魏玉婷,朱田田,蘇明莉,賈靜,嚴(yán)興科

(甘肅中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院,蘭州 730000)

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一種病情進(jìn)行性加重的大腦神經(jīng)退行性疾病,嚴(yán)重影響著老年群體的身心健康和生活質(zhì)量[1-2]。調(diào)查顯示,我國(guó)AD 患者已超過(guò)1000 萬(wàn)[3],占全球病例總數(shù)的25%[4]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為各腦區(qū)不同程度的萎縮、細(xì)胞外間隙β 淀粉樣蛋白(amyloid beta protein,Aβ)沉積形成的老年斑(senile plaque,SP)及細(xì)胞內(nèi)Tau 蛋白磷酸化引起的神經(jīng)元纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles,NFTs)是AD 的主要病理特征[5-7]。目前,AD 的確切病因及發(fā)病機(jī)制尚無(wú)定論,國(guó)內(nèi)外暫無(wú)特效治療手段,故建立具備AD 行為學(xué)表現(xiàn)、病理學(xué)特征的動(dòng)物模型對(duì)闡明該病的病理機(jī)制及新藥研發(fā)等具有重要的意義。

近年來(lái),常用的AD 動(dòng)物模型包括以自然衰老、快速老化(SAM 小鼠)、轉(zhuǎn)基因?yàn)榇淼南忍煨訟D模型,這類模型能較為全面的模擬AD 患者的行為學(xué)、生化及病理學(xué)改變特征[8],但同時(shí)因自然衰老模型需將大小鼠維持飼養(yǎng)至18～24 月齡,建模時(shí)間長(zhǎng),且隨著老鼠逐漸進(jìn)入老齡狀態(tài),自身狀態(tài)隨之變差,增加了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物死亡的概率[9];快速老化模型屬近交系鼠群,其繁殖能力較差,來(lái)源較局限;轉(zhuǎn)基因模型價(jià)格昂貴等,在一定程度上限制了各模型的使用范圍。此外,也有通過(guò)物理或化學(xué)方法構(gòu)建的后天性AD 模型,如損傷膽堿能系統(tǒng)、注射神經(jīng)毒性藥物等,但這些單一的模型復(fù)制方法,只能從某一角度反映AD 的病理機(jī)制,未能較為全面的呈現(xiàn)出AD 多病理改變的特征。近年來(lái),復(fù)合式造模法因可模擬AD 多因素致病的特點(diǎn),成為當(dāng)前AD 動(dòng)物模型研究的熱點(diǎn)。其中以D-半乳糖(D-galactose,D-gal)誘導(dǎo)的衰老模型為基礎(chǔ)配合具有神經(jīng)毒性的藥物共同制備的AD 動(dòng)物模型最為常見(jiàn)。本文從行為學(xué)及病理學(xué)改變角度對(duì)D-gal 及其結(jié)合其他藥物制備的后天性AD 模型進(jìn)行了總結(jié)和評(píng)價(jià),以期為該疾病今后的深入研究提供參考。

1 單純D-gal 誘導(dǎo)的AD 動(dòng)物模型

1.1 D-gal 誘發(fā)衰老的機(jī)理

研究表明,長(zhǎng)期服用D-gal,會(huì)導(dǎo)致嚙齒類動(dòng)物體內(nèi)代謝異常,氧化應(yīng)激增強(qiáng),神經(jīng)元數(shù)量減少及結(jié)構(gòu)損傷[10-12],多用于制備大腦老化和抗衰老藥理研究的動(dòng)物模型[13-14]。D-gal 誘發(fā)衰老的主要機(jī)制為長(zhǎng)期大量注射該物質(zhì)能使體內(nèi)產(chǎn)生過(guò)多的活性氧(reactive oxygen species,ROS)[15],造成各器官抗氧化酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、過(guò)氧化氫酶(catalase,CAT)等活性降低,導(dǎo)致機(jī)體對(duì)自由基的清除能力下降,體內(nèi)自由基的大量堆積破壞了細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能,使得機(jī)體多器官、多系統(tǒng)功能減退[16-17]。此外,D-gal 致衰老的機(jī)制也與免疫缺陷、炎癥反應(yīng)、線粒體功能障礙、端?？s短等相關(guān)[18-19]。

1.2 D-gal 復(fù)制AD 動(dòng)物模型

研究發(fā)現(xiàn),D-gal 誘導(dǎo)的動(dòng)物模型除衰老外,還會(huì)出現(xiàn)認(rèn)知、記憶障礙的行為學(xué)表現(xiàn)及膽堿能神經(jīng)元減少、Aβ 免疫反應(yīng)物的聚集等病理變化[20]。單獨(dú)使用D-gal 制備的AD 動(dòng)物模型,用藥劑量在100～200 mg/kg,造模周期約為6～12 周。

(1)調(diào)控Aβ、Tau 蛋白的表達(dá),破壞神經(jīng)元結(jié)構(gòu)

D-gal 干預(yù)可造成Aβ、Tau 蛋白的異常表達(dá)、神經(jīng)元損傷。Yu 等[21]觀察了D-gal 對(duì)大鼠的影響。經(jīng)Morris 水迷宮測(cè)試,發(fā)現(xiàn)模型大鼠逃避潛伏期延長(zhǎng)、目標(biāo)象限停留時(shí)間減少,同時(shí)出現(xiàn)海馬CA1 區(qū)樹(shù)突棘密度降低,Tau 蛋白過(guò)度磷酸化水平升高,突觸相關(guān)蛋白表達(dá)下降、細(xì)胞自噬活性異常的病理改變。杜艷軍等[22]發(fā)現(xiàn),D-gal 會(huì)造成海馬區(qū)突觸損傷、神經(jīng)元丟失及Aβ 的高表達(dá),但未明確指出是否形成SP。鄭清等[23]的研究證實(shí),D-gal 干預(yù)后的大鼠興奮性降低、探究及認(rèn)知功能減退,其海馬區(qū)突觸數(shù)量減少,雙螺旋細(xì)絲蛋白-1(PHF-1)沉積,而PHF 是NFTs 的主要成分之一。Liang 等[24]的研究表明D-gal 長(zhǎng)期刺激會(huì)造成海馬區(qū)Aβ 蛋白的沉積。

(2)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)

D-gal 復(fù)制的AD 動(dòng)物模型表現(xiàn)出機(jī)體氧化應(yīng)激及中樞炎癥反應(yīng)的病理改變。Budni 等[25-26]研究發(fā)現(xiàn),D-gal 灌胃4 周后,大鼠出現(xiàn)習(xí)慣記憶及自發(fā)探索功能減退,6 周后表現(xiàn)出空間記憶障礙,其前額葉皮質(zhì)和海馬體中線粒體呼吸鏈復(fù)合物的活性增加,促使機(jī)體產(chǎn)生大量的ROS,出現(xiàn)過(guò)氧化反應(yīng),證實(shí)了氧化損傷與AD 模型認(rèn)知障礙的相關(guān)性,并指出線粒體能量代謝的異?？赡苁且饳C(jī)體氧化損傷造成AD 的分子機(jī)制之一。Ali 等[27]的研究也明確了這種模型復(fù)制方法會(huì)損傷白化小鼠的空間學(xué)習(xí)及短時(shí)記憶功能,誘導(dǎo)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。此外,該研究也指出D-gal 干預(yù)會(huì)刺激促炎因子如腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)等的釋放,誘發(fā)或加重機(jī)體的炎癥反應(yīng)。Rehman 等[28]發(fā)現(xiàn)D-gal 復(fù)制的AD 模型,具備學(xué)習(xí)、記憶受損,運(yùn)動(dòng)遲緩的行為學(xué)改變,同時(shí)也能表現(xiàn)出中樞炎癥反應(yīng)、氧化損傷等病理改變。

此外,He 等[29]的研究表明D-gal 復(fù)制的AD 模型動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能的減退可能與其損害腸道菌群,增強(qiáng)促炎調(diào)控通路活性,誘發(fā)中樞炎癥反應(yīng),即與腸道微生物-腸-腦軸的失調(diào)密切相關(guān)。而Mansour 等[30]研究發(fā)現(xiàn),去除雌性大鼠雙側(cè)卵巢結(jié)合D-gal 腹腔注射后,大鼠也會(huì)出現(xiàn)空間學(xué)習(xí)記憶及自發(fā)探索功能的障礙,其機(jī)制可能與該造模方法誘導(dǎo)腦組織中Aβ 沉積、Tau 蛋白過(guò)度磷酸化;增加NOX-1、TNF-α 等炎癥因子的表達(dá);通過(guò)提高M(jìn)PC-1和GluR II 的含量引起興奮性神經(jīng)毒性作用以及調(diào)控PI3K/Akt/mTOR 信號(hào)通路的活性,抑制細(xì)胞自噬等相關(guān)。提示機(jī)體雌激素含量的改變也是導(dǎo)致AD 發(fā)生的可能原因。

2 D-gal 為基礎(chǔ)的復(fù)合式AD 動(dòng)物模型

除上述單獨(dú)使用D-gal 建立AD 動(dòng)物模型外,也有研究在D-gal 誘導(dǎo)動(dòng)物衰老的基礎(chǔ)上,配合具有神經(jīng)毒性的藥物采用復(fù)合式方法制備AD 動(dòng)物模型,主要包括D-gal 聯(lián)合Aβ 類寡聚體、D-gal 聯(lián)合三氯化鋁(AlCl3)、D-gal 聯(lián)合亞硝酸鈉(NaNO2)。

2.1 D-gal 聯(lián)合Aβ 類寡聚體

2.1.1 Aβ 類寡聚體誘發(fā)AD 的機(jī)理

Aβ 是由 β 淀粉樣前體蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)經(jīng)γ-分泌酶和β-分泌酶的蛋白水解產(chǎn)生的產(chǎn)物[31]。少量的Aβ 可發(fā)揮營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞和增強(qiáng)突觸可塑性的作用,而Aβ 的異常增多及聚集則具有神經(jīng)毒性作用。按其結(jié)構(gòu)的不同,Aβ 可分為單體、寡聚體和纖維,部分研究認(rèn)為可溶性寡聚體Aβ 的聚集與AD 患者認(rèn)知功能障礙關(guān)系密切[32-33]。Aβ 寡聚體通過(guò)與N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)、α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑受體(αamino-3-hydroxy-5-methyL-4-isoxazole-propionic acid receptor,AMPAR)、神經(jīng)元表面的胰島素受體(insulin receptor,Ins R)等的結(jié)合,借助不同信號(hào)通路誘發(fā)機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng),導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡,細(xì)胞內(nèi)Aβ 異常沉積,進(jìn)而使機(jī)體認(rèn)知功能障礙[34]。Dgal 聯(lián)合Aβ 類寡聚體復(fù)制AD 動(dòng)物模型時(shí),D-gal 劑量為50～150 mg/kg,Aβ 用量為2～5 μL,造模周期約6～7 周。

2.1.2 D-gal 聯(lián)合Aβ 類寡聚體復(fù)制AD 動(dòng)物模型

(1)促進(jìn)Aβ 聚集,Tau 蛋白磷酸化,損害神經(jīng)元結(jié)構(gòu)或功能

D-gal 聯(lián)合Aβ 類寡聚體的復(fù)合式造模方法體現(xiàn)了AD 腦組織中Aβ 聚集、Tau 蛋白磷酸化、神經(jīng)元損傷的病理學(xué)特征。Ye 等[35]發(fā)現(xiàn)D-gal 聯(lián)合Aβ25-35造模后的大鼠空間學(xué)習(xí)及記憶障礙,檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其海馬區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)受損,磷酸化Tau(p-Tau)蛋白表達(dá)增加。Deng 等[36]的研究證實(shí)了D-gal 聯(lián)合Aβ25-35復(fù)制的動(dòng)物模型具備AD 學(xué)習(xí)記憶功能減退的行為學(xué)表現(xiàn),也符合AD 腦組織中APP、Tau 蛋白表達(dá)增加、神經(jīng)元凋亡的病理特征。張淑萍等[37]的研究表明D-gal 聯(lián)合Aβ1-42復(fù)制的動(dòng)物模型也會(huì)表現(xiàn)出認(rèn)知功能減退及海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)受損的異常改變,但對(duì)Aβ1-42的用量未進(jìn)行說(shuō)明。

(2)破壞膽堿能系統(tǒng),降低抗氧化功能,引起炎癥反應(yīng)

D-gal 聯(lián)合Aβ 類寡聚體的復(fù)合式造模方法模擬了與AD 發(fā)病相關(guān)的中樞膽堿能功能低下、過(guò)氧化損傷及炎癥反應(yīng)假說(shuō)。王改鳳[38]研究發(fā)現(xiàn),D-gal 聯(lián)合Aβ25-35復(fù)制的AD 大鼠模型,學(xué)習(xí)及空間記憶功能受損,同時(shí)其腦組織中乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase,AChE)活性明顯升高,表明大鼠膽堿能系統(tǒng)受損。Zhang 等[39]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述研究一致。同時(shí),兩項(xiàng)研究均指出該造模法可破壞大鼠的抗氧化能力,造成過(guò)氧化損傷,具體表現(xiàn)為SOD 活性降低,MDA 濃度升高。此外,在前者的研究中還出現(xiàn)了炎性細(xì)胞因子TNF-α 及IL-1β 含量顯著增多的現(xiàn)象。

2.2 D-gal 聯(lián)合AlCl3

2.2.1 AlCl3誘發(fā)AD 的機(jī)理

鋁(Al)在體內(nèi)的蓄積會(huì)導(dǎo)致大腦出現(xiàn)氧化損傷、膽堿能功能減退及認(rèn)知障礙[40]。研究表明,AD患者腦組織中Al 的含量顯著升高[41]。Al 誘導(dǎo)AD動(dòng)物模型的機(jī)制為:一方面Al 是促氧劑,可誘導(dǎo)機(jī)體組織器官ROS 生成增多,抗氧化酶活性降低,使脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸的結(jié)構(gòu)和功能異常,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或功能喪失,引發(fā)AD[42-43];另一方面,Al 通過(guò)誘導(dǎo)α-分泌酶和β-分泌酶的活性,調(diào)節(jié)APP 的表達(dá)和水解過(guò)程,增加腦組織 Aβ 的生成,引起AD[44-45]。此外,Al 也可以通過(guò)調(diào)節(jié)蛋白激酶和蛋白磷酸酶的活性,誘導(dǎo)Tau 蛋白過(guò)度磷酸化和異常聚集,進(jìn)而形成NFTs[46]。D-gal 聯(lián)合AlCl3復(fù)制AD動(dòng)物模型時(shí),不同報(bào)道中兩者的用量相差較大,造模周期約6～12 周。

2.2.2 D-gal 聯(lián)合AlCl3復(fù)制AD 動(dòng)物模型

D-gal 聯(lián)合AlCl3復(fù)制的AD 模型可出現(xiàn)Aβ、Tau 蛋白表達(dá)增加、神經(jīng)細(xì)胞凋亡、膽堿能系統(tǒng)損傷、氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)等病理改變。陳建國(guó)等[47]發(fā)現(xiàn)D-gal 聯(lián)合AlCl3制備的AD 大鼠模型學(xué)習(xí)記憶功能受損,大腦皮質(zhì)神經(jīng)元內(nèi)Tau 蛋白、海馬Aβ含量顯著增加,勻漿中GSH-Px、SOD 活性下降,MDA 水平增高,表明模型大鼠腦組織中Aβ 等蛋白生成清除機(jī)制失衡,機(jī)體氧化還原平衡失調(diào)。Chiroma 等[48]觀察了D-gal 聯(lián)合AlCl3干預(yù)后大鼠的行為學(xué)和病理改變,結(jié)果顯示模型大鼠記憶認(rèn)知功能減退,海馬中Tau 蛋白發(fā)生過(guò)度磷酸化改變,且神經(jīng)細(xì)胞大量丟失。Mahdi 等[49]的研究也表明該模型復(fù)制方法會(huì)引起大鼠神經(jīng)元結(jié)構(gòu)和數(shù)量的異常改變,出現(xiàn)氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)。Ji 等[50]的研究發(fā)現(xiàn)上述造模法建立的AD 模型學(xué)習(xí)記憶、視覺(jué)識(shí)別、探索能力減退,同時(shí)出現(xiàn)海馬神經(jīng)元突觸損傷,AChE 活性增加,促炎因子釋放增多,抗氧化物活性降低的病理改變。此外,Song 等[51]也發(fā)現(xiàn)D-gal 聯(lián)合AlCl3干預(yù)會(huì)影響小鼠腦組織內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放以及腸道菌群的紊亂,這些也被證實(shí)與AD 的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。

2.3 D-gal 聯(lián)合亞硝酸鈉(NaNO2)

2.3.1 NaNO2誘發(fā)AD 的機(jī)理

NaNO2是一種氧化劑,機(jī)體持續(xù)攝入會(huì)誘導(dǎo)血紅蛋白中的二價(jià)鐵氧化成為三價(jià)鐵,形成高鐵血紅蛋白,促使組織缺氧,引起細(xì)胞內(nèi)的游離Ca2+增多、自由基生成增加。一方面這將誘導(dǎo)機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激,導(dǎo)致蛋白磷酸酯酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)活性下降,引起神經(jīng)元骨架蛋白的過(guò)度磷酸;另一方面將促進(jìn)NFTS的形成。此外,在酸性環(huán)境下NaNO2易轉(zhuǎn)化成NO,NO 與超氧陰離子結(jié)合生成過(guò)氧亞硝酸鹽,NO 和過(guò)氧亞硝酸鹽可以誘導(dǎo)Tau 蛋白的過(guò)度磷酸化,誘導(dǎo)AD 的發(fā)生[52-53]。D-gal 聯(lián)合NaNO2復(fù)制AD 動(dòng)物模型時(shí),藥物用量多集中在D-gal 120 mg/kg 和NaNO290 mg/kg,造模周期為60 d。

2.3.2 D-gal 聯(lián)合NaNO2復(fù)制AD 動(dòng)物模型

D-gal 聯(lián)合NaNO2復(fù)制的AD 動(dòng)物模型多體現(xiàn)出膽堿能系統(tǒng)損傷、中樞炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激的病理特征。周張玖智等[54]通過(guò)D-gal 聯(lián)合NaNO2復(fù)合干預(yù)建立的AD 模型學(xué)習(xí)記憶障礙,皮層組織中MDA、IL-6、TNF-α 含量顯著升高,SOD、GSH-Px 活性降低,表明該模型體內(nèi)自由基平衡失調(diào),促炎因子釋放增加。Zhang 等[55]的研究證實(shí)了如前所述復(fù)制的AD 模型表現(xiàn)出神經(jīng)炎癥反應(yīng)及氧化/抗氧化失衡的病理改變,同時(shí),大鼠額葉皮質(zhì)和海馬中AChE 水平升高,Ach 和ChE 含量降低,表明該模型膽堿能系統(tǒng)也受到損害。Wang 等[56]發(fā)現(xiàn),當(dāng)D-gal的用量為每小時(shí)1250 mg/kg,會(huì)代償性上調(diào)腦組織中SOD 活性及GSH 水平,并會(huì)誘導(dǎo)海馬CA1、CA3、CA4 區(qū)神經(jīng)元損傷。

根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn),總結(jié)了上述幾種AD 動(dòng)物模型的制備方法、行為學(xué)表現(xiàn)和病理改變(見(jiàn)表1),梳理了不同AD 動(dòng)物模型的模型特征(見(jiàn)表2)。

表1 D-半乳糖法制備AD 動(dòng)物模型的具體方法、行為學(xué)表現(xiàn)、病理改變Table 1 Specific methods,behavioral manifestations and pathological changes of ad animal model prepared by D-galactose method

續(xù)表1

續(xù)表1

表2 D-半乳糖法制備的AD 動(dòng)物模型特征總結(jié)Table 2 Summary of characteristics of AD animal model prepared by D-galactose method

3 結(jié)語(yǔ)

復(fù)制具備AD 行為學(xué)表現(xiàn)和病理生化特征的動(dòng)物模型是當(dāng)今研發(fā)治療AD 新藥物、探索新療法的重要手段和載體?，F(xiàn)常用的以D-gal 為基礎(chǔ)的AD動(dòng)物模型制備以單純D-gal、D-gal 聯(lián)合Aβ 類寡聚體、D-gal 聯(lián)合AlCl3及D-gal 聯(lián)合NaNO2為主。

從病程發(fā)展看,D-gal 干預(yù)致衰老接近AD 慢性起病的過(guò)程。從行為學(xué)表現(xiàn)看,上述諸法復(fù)制的動(dòng)物模型均能體現(xiàn)出學(xué)習(xí)障礙、記憶受損、行為異常等與臨床AD 患者相類似的表現(xiàn)。從病理生化改變看,諸法雖未能徹底滿足各假說(shuō)支撐下AD 的發(fā)病機(jī)制,但也體現(xiàn)出該病多因素致病的特點(diǎn)。首先,各造模法的共同點(diǎn)在于均能誘導(dǎo)機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng),故均可適用于研究AD 患者氧化反應(yīng)、神經(jīng)炎癥的內(nèi)在機(jī)制及研發(fā)抗氧化、抑制神經(jīng)炎癥的相關(guān)藥物。此外,D-gal、D-gal 聯(lián)合Aβ 類寡聚體、D-gal 聯(lián)合AlCl3可模擬AD 神經(jīng)元損傷、Aβ聚集和Tau 蛋白過(guò)度磷酸化的病理改變,可用于研究AD 神經(jīng)元結(jié)構(gòu)受損或功能障礙及Aβ、Tau 病理產(chǎn)物異常表達(dá)的內(nèi)在機(jī)制及多靶向藥物干預(yù)AD 的作用機(jī)制。D-gal 聯(lián)合Aβ 類寡聚體、D-gal 聯(lián)合AlCl3、D-gal 聯(lián)合NaNO2也能破壞膽堿能功能,重現(xiàn)AD 膽堿能系統(tǒng)紊亂的病理特征,適用于研究膽堿能系統(tǒng)損傷與AD 發(fā)病相關(guān)的神經(jīng)機(jī)制及探討擬膽堿藥物的療效評(píng)價(jià)。D-gal、D-gal 聯(lián)合AlCl3涉及腸道菌群失調(diào)的相關(guān)表現(xiàn),可用于一些通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群改善AD 相關(guān)藥物的內(nèi)在機(jī)制探討。相比較而言,D-gal 結(jié)合Aβ 類寡聚體、AlCl3復(fù)制的模型病理特征更清晰,考慮到前者模型制備復(fù)雜,成功率低,故D-gal 結(jié)合AlCl3復(fù)制的模型適用性最高。

但上述諸法也存在一定的局限性。首先,雖有個(gè)別文獻(xiàn)提到單純D-gal 刺激會(huì)形成NFTs 的主要成分PHF,但其內(nèi)在機(jī)制尚不明確,結(jié)合該藥物誘導(dǎo)衰老的相關(guān)研究,推斷其作用的主要靶點(diǎn)是誘導(dǎo)機(jī)體的氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等,而不是影響體內(nèi)Aβ或Tau 蛋白的產(chǎn)生及代謝過(guò)程。Aβ 類寡聚體可直接模擬AD 的特征性病理改變,但不敢保證體外給藥與機(jī)體之間的相互作用和機(jī)體因病變生成病理產(chǎn)物影響其功能的作用機(jī)理相一致;同時(shí)作為一種創(chuàng)傷性刺激,易對(duì)周邊腦組織產(chǎn)生損傷。NaNO2本身是一種氧化劑,其誘導(dǎo)的Tau 蛋白過(guò)度磷酸化不能排除是破壞氧化還原平衡產(chǎn)生的后效應(yīng)。AlCl3能同時(shí)調(diào)節(jié)Aβ 的生成及Tau 蛋白磷酸化和聚集過(guò)程,相比較而言,能較好的反映AD 特有病理改變的內(nèi)在機(jī)制?？傮w而言,D-gal、Aβ 類寡聚體、AlCl3、NaNO2均直接或間接參與調(diào)控Aβ 高表達(dá)、Tau 蛋白過(guò)度磷酸化的過(guò)程,但諸法均未明確指出在AD動(dòng)物模型中是否出現(xiàn)SP、NFTs,推測(cè)可能與模型復(fù)制中藥物用量及造模周期的長(zhǎng)短相關(guān),藥物劑量小,干預(yù)時(shí)間短,在一定程度上,可能會(huì)導(dǎo)致沉積在各腦區(qū)的Aβ 經(jīng)機(jī)體內(nèi)特定的降解酶所降解或者Tau 蛋白磷酸化/去磷酸化的酶系統(tǒng)活性尚未受到嚴(yán)重影響,使得沉積的Aβ 或過(guò)度磷酸化的Tau 蛋白不足以形成SP 或NFTs。故在原有研究的基礎(chǔ)上,加設(shè)干預(yù)藥物的不同劑量組別及延長(zhǎng)建模周期,以此明確各造模法是否具備AD 的典型病理改變,會(huì)成為今后新的研究方向。有研究認(rèn)為,輕度認(rèn)知功能障礙(mild cognitive impairment,MCI)作為AD 的早期階段,其動(dòng)物模型與AD 動(dòng)物模型相比,應(yīng)具備早于AD 的發(fā)病年齡、輕微的認(rèn)知減退及輕度的病理生化改變[57]。已有文獻(xiàn)報(bào)道了用D-gal 配合高脂飼料喂養(yǎng)構(gòu)建MCI 動(dòng)物模型的相關(guān)研究[58],這是否意味著上述諸法在控制動(dòng)物大小、用藥劑量及造模時(shí)間的條件下,可以構(gòu)建出較為理想的MCI 動(dòng)物模型。其次,各模型制備方法選用的動(dòng)物種類及年齡不盡相同,一方面無(wú)法確定誘導(dǎo)AD 的藥物干預(yù)哪一類型的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)導(dǎo)致的病理變化與人體更接近;另一方面,不同年齡的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)致AD 藥物的耐受性不同,引起的模型動(dòng)物生化及病理改變不同。研究發(fā)現(xiàn),對(duì)3 月齡大鼠進(jìn)行D-gal 干預(yù)后誘導(dǎo)衰老的模型最接近自然衰老,造模效果好于小于3 月齡的大鼠[59]。

綜上,D-gal 為基礎(chǔ)的復(fù)合式AD 模型復(fù)制方法是近年來(lái)研究者探索較多的內(nèi)容,結(jié)合各實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、藥物自身結(jié)構(gòu)和特征,進(jìn)行大量實(shí)驗(yàn)研究后,總結(jié)出制備AD 動(dòng)物模型相對(duì)統(tǒng)一的動(dòng)物種類、藥物用量、給藥方式、給藥周期及各模型動(dòng)物相對(duì)特異性的行為學(xué)、生化及病理改變是今后研究的重點(diǎn)。