF-MISPE 柱凈化效果最好，C18-SPE柱和HLB-SPE柱凈化效果次之，因?yàn)門BZ-TDF-MISPE 柱能特異性吸附目標(biāo)分子，而C18-SPE柱和HLB-SPE柱因其無選擇性，通過物理作用同時吸附目標(biāo)分子和其他雜質(zhì)。

2.4.3 回收率與精密度

為考察TBZ-TDF-MISPE-UHPLC-MS/MS方法的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，分別在0.2μg/g、0.5μg/g和1μg/g加標(biāo)水平下進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表5所示。

由表5可知，樣品中TBZ、TDF、TDM和MYC的回收率在72%～110.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.38%～7.92%（n=3），而ARZ和SMT的回收率僅為4.35%～15.8%，說明該法選擇性強(qiáng)，回收率高，精密度好，能滿足煙葉中TBZ、TDF、MYC 和TDM的檢測要求。

表5 固相萃取的加標(biāo)回收率和精密度（n=3）

2.4.4 單模板和雙模板MISPE柱分離效果對比

TBZ-MISPE柱、TDF-MISPE柱[21]和TBZ-TDFMISPE 柱對戊唑醇和三唑酮的回收率如表6 所示。由表6 可知，TBZ-MISPE 柱在加標(biāo)水平（0.2μg/g、0.5μg/g 和1μg/g）下對TBZ 和TDF 兩者的平均回收率差異明顯，對TBZ達(dá)到了110.16%，而對TDF僅為45.3%；TDF-MISPE 柱在加標(biāo)水平（0.01μg/g、0.05μg/g、0.1μg/g和0.5μg/g）下對TBZ和TDF的平均回收率分別為90.02%和98.27%，二者差異較??；TBZ-TDF-MISPE 柱對TBZ 和TDF 的平均回收率分別為103.32%、99.42%，二者接近。通過對比3種MISPE柱對戊唑醇和三唑酮的分離效果，可以得出雙模板MISPE柱的分離效果優(yōu)于單模板MISPE柱，雙模板MISPE 柱更有利于實(shí)現(xiàn)同時且高效地對樣品中農(nóng)殘（TBZ和TDF）的分離與富集。

表6 單模板和雙模板MISPE柱分離效果對比

3 結(jié)論

以戊唑醇和三唑酮作為雙模板，通過沉淀聚合法制備了具有良好吸附性能的雙模板MIPs。動態(tài)吸附結(jié)果顯示MIPs 的吸附容量在2.5h 時即可接近飽和；靜態(tài)吸附及Scatchard 分析結(jié)果表明，MIPs對模板分子具有較強(qiáng)的吸附能力，并且MIPs 的吸附位點(diǎn)不均一，存在高低兩類親和位點(diǎn)；選擇性吸附結(jié)果表明MIPs 不僅對戊唑醇和三唑酮具有很好的吸附能力，也對其結(jié)構(gòu)類似物腈菌唑和三唑醇具有一定的吸附能力，而對莠去津和西草凈吸附能力很弱，表現(xiàn)出良好的特異選擇性和組選擇性。以雙模板MIPs 作為固相萃取柱填料制備MISPE 柱，建立了戊唑醇-三唑酮-MISPE-UHPLC-MS/MS 檢測煙葉中4種殺菌劑的方法，并與單模板MISPE柱進(jìn)行對比。結(jié)果表明，戊唑醇-三唑酮-MISPE 柱對三唑類殺菌劑的富集能力優(yōu)于單模板MISPE 柱，在加標(biāo)水平（0.2μg/g、0.5μg/g、1μg/g）下的平均回收率為72%～110.3%，RSD 為2.38%～7.92%，滿足煙葉中三唑類殺菌劑殘留分析的要求。另外，基于該MIPs良好的吸附性能，所建立的MISPE-UHPLCMS/MS方法也可以應(yīng)用于食品、環(huán)境中相應(yīng)三唑類殺菌劑殘留的檢測。