蘇 淮，禹 柳，楊素珍，陳玉榮，張 輝

（山東福瑞達(dá)生物股份有限公司，山東 濟(jì)南 250101）

氯己定（也稱為洗必泰）屬胍類消毒防腐劑，其中醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定因其良好的溶解性、廣譜的抑菌性能，在藥品中常作為防腐劑使用，對(duì)革蘭陰性菌和革蘭陽(yáng)性菌都有效，用于滴眼劑、凝膠劑等劑型的防腐，使產(chǎn)品保持良好的微生物限度水平[1-3]。

葡萄糖酸氯己定的含量測(cè)定方法，目前在中國(guó)藥典（2020年版）、胍類消毒劑衛(wèi)生要求（GB/T 26367-2020）等國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中均有收載，如紫外分光光度法、滴定法、高效液相色譜法等，但在凝膠劑型中，由于增稠劑的存在，對(duì)葡萄糖酸氯己定的含量測(cè)定存在一定影響[4-5]。本研究采用紫外分光光度法，消除了增稠劑的影響，準(zhǔn)確測(cè)定了葡萄糖酸氯己定的含量，具有經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-610S紫外/可見(jiàn)光分光度計(jì)（上海元析儀器有限公司）；Agilent 8454紫外/可見(jiàn)光分光度計(jì)（安捷倫科技中國(guó)有限公司）；ME204電子天平[梅特勒托利多儀器（上海）有限公司]；KQ-500E超聲波儀（昆山市超聲儀器有限公司）；LAB DANCER S000旋渦混合器（德國(guó)IKA）；DHG-9023烘箱（廣東泰宏君科學(xué)儀器股份有限公司）。

1.2 試藥

醋酸氯己定對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，純度：96.9 %，批號(hào)：1TN6-YNOQ）；葡萄糖酸氯己定凝膠（自制，濃度：0.5 %）；乙醇（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純，批號(hào)：20201222）；冰醋酸（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純，批號(hào)：20190724）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 對(duì)照品溶液制備 取醋酸氯己定對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并稀至刻度，振搖均勻，備用。

2.1.2 供試品溶液制備 取凝膠樣品4份，每份約2 g（含葡萄糖酸氯己定約10 mg），精密稱定，分別置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液至刻度，分別按以下方式處理：（1）室溫2800 r/min振搖10 min，得溶液1；（2）常溫超聲（40 kHz）提取30 min，得溶液2；（3）40 ℃水浴加熱60 min，得溶液3；（4）室溫，2800 r/min 振搖3次，每次10 min，放置過(guò)夜（約16 h），得溶液4。4種溶液分別精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，分別得供試品溶液1～4，備用。

2.1.3 空白輔料溶液制備 按凝膠處方制備不含葡萄糖酸氯己定的空白凝膠，取約2 g，精密稱定，置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液稀至刻度，按2.1.2項(xiàng)下方法處理。精密量取處理后溶液5 ml，置50 ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，得空白輔料溶液1～4。

2.2 葡萄糖酸氯己定含量測(cè)定

精密稱取樣品2 g（相當(dāng)于醋酸氯己定對(duì)照品10 mg），置100 ml量瓶中，加入1.5 mol/L的醋酸溶液溶解并稀釋至刻度，按2.1.2項(xiàng)下方法（1）處理，精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，260 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。按下式計(jì)算樣品中葡萄糖酸氯己定的含量。

式中，X為樣品中葡萄糖酸氯己定的含量（g/kg），m為醋酸氯己定對(duì)照品的質(zhì)量（mg），A1為醋酸氯己定對(duì)照品溶液的吸光度值，A2為供試品溶液的吸光度值，m0為供試品質(zhì)量（g），1.4348為醋酸氯己定與葡萄糖酸氯己定的換算系數(shù)。

2.3 波長(zhǎng)的選擇

以醋酸-乙醇溶液為空白，取2.1項(xiàng)下的對(duì)照溶液、空白輔料溶液1及供試品溶液1，200～400 nm范圍內(nèi)掃描。對(duì)照溶液1及供試品溶液1在260 nm處有最大吸收峰，空白溶液1在260 nm處無(wú)吸收干擾。采用同樣的方法重復(fù)掃描供試品溶液2～4，均可得出相同結(jié)論，因此確定260 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 紫外掃描光譜

2.4 線性關(guān)系考察

取醋酸氯己定對(duì)照品約20 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并稀至刻度，搖勻，精密量取1，2，3，4，5 ml，分別置50 ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻。以乙醇為空白，在260 nm處測(cè)定吸光度。以對(duì)照品溶液的吸光度（A）對(duì)濃度（C）做標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程為：A=0.03101C+0.09813（r=0.9998）。結(jié)果表明，醋酸氯己定在4～20 μg/ml范圍時(shí)濃度與吸光度呈線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

2.5.1 重復(fù)性 取0.5 %葡萄糖酸氯己定凝膠，按2.1.2項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，分別測(cè)定。供試品溶液1，2，3，4的含量RSD分別為4.22 %，2.27 %，2.71 %，1.52 %。其中方法4的重復(fù)性最佳。

2.5.2 中間精密度 在不同時(shí)間，由研究室另一名試驗(yàn)人員，按2.1.2項(xiàng)下供試品溶液4的處理方式，配制6份供試品溶液，使用不同廠家及型號(hào)的儀器進(jìn)行檢測(cè)。供試品溶液含量RSD值為0.90 %，表明方法中間精密度良好。

2.5.3 儀器精密度 取2.1.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液，平行測(cè)定6次，計(jì)算RSD。結(jié)果，6次測(cè)定平均吸光度為0.4101，RSD為0.47 %，表明儀器的精密度良好。

2.6 耐用性

2.6.1 穩(wěn)定性 取對(duì)照品溶液及供試品溶液，分別于配制后0，1，2，4，8 h，在260 nm處檢測(cè)吸光度，結(jié)果表明對(duì)照品溶液及4種供試品溶液8 h內(nèi)吸光度RSD值分別為1.79 %，1.14 %，1.22 %，0.81 %，0.95 %，表明溶液穩(wěn)定性良好。

2.6.2 提取液濃度影響 精密稱取12份樣品，每份2 g，分別置100 ml量瓶中，分為3組，每組4份，組1、組2、組3分別加1.45，1.50，1.55 mol/L醋酸溶液至刻度；每組4份樣品分別按2.1.2項(xiàng)下4種方法處理后，分別精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，260 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，見(jiàn)表1。結(jié)果顯示，提取液濃度改變對(duì)4種供試品溶液的含量檢測(cè)數(shù)值影響不大。

表1 提取液濃度影響試驗(yàn)結(jié)果

2.7 回收率

按處方制備不含葡萄糖酸氯己定的空白凝膠。取空白凝膠9份，每份約2 g，精密稱定，置100 ml量瓶中，分別加入葡萄糖酸氯己定對(duì)照品溶液，使其終濃度達(dá)0.4 %，0.5 %，0.6 %，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并稀至刻度，按2.1.2項(xiàng)下方法處理。精密量取5 ml置50 ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)，采用方法4處理，葡萄糖酸氯己定回收率最佳。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測(cè)定

取3批葡萄糖酸氯己定免洗消毒凝膠，按方法4制備供試品溶液，每批平行檢測(cè)3次，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 葡萄糖酸氯己定免洗消毒凝膠含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

葡萄糖酸氯己定的幾種國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法中，紫外分光光度法及高效液相色譜法使用廣泛，由于凝膠劑型的特殊性，需采取特殊的前處理去除輔料干擾。有報(bào)道采用高效液相色譜法檢測(cè)，樣品需經(jīng)超聲振蕩提取、轉(zhuǎn)移離心、過(guò)濾等步驟，其分離提取過(guò)程步驟較多，易導(dǎo)致目標(biāo)成分損失[6]。

本研究比較了不同樣品處理方式對(duì)凝膠中葡萄糖酸氯己定含量測(cè)定的影響。研究結(jié)果顯示多次振蕩結(jié)合靜置過(guò)夜的處理方法，提取效率最佳[7]。本研究建立的測(cè)定方法具有操作簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)環(huán)保的優(yōu)勢(shì)，且具有較高的回收率、穩(wěn)定性和重復(fù)性，適用于氯己定凝膠劑型的含量測(cè)定，同時(shí)也便于基層生產(chǎn)企業(yè)推廣使用。