王建東，郭亞男*，李 昕，唐玉林，閆背背，何生虎

(1.寧夏農(nóng)林科學(xué)院動物科學(xué)研究所，寧夏銀川 750002；2.寧夏獸藥飼料監(jiān)察所，寧夏銀川 750002；3.寧夏大學(xué)農(nóng)學(xué)院，寧夏銀川 750021)

流產(chǎn)是指由各種原因引起胎兒或母體異常而導(dǎo)致妊娠的生理過程發(fā)生紊亂，或者胎兒與母體的正常關(guān)系受到破壞而使妊娠中斷的臨床病理現(xiàn)象[1]。流產(chǎn)是影響牛養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟效益的重要因素之一，流產(chǎn)不但造成胎兒夭折或發(fā)育受阻，使產(chǎn)犢間隔擴大，增加養(yǎng)牛的飼料成本，而且會造成產(chǎn)奶量下降，嚴重者還可引起母牛繁殖障礙，影響后備牛的擴充[2]。引起牛流產(chǎn)的因素主要分為傳染性因素和非傳染性因素，其中傳染性因素主要包括布魯氏菌病、李氏桿菌病、牛病毒性腹瀉、牛傳染性鼻氣管炎、寄生蟲病、衣原體病和生殖器官疾病等[3-6]。非傳染性因素主要包括營養(yǎng)缺乏(蛋白質(zhì)、維生素A、維生素E、維生素D和礦物質(zhì)等)、飼料發(fā)霉變質(zhì)和應(yīng)激等[5-6]。

寧夏養(yǎng)牛歷史悠久，是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部確定的全國肉牛優(yōu)勢產(chǎn)區(qū)之一。2020年，寧夏回族自治區(qū)將肉牛產(chǎn)業(yè)確定為九大重點產(chǎn)業(yè)之一，加大政策扶持，優(yōu)化區(qū)域布局，夯實產(chǎn)業(yè)基礎(chǔ)，提高規(guī)模化水平，肉牛產(chǎn)業(yè)持續(xù)快速發(fā)展。寧夏地區(qū)肉牛飼養(yǎng)量192萬頭，牛肉產(chǎn)值45.9億元，占畜牧業(yè)總產(chǎn)值的23.3%，占農(nóng)業(yè)總產(chǎn)值的7.8%[7]。但是，目前僅有對寧夏地區(qū)奶牛流產(chǎn)病原血清學(xué)調(diào)查的報道[2]，未見有關(guān)肉牛流產(chǎn)相關(guān)報道。因此，本研究通過采集不同地區(qū)基礎(chǔ)肉用母牛血液并分離血清開展血清病原或抗體檢測，旨在掌握引起寧夏地區(qū)基礎(chǔ)肉用母牛流產(chǎn)的主要病原因素，為寧夏不同地區(qū)基礎(chǔ)肉用母牛提質(zhì)增效和基礎(chǔ)肉用母牛疾病防控奠定科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 牛犬新孢子蟲抗體檢測試劑盒(ET433)、傳染性牛鼻氣管炎病毒gb抗體檢測試劑盒(S431)、布魯氏菌抗體檢測試劑盒(20009)、牛病毒性腹瀉病毒抗原檢測試劑盒(AA411)、衣原體抗體檢測試劑盒(AA911)，美國Idexx公司產(chǎn)品。

1.1.2 儀器設(shè)備 酶標(biāo)儀(SM-3)，北京天石天力公司產(chǎn)品；自動洗板機(ST360W)，上?？迫A公司產(chǎn)品；電熱恒溫器(HH-W21-600)，天津泰斯特有限公司產(chǎn)品；離心機(TDL80-2B)，上海安亭科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 血清采集 血液樣本由牛場養(yǎng)殖人員和寧夏農(nóng)林科學(xué)院動物科學(xué)研究所科研人員采集。采用非抗凝血采血器從基礎(chǔ)肉用母牛尾靜脈采集4 mL左右的血液，室溫下凝固后，4 ℃條件下保存并運輸至寧夏農(nóng)林科學(xué)院動物科學(xué)院研究所疫病研究室。然后采用3 000 r/min離心15 min，最后吸出血清至2 mL凍存管中，置-80 ℃保存待檢。共采集血清樣本92份，其中固原市共計48份，平羅縣12份，惠農(nóng)區(qū)12份，同心縣12份，吳忠市8份。

1.2.2 檢測方法及判斷標(biāo)準(zhǔn) 嚴格按照牛犬新孢子蟲抗體檢測試劑盒、傳染性牛鼻氣管炎病毒gB抗體檢測試劑盒、布魯氏菌抗體檢測試劑盒、牛病毒性腹瀉病毒抗原檢測試劑盒和衣原體抗體檢測試劑盒的說明書進行血清樣本抗原或抗體檢測，結(jié)果采用北京愛德士元亨生物科技有限公司提供的數(shù)據(jù)分析軟件(xChek)計算平均值、S/P值或S-N值并結(jié)合說明書中的陰性和陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)進行樣品陰陽性判斷。

1.2.3 統(tǒng)計分析 酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測樣品中的陰性、陽性數(shù)據(jù)均采用IBM SPASS Statistics 26 統(tǒng)計分析軟件中的卡方檢驗進行差異性分析，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 寧夏不同地區(qū)5種流產(chǎn)相關(guān)病原抗體/抗原檢測結(jié)果

通過ELISA對寧夏不同地區(qū)5種流產(chǎn)相關(guān)病原抗體/抗原檢測并分析，結(jié)果如表1所示。布魯氏菌平均抗體陽性率為30.43%(28/92)，平羅縣陽性率最高，為100.00%(12/12)，同心縣陽性率最低，為16.67%(2/12)；平羅縣與固原市、平羅縣、惠農(nóng)區(qū)、同心縣和吳忠市相比差異極顯著(P<0.01)，其他各地區(qū)之間差異不顯著(P>0.05)。牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)抗原陽性率為0。

表1 寧夏不同地區(qū)肉?；A(chǔ)母牛5種流產(chǎn)相關(guān)病原抗體/抗原檢測結(jié)果

牛傳染性鼻氣管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV)平均抗體陽性率為69.57%(64/92)，其中固原市抗體陽性率最高，為93.75%(45/48)，吳忠市最低，為0；固原市與同心縣差異不顯著(P>0.05),固原市和同心縣與平羅縣、惠農(nóng)區(qū)和吳忠市相比差異極顯著(P<0.01),吳忠市與固原市、平羅縣、惠農(nóng)區(qū)和同心縣相比差異極顯著(P<0.01)。

犬新孢子蟲平均抗體陽性率為82.61%(76/92)，其中平羅縣和同心縣抗體陽性率最高，為100.00%(12/12)；吳忠市抗體陽性率最低，為12.50%。固原市、平羅縣、惠農(nóng)區(qū)和同心縣與吳忠市相比差異極顯著(P<0.01)，固原市與平羅縣和同心縣相比差異顯著(P<0.05)。

衣原體平均抗體陽性率為44.57%(41/92)，其中惠農(nóng)區(qū)和吳忠市抗體陽性率最高，均為100.00%(12/12)，固原市抗體陽性率最低，為22.92%(11/92)。惠農(nóng)區(qū)和吳忠市與平羅縣、同心縣和固原市相比差異極顯著(P<0.01)，同心縣與固原市和平羅縣相比差異顯著(P<0.05)。

2.2 5種流產(chǎn)相關(guān)病原抗體/抗原感染情況分析

92份樣品中，陰性率為1.09%(1/92)，5種病原抗原/抗體檢測陽性率為98.91%(91/92)，其中單一病原抗體/抗原陽性率占15.22%(14/92)，IBR和衣原體感染率最高，為6.52%；2種病原抗體混合陽性率占50.00%(46/92)，IBR+犬新孢子蟲陽性率最高，為28.26%(26/92)；3種病原抗體混合陽性率占22.83%(21/92)，IBR+犬新孢子蟲+衣原體陽性率最高，為14.13%(13/92)；4種病原抗體混合陽性率占10.87%(10/92)，為布魯氏菌+IBR+犬新孢子蟲+衣原體混合抗體陽性(表2)。

表2 5種流產(chǎn)相關(guān)病原抗體/抗原統(tǒng)計結(jié)果

3 討論

近年來，寧夏地區(qū)堅持“優(yōu)質(zhì)+高端”肉牛品種改良技術(shù)路線，以西門塔爾、安格斯牛為主體的良種母牛存欄比例達75%，已成為全國重要的優(yōu)質(zhì)肉牛繁育基地。同時，依托區(qū)域資源稟賦和產(chǎn)業(yè)發(fā)展基礎(chǔ)，形成以中南部地區(qū)為核心的優(yōu)質(zhì)肉牛產(chǎn)區(qū)。主產(chǎn)區(qū)肉牛飼養(yǎng)量達121.2 萬頭，占全區(qū)肉牛飼養(yǎng)量的62.9%[7]。寧夏地區(qū)肉牛主要養(yǎng)殖地區(qū)分別為固原市(隆德縣、西吉縣、涇源縣、彭陽縣)、同心縣、平羅縣、惠農(nóng)區(qū)，其他地區(qū)主要為奶牛產(chǎn)業(yè)為主。因此,本研究針對以上地區(qū)開展肉用母牛流產(chǎn)相關(guān)病原血清流行病學(xué)研究，為寧夏地區(qū)肉用母牛繁殖疾病防控技術(shù)研究提供科學(xué)依據(jù)。

臨床上引起懷孕母牛流產(chǎn)的病因很多，但以傳染性因素為主導(dǎo)，如布魯氏菌、BVDV、IBRV、衣原體、牛沙門氏菌、李氏桿菌、牛彎曲菌、中山病原、赤羽病原、新孢子蟲、弓形蟲等病原。一般情況下，妊娠奶牛有3%～8%的流產(chǎn)率是正常現(xiàn)象[2,8-10]。在檢測的92份樣品中，僅有1頭基礎(chǔ)母牛未檢出相關(guān)病原，檢測的5種病原抗原/抗體檢測陽性率為98.91%(91/92)。布魯氏菌平均抗體陽性率30.43%(28/92)，IBRV平均抗體陽性率為69.57%(64/92)，犬新孢子蟲平均抗體陽性率為82.61%(76/92)，衣原體平均抗體陽性率為44.57%(41/92)，未檢出BVDV抗原。研究結(jié)果表明，目前犬新孢子蟲感染肉用母牛的占比最大，IBRV次之，布魯氏菌和衣原體感染狀況也較為嚴重。

在對混合感染狀況分析中發(fā)現(xiàn)，單一病原抗體/抗原陽性率占15.22%(14/92)，IBR和衣原體感染率最高，為6.52%；2種病原抗體混合陽性率占50.00%(46/92)，IBR+犬新孢子蟲陽性率最高，為28.26%(26/92)；3種病原抗體混合陽性率占22.83%(21/92)，IBR+犬新孢子蟲+衣原體陽性率最高，為14.13%(13/92)；4種病原抗體混合陽性率占10.87%(10/92)，為布魯氏菌+IBR+犬新孢子蟲+衣原體混合抗體陽性。本研究表明了寧夏地區(qū)引發(fā)肉用母牛流產(chǎn)的病原主要以混合感染為主，其中IBRV和犬新孢子蟲比例最大，本研究與郭亞男等[10]研究結(jié)果一致。原因可能是因為目前肉牛養(yǎng)殖過程中基礎(chǔ)母牛流產(chǎn)相關(guān)疫苗除了布魯氏菌會用疫苗兩次預(yù)防外，IBR雖有疫苗但是目前僅在規(guī)?；膛鲞M行了推廣應(yīng)用，而其他病原尚未有相應(yīng)的商品化疫苗。因此，針對以上病原感染情況的調(diào)查表明，在肉用母牛養(yǎng)殖過程中，應(yīng)加強以上病原的檢疫并采取相應(yīng)的防控措施，尤其是犬新孢子蟲和IBRV的防控，做好相應(yīng)的疫苗免疫預(yù)防工作。