王永生 韓婉青 張俊偉
急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是由于心肌細(xì)胞持續(xù)性缺血引起的心肌細(xì)胞發(fā)生損傷、壞死的疾病,早期準(zhǔn)確診斷AMI對(duì)降低不良心血管事件至關(guān)重要[1]。臨床AMI診斷依據(jù)主要是心肌損傷標(biāo)志物及心臟超聲心動(dòng)彩超,但肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)及肌鈣蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)檢測靈敏度易受檢測條件的影響,造成漏診以及誤診。近年來發(fā)現(xiàn),長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在心血管疾病中發(fā)揮重要作用[2]。lncRNA p21是p53依賴型轉(zhuǎn)錄基因,在調(diào)控組織代謝、病理過程中發(fā)揮重要作用[3]。李昌等[4]研究顯示,腦動(dòng)脈粥樣硬化患者血清lncRNA p21表達(dá)水平明顯下降,并參與腦動(dòng)脈粥樣硬化的病理過程發(fā)生?;谝酝芯繄?bào)道,本研究探討AMI患者血清lncRNA p21表達(dá)水平及臨床意義。
1.1 一般資料 選取河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院2019年1月至2021年1月收治92例AMI患者(AMI組),其中男性54例,女性38例,年齡38~80歲,平均(59.86±10.81)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合急性ST段抬高型AMI的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5];②接受12導(dǎo)聯(lián)心電圖、二維超聲心動(dòng)圖及冠狀動(dòng)脈(冠脈)造影;③在發(fā)病6 h內(nèi)入院,血清心肌標(biāo)志物水平發(fā)生改變。排除標(biāo)準(zhǔn):①有血運(yùn)重建病史、原發(fā)性心肌病、結(jié)構(gòu)性心臟病、心源性休克;患有嚴(yán)重肝、腎功能異常、惡性腫瘤;②合并急慢性感染。同期選擇本院體檢健康者92例為對(duì)照組,其中男性52例,女性40例,年齡38~79歲,平均(59.96±10.52)歲,兩組性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。本研究所有受試者知情同意,通過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批準(zhǔn)文號(hào):20190217),符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。
1.2 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)收集 收集患者入院后24 h內(nèi)常規(guī)體檢、血常規(guī)、血生化數(shù)據(jù)。血生化包括:cTnI、CK-MB。血常規(guī)包括:三酰甘油(triglyceride,TG)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)。cTnI、CK-MB水平采用DXI800全自動(dòng)免疫分析儀(美國貝克曼庫爾特公司)檢測。HDL-C、LDL-C、TG、TC水平采用7170A全自動(dòng)生化分析儀(日本日立公司)測定。
1.3 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測lncRNA p21表達(dá) 采集AMI患者入院12 h內(nèi)、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈植入術(shù)(percutaneous coronary intervention,PCI)治療后3天及健康者體檢當(dāng)天靜脈血4~5 mL,離心,留血清,用RNA提取試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)提取血清總RNA,用NanoDrop 2000分光光度計(jì)(美國Thermo Scientific公司)檢測RNA濃度,用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本Takara公司)反轉(zhuǎn)錄得到cDNA。用7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國ABI公司)對(duì)lncRNA p21進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng),以GAPDH為內(nèi)參。引物由上海生工合成。lncRNA p21正向引物5’-CCCGGGCTTGTCTTTTGTT-3’,反向引物5’-GAGTGGGTGGCTCACTCTTCTC-3’;內(nèi)參GAPDH正向引物5’-TGAAGCAGGCATCTGAGGG-3’,反向引物5’-CGAAGCTGGAAGAGTGGCAG-3’。反應(yīng)條件:95 ℃,3 min;95 ℃,30 s;61 ℃,30 s;72 ℃,40 s;38個(gè)循環(huán)。對(duì)lncRNA p21相對(duì)表達(dá)量用2-ΔΔCT法計(jì)算。
1.4 冠脈造影檢查 由2名有經(jīng)驗(yàn)、高年資醫(yī)師行常規(guī)冠狀動(dòng)脈造影(coronary angiography,CAG)檢查,采用Allura Xper FD20大平板血管造影系統(tǒng)(荷蘭飛利浦公司)定量分析冠脈病變支數(shù)和狹窄程度。冠脈病變程度根據(jù)Gensini評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)價(jià)[6],輕度病變?yōu)?~30分,中度病變?yōu)?1~60分,重度病變?yōu)?60分,根據(jù)Gensini評(píng)分將患者分為輕度病變組(n=29)、中度病變組(n=43)和重度病變組(n=20)。
1.5 隨訪 所有患者在PCI術(shù)后隨訪24個(gè)月,收集患者M(jìn)ACE發(fā)生情況及發(fā)生時(shí)間,將患者分為心血管不良事件(major adverse cardiovascular events,MACE)組(n=22)和非MACE組(n=70)。MACE指發(fā)生再發(fā)心肌梗死、不穩(wěn)定型心絞痛、惡性心律失常、心力衰竭、支架內(nèi)血栓形成、靶血管再次血運(yùn)重建及全因死亡[7]。隨訪方式:電話或復(fù)診。
2.1 兩組對(duì)象臨床資料比較 兩組對(duì)象年齡、性別、糖尿病史比例、高血壓史比例、高脂血癥史比例、HDL-C、LDL-C、TC、TG水平比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與對(duì)照組相比,AMI組血清CK-MB、cTnI水平較高(P<0.05)。見表1。
表1 兩組對(duì)象臨床資料比較
2.2 兩組對(duì)象血清lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平比較 與治療前相比,AMI組治療后血清lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平較高(P<0.05)。與對(duì)照組相比,AMI組治療前血清lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平較低(P<0.05),兩組治療前后差值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。
表2 兩組對(duì)象血清lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平比較
2.3 不同冠脈病變嚴(yán)重程度AMI患者lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平及CK-MB、cTnI水平比較 與輕度病變組相比,中度病變組、重度病變組血清lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平較低(P<0.05),CK-MB、cTnI水平較高(P<0.05);與中度病變組相比,重度病變組血清lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平較低(P<0.05),CK-MB、cTnI水平較高(P<0.05)。見表3。
表3 AMI患者lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平及CK-MB、cTnI水平比較
2.4 AMI患者lncRNA p21表達(dá)水平與CK-MB、cTnI水平相關(guān)性分析 Pearson分析顯示,AMI患者血清lncRNA p21水平與cTnI、CK-MB水平均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.778,r=-0.737,P<0.05)。見圖1、2。
圖1 AMI患者血清lncRNA p21表達(dá)水平與cTnI水平的散點(diǎn)圖(n=92)
圖2 AMI患者血清lncRNA p21表達(dá)水平與CK-MB水平的散點(diǎn)圖(n=92)
2.5 lncRNA p21表達(dá)水平聯(lián)合cTnI、CK-MB對(duì)AMI的預(yù)測價(jià)值 以lncRNA p21表達(dá)水平、cTnI、CK-MB血清水平為檢驗(yàn)表量,以是否患AMI為狀態(tài)變量繪制ROC曲線,結(jié)果顯示,lncRNA p21水平預(yù)測AMI的曲線下面積(area under the curve,AUC)為0.861(95%CI:0.808~0.914),lncRNA p21相對(duì)表達(dá)量最佳截?cái)嘀禐?.80,其靈敏度、特異度分別為70.70%、89.10%;lncRNA p21聯(lián)合cTnI、CK-MB預(yù)測AMI的AUC為0.956(95%CI:0.928~0.983),其靈敏度、特異度分別為89.10%、94.60%。見圖3。
2.6 AMI患者治療前、后血清lncRNA p21表達(dá)水平與AMI患者預(yù)后的關(guān)系 與非MACE組相比,MACE組治療前血清lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平較低(P<0.05),兩組治療后lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平及兩組治療前后差值比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。
圖3 lncRNA p21表達(dá)水平聯(lián)合cTnI、CK-MB預(yù)測AMI的ROC曲線
表4 兩組血清lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平比較
AMI發(fā)病主要是在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化基礎(chǔ)上,冠狀動(dòng)脈被形成的血栓部分或完全堵塞,導(dǎo)致心肌細(xì)胞血液供應(yīng)降低或暫停,誘發(fā)缺血性心肌細(xì)胞壞死[8]。AMI患者主要臨床癥狀為體溫升高、胸骨后持續(xù)劇烈性疼痛,嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)心律失常、休克等癥狀。有學(xué)者[9]發(fā)現(xiàn),早診斷、早治療AMI,可明顯減少患者術(shù)后并發(fā)癥及改善預(yù)后。目前,診斷AMI的方法較多,其中血清心肌細(xì)胞損傷標(biāo)志物cTnI、CK-MB是常用的心肌損傷指標(biāo)[10]。當(dāng)心肌細(xì)胞受損傷后,心肌細(xì)胞會(huì)分泌大量cTnI、CK-MB,導(dǎo)致AMI患者血清cTnI、CK-MB水平迅速升高[11]。本研究發(fā)現(xiàn),輕度病變組、中度病變組和重度病變組血清CK-MB、cTnI水平依次升高,但臨床上僅依靠檢測cTnI、CK-MB水平診斷AMI,可能造成誤診、漏診。
lncRNA是長度大于200個(gè)核苷酸的非編碼RNA,可調(diào)控轉(zhuǎn)錄基因表達(dá)、多種生物學(xué)過程。據(jù)報(bào)道[12],lncRNA對(duì)機(jī)體血管內(nèi)皮功能、免疫炎癥反應(yīng)、血管新生等都有調(diào)控作用。lncRNA可通過影響平滑肌細(xì)胞增殖、遷移及凋亡等而影響動(dòng)脈粥樣硬化[13]。lncRNA p21是一種細(xì)胞增殖、凋亡的調(diào)控因子及p53依賴性細(xì)胞凋亡的基因,影響各種疾病的發(fā)生、發(fā)展[14]。p21是常見的抑癌基因,常在腫瘤細(xì)胞G0/G1期發(fā)揮作用,通過組織細(xì)胞周期而減少DNA復(fù)制[15]。以往研究[16-17]證實(shí),過表達(dá)LncRNA p21可抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移,與Wnt/β-catenin信號(hào)通路、Notch信號(hào)通路有關(guān)。近年來有研究[18-19]顯示,lncRNA p21可在動(dòng)脈粥樣硬化疾病中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。Wu等[20]研究顯示,lncRNA p21表達(dá)水平在ApoE-/-小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中下降,進(jìn)一步探索發(fā)現(xiàn),過表達(dá)lncRNA p21可通過增強(qiáng)p53基因表達(dá)抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖并促進(jìn)凋亡。本研究發(fā)現(xiàn),AMI組血清lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平較對(duì)照組低,輕度病變組、中度病變組和重度病變組血清血清lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平依次降低,提示lncRNA p21可能參與AMI發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程。lncRNA p21可能通過影響血管平滑肌細(xì)胞增殖、凋亡而影響AMI進(jìn)程。本研究ROC曲線顯示,lncRNA p21水平預(yù)測AMI的AUC為0.861(95%CI:0.808~0.914),其靈敏度、特異度分別為70.70%、89.10%,提示lncRNA p21對(duì)AMI具有一定診斷價(jià)值。本研究發(fā)現(xiàn)AMI患者血清lncRNA p21水平與cTnI、CK-MB水平均呈負(fù)相關(guān),且lncRNA p21聯(lián)合cTnI、CK-MB預(yù)測AMI的AUC為0.956(95%CI:0.928~0.983),其靈敏度、特異度分別為89.10%、94.60%,提示lncRNA p21可能與cTnI、CK-MB共同影響AMI病情進(jìn)展,lncRNA p21聯(lián)合cTnI、CK-MB可提高臨床上單獨(dú)用lncRNA p21或cTnI、CK-MB預(yù)估AMI發(fā)生的價(jià)值。與非MACE組相比,MACE組治療前血清lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平較低,提示治療前l(fā)ncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平可能與AMI患者PCI治療后MACE有關(guān)。本研究顯示,治療后血清lncRNA p21相對(duì)表達(dá)水平在MACE組與非MACE組間差異不顯著,可能是由于本研究樣本數(shù)量有限,研究區(qū)域單一。
綜上所述,AMI患者血清中l(wèi)ncRNA p21表達(dá)水平下降,但是lncRNA p21在AMI中具體作用機(jī)制在本研究中尚未探究,仍需深入探索。