李瓊

（山西省食品研究所（有限公司），山西太原 030024）

糖類是自然界最多的有機(jī)化合物，是食品中的重要風(fēng)味成分和營(yíng)養(yǎng)成分，其種類和含量是評(píng)價(jià)食品品質(zhì)的重要質(zhì)量指標(biāo)。在食品加工工藝中，糖類對(duì)改變食品的形態(tài)、組織結(jié)構(gòu)、物化性質(zhì)以及色、香、味等感官指標(biāo)起著十分重要的作用。因此，準(zhǔn)確測(cè)定食品中各種糖的含量對(duì)食品品質(zhì)改良、加工儲(chǔ)藏技術(shù)選擇、新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)等都具有重要意義。

隨著檢測(cè)技術(shù)的蓬勃發(fā)展，越來(lái)越多的檢測(cè)手段被運(yùn)用到糖類檢測(cè)中，而高效液相色譜法因其高效、高靈敏度、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于產(chǎn)品中多種糖含量的測(cè)定中。我國(guó)現(xiàn)行的相關(guān)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)有GB 5009.8—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測(cè)定》，其第一法高效液相色譜-示差折光檢測(cè)（HPLC-RID）法適用于谷物類、乳制品、果蔬制品、蜂蜜、糖漿、飲料等食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖的測(cè)定。為了獲得穩(wěn)定、可靠和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，本試驗(yàn)從校準(zhǔn)曲線、檢出限、正確度、精密度等方面對(duì)該方法在本實(shí)驗(yàn)室的適用性進(jìn)行了驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 材料和儀器

樣品：沙棘汁飲料、蒙牛酸酸乳、麗美思紅棗濃漿、麗和堂蜂蜜、娃哈哈雪碧、娃哈哈雪碧纖維+、麻花，均購(gòu)于當(dāng)?shù)爻小?/p>

試劑：乙腈，色譜純；乙酸鋅、亞鐵氰化鉀，分析純；石油醚，沸程30 ℃～60 ℃。

標(biāo)準(zhǔn)品：果糖，CAS 號(hào):57-48-7，純度99.7%；葡萄糖，CAS號(hào):50-99-7，純度99.7%；蔗糖，CAS號(hào):57-50-1，純度99.7%；麥芽糖，CAS 號(hào):69-79-4，純度94.4%；乳糖，CAS 號(hào):63-42-3，純度99.5%。

儀器：1260 液相色譜儀，帶示差折光檢測(cè)器，配氨基色譜柱（柱長(zhǎng)250 mm，內(nèi)徑4.6 mm，膜厚5μm），安捷倫科技有限公司；KS-5200DE 液晶超聲波清洗器，昆山潔力美超聲儀器有限公司；BSA224S 電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；AXTGL16M 臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，鹽城市安信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品制備

1.2.1.1 沙棘汁飲料、酸酸乳、紅棗濃漿

稱混勻后的試樣5 g（精確到0.001 g）于100 mL容量瓶中，加水約50 mL 溶解，緩慢加入乙酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液各5 mL，定容至刻度，超聲30 min，過(guò)濾，濾液用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾至樣品瓶，上機(jī)測(cè)定。

1.2.1.2 蜂蜜

稱取混勻后的試樣1 g（精確到0.001 g）于50 mL容量瓶，加水定容至50 mL，充分搖勻，過(guò)濾，濾液用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾至樣品瓶，上機(jī)測(cè)定。

1.2.1.3 雪碧

將混勻后試樣倒入蒸發(fā)皿中，在水浴上微熱攪拌去除二氧化碳，吸取50.0 mL 移入100 mL 容量瓶中，緩慢加入乙酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液各5 mL，定容至刻度，搖勻，靜置30 min，過(guò)濾，濾液用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾至樣品瓶，上機(jī)測(cè)定。

1.2.1.4 麻花

稱取10 g（精確到0.001 g）粉碎均勻的試樣于100 mL 具塞離心管中，加入50 mL 石油醚，振搖2 min，1 800 r/min 離心15 min，去除石油醚后重復(fù)以上步驟至去除大部分脂肪。蒸發(fā)殘留的石油醚，將樣品轉(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中，用50 mL 水分2 次沖洗離心管，洗液并入100 mL 容量瓶中，緩慢加入乙酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液各5 mL，定容至刻度，超聲30 min，過(guò)濾，濾液用0.45μm 微孔濾膜過(guò)濾至樣品瓶，上機(jī)測(cè)定。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別稱取上述經(jīng)過(guò)96 ℃干燥2 h 的果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖各5 g，加水定容于250 mL，配制成質(zhì)量濃度20 mg/mL 糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液，分別稀釋成質(zhì)量濃度1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、4.0 mg/mL、6.0 mg/mL、10.0 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。

1.2.3 儀器條件

流動(dòng)相：乙腈+水=70+30（體積比）；流動(dòng)相流速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：20μL；示差折光檢測(cè)器條件：溫度40 ℃。

1.2.4 試驗(yàn)方法

將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并對(duì)校準(zhǔn)曲線進(jìn)行分析。分別測(cè)定沙棘汁飲料、酸酸乳、紅棗濃漿、麻花等樣品中的果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖，選出合適的樣品進(jìn)行加標(biāo)回收、精密度、重復(fù)性等驗(yàn)證試驗(yàn)，并對(duì)測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 校準(zhǔn)曲線

果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖標(biāo)準(zhǔn)系列線性方程及相關(guān)系數(shù)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 線性方程及相關(guān)系數(shù)

由表1 可知，在質(zhì)量濃度1.0 mg/mL～10 mg/mL范圍內(nèi)，5 種糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)均＞0.99，滿足GB/T 27417—2017《合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》中校準(zhǔn)曲線的要求。

2.2 樣品測(cè)定結(jié)果

在相同的液相色譜條件下，分別將制備好的試樣溶液注入高效液相色譜儀中，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖測(cè)定結(jié)果

2.3 回收率試驗(yàn)

以雪碧纖維素+為檢測(cè)對(duì)象，準(zhǔn)確吸取50.00 mL樣品9 份，分別加入糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液（其中果糖、麥芽糖質(zhì)量濃度20.6 mg/mL、葡萄糖蔗糖20.0 mg/mL、乳糖20.80 mg/mL）3.0 mL、20.0 mL、40.0 mL，進(jìn)行3 組回收率試驗(yàn)，每組3 份，按1.2.1.3 處理后進(jìn)行測(cè)定。分別計(jì)算果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖不同添加水平的平均回收率，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 方法回收率試驗(yàn)結(jié)果

由表3可知，3個(gè)添加水平果糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖的含量均＞100 mg/kg，回收率均在95.83%～104.75%范圍內(nèi)，回收率符合GB/T 27417—2017《合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》中回收率的要求，即被測(cè)組分含量＞100 mg/kg，回收率范圍為95%～105%，表明該方法回收率良好，能滿足實(shí)驗(yàn)室分析檢測(cè)的要求。

2.4 精密度試驗(yàn)

以雪碧纖維素+為檢測(cè)對(duì)象，準(zhǔn)確吸取50.0 mL樣品3 份，分別加入質(zhì)量濃度為20.0 mg/mL 的糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液3.0 mL、20.0 mL、40.0 mL，按1.2.1.3 處理后進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)濃度水平重復(fù)測(cè)定6 次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果見(jiàn)下頁(yè)表4。

表4 方法的精密度試驗(yàn)

由表4 可知，該方法在低、中、高3 個(gè)添加水平5 種糖測(cè)定結(jié)果的RSD范圍分別為2.45%～2.61%、0.94%～1.13%、0.62%～1.00%，滿足GB/T 27417—2017《合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》中精密度的要求，即被測(cè)組分含量為0.1%～1%范圍內(nèi)，RSD＜3.8%；被測(cè)組分含量在1%～10%范圍內(nèi)，RSD＜2.7%。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

以雪碧纖維素+為檢測(cè)對(duì)象，準(zhǔn)確移取50 mL樣品6 份，各加入糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液10.0 mL，按1.2.1.3 處理，測(cè)定其重復(fù)性，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），方法的重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。

由表5 結(jié)果可知，該方法重復(fù)性良好，RSD為1.01%～1.99%，符合GB/T 27417—2017《合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》中精密度的要求。

表5 方法的重復(fù)性試驗(yàn)

2.6 方法檢出限

根據(jù)GB 5009.8—2016 中檢出限要求，以雪碧纖維素+為檢測(cè)對(duì)象，準(zhǔn)確吸取50.00 mL 樣品2份，分別加入1mL 質(zhì)量濃度為20.0 mg/mL 的糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液，按1.2.1.3 處理后上機(jī)測(cè)定，果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測(cè)定結(jié)果分別為0.050 g/100 mL、0.080 g/100 mL、0.042 g/100 mL、0.040 g/100 mL、0.050 g/100 mL，均有結(jié)果檢出，表明能滿足標(biāo)準(zhǔn)中檢出限的要求。

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，校準(zhǔn)曲線在1.0 mg/mL～10 mg/mL范圍內(nèi)線性良好，果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的線性方程分別為y=164 343.957 97x-3 536.278 98、y=140 125.076 95x+9 569.939 39、y=173 951.655 64x-456.633 10、y=131 176.391 06x+2 527.364 22、y=104 646.710 56x-1 114.805 84，相關(guān)系數(shù)分別為0.999 99、0.999 50、1.000 00、0.999 72、0.999 80；加標(biāo)回收率為95.83%～104.75%，精密度試驗(yàn)在低、中、高3 個(gè)添加水平5 種糖測(cè)定結(jié)果的RSD范圍分別為2.45%～2.61%、0.94%～1.13%、0.62%～1.00%，重復(fù)性試驗(yàn)RSD為1.01%～1.99%，驗(yàn)證結(jié)果滿足GB/T 27417—2017《合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》中相關(guān)要求。該方法線性良好、易操作、重現(xiàn)性良好、測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確，能夠滿足實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)需求。