繆海冰，陳真

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種自身免疫性疾病，其病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，外泌體來源的miRNA在RA炎癥和關(guān)節(jié)損傷的發(fā)展中有關(guān)鍵作用，既往研究已經(jīng)檢測到數(shù)種與RA活動(dòng)和緩解相關(guān)的非編碼 RNA 的可變表達(dá)，如miR-155、miR-146等[1]。近年來，文獻(xiàn)報(bào)道了部分新型外泌體相關(guān)miRNA在RA中的病理生理意義，提示其對RA治療及預(yù)防的潛力。

2020年，研究發(fā)現(xiàn)血清外泌體 miRNA-1915- 3p在RA患者中表達(dá)明顯失調(diào)，且與RA的血清C反應(yīng)蛋白水平相關(guān)，可能成為RA疾病活動(dòng)的潛在標(biāo)志物[2]。RA滑液衍生的外泌體含有高水平的 miR- 574- 5p，可參與誘導(dǎo)破骨細(xì)胞生成[3]。miR-106b 在 RA 滑膜成纖維細(xì)胞(synovial fibroblasts，SFs)及其衍生的外泌體中高表達(dá)。SFs衍生的外泌體 miRNA-106b 可從SFs遞送至軟骨細(xì)胞，抑制軟骨細(xì)胞增殖和遷移，加速細(xì)胞凋亡，刺激 RA 發(fā)生[4]。

2022年有研究者在RA患者的血漿外泌體中發(fā)現(xiàn)新的外泌體miRNA分子，并且該研究顯示血漿外泌體miR- 204- 5p表達(dá)與RA患者疾病參數(shù)呈負(fù)相關(guān)。這些外泌體可以轉(zhuǎn)移至滑膜成纖維細(xì)胞中，抑制細(xì)胞活化與增殖。該研究進(jìn)一步進(jìn)行了動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)注射過表達(dá) miR- 204- 5p 的慢病毒可減緩膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)小鼠的病情進(jìn)展[5]。

1 RA患者存在多種外泌體miRNA的表達(dá)異常

研究者在9例RA患者和9名健康對照中進(jìn)行RNA微陣列表達(dá)譜分析，發(fā)現(xiàn)多種血漿外泌體表達(dá)差異，隨后通過RT-qPCR在發(fā)現(xiàn)隊(duì)列(RA 與健康對照=30∶30)和驗(yàn)證隊(duì)列 (RA 與健康對照=56∶60)證實(shí)miR- 204- 5p表達(dá)下調(diào)。研究者進(jìn)一步建立類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎小鼠模型(CIA)，發(fā)現(xiàn)CIA小鼠血漿外泌體miR- 204- 5p豐度同樣降低(圖1)。

圖1 血漿外泌體miR- 204- 5p在 RA 患者及健康對照存在表達(dá)差異

2 miR- 204- 5p過表達(dá)對滑膜成纖維細(xì)胞的影響

研究者在MH7A 細(xì)胞基礎(chǔ)上構(gòu)建了 miR- 204- 5p-OE和miR- 204- 5p-NC模型，通過細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)、EdU 染色、RT-qPCR 檢查等實(shí)驗(yàn)技術(shù)發(fā)現(xiàn)miR- 204- 5p在一定程度上抑制滑膜成纖維細(xì)胞增殖、侵襲和細(xì)胞因子的釋放(圖2)。

圖2 miR- 204- 5p過表達(dá)抑制MH7A細(xì)胞的侵襲、增殖和炎癥因子的表達(dá)

3 過表達(dá)miR- 204可減輕 CIA 小鼠關(guān)節(jié)炎的嚴(yán)重程度

研究者將編碼 miR- 204- 5p 前體的慢病毒載體(lenti- 204)注射到CIA 小鼠模型的踝關(guān)節(jié)中，并通過關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分、放射學(xué)和組織學(xué)變化監(jiān)測治療結(jié)果。發(fā)現(xiàn)lenti- 204處理顯著減輕 CIA 小鼠的疾病進(jìn)展。相對于對照組，該處理組小鼠足爪更少表現(xiàn)出發(fā)紅及腫脹、關(guān)節(jié)炎評分較低并且微 CT 的圖像重建顯示更少的骨侵蝕。組織病理學(xué)檢查提示lenti- 204處理組小鼠病理變化更輕微，沒有出現(xiàn)軟骨侵蝕。利用滑膜增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)對關(guān)節(jié)組織進(jìn)行染色，發(fā)現(xiàn)lenti- 204處理組關(guān)節(jié)組織中 PCNA 的陽性染色顯著降低(圖3)。

圖3 注射慢病毒miR- 204可減輕膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎(CIA)小鼠的疾病活動(dòng)