李昌武，劉永剛，萬長華，廖 柱，謝式云，易永紅

（1.海南羅牛山畜牧有限公司，海南 海口 570100；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，云南 昆明 650000；3.海南羅牛山股份有限公司，海南 ?？?570125）

我國是世界上豬肉消耗與生產(chǎn)大國，居民在豬肉上的消費在各種肉類消費總和中所占的比例不容小覷。我國畜牧業(yè)中養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)所占地位不言而喻，因此，在保留大白豬原有優(yōu)點的基礎(chǔ)上再進一步提高其日增重和瘦肉率，能夠為人們提供更多優(yōu)質(zhì)肉制品以及改善人們生活，同時也具有重要的經(jīng)濟價值，值得關(guān)注和研究。發(fā)掘及篩選與豬生長速度及瘦肉率相關(guān)的基因，對我國積極參與國際上豬基因產(chǎn)權(quán)的爭奪并進一步利用這些基因用于改進我國養(yǎng)豬生產(chǎn)也具有重要的意義。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的興起和迅速發(fā)展，發(fā)展了常規(guī)育種與分子標記輔助選擇（MAS）相結(jié)合的方法，可以有效地加快豬生長速度及瘦肉率性狀的選擇進展。MYST2（組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶2），也稱作HBO1和KAT7（Lysine Acetyltransferase 7，賴氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶7），是組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶MYST（MOZ、YBF2、SAS2和Tip60）家族（HAT）的成員之一。MYST2基因目前已經(jīng)被證實在調(diào)節(jié)細胞增殖[1]、控制脂肪的生成[2]、調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育過程[3]以及胎兒肝臟中紅血球母細胞的存活密切相關(guān)[4]。Jishuang等[5]的研究表明，在AA雞（Arbor Acres Broiler Chicken，艾撥益加肉雞）中上調(diào)MYST2對其IMF（Intramuscular Fat，肌內(nèi)脂肪）的沉積有一定影響。Wang等[6]通過研究豬MYST2基因mRNA的替代以及該基因突變與產(chǎn)仔大小性狀的相關(guān)性中表明，該基因與大白母豬和地方種母豬所有產(chǎn)仔呈現(xiàn)大小顯著相關(guān)關(guān)系。

這些數(shù)據(jù)為進一步了解豬的這種基因奠定了基礎(chǔ)。除此之外，也有相關(guān)證據(jù)表明MYST家族成員在控制細胞中具有核心和特異性作用，在細胞凋亡、細胞周期和成體干細胞穩(wěn)態(tài)到早期胚胎的形成中均起到一定的調(diào)節(jié)作用[7]。但是截至目前，還鮮少有關(guān)于利用豬MYST2基因作為大白豬瘦肉率和平均日增重的遺傳標記的研究或進行大白豬瘦肉率和平均日增重標記輔助選育的報道。

1 研究目的

1）探明MYST2基因與大白豬的活體瘦肉率是否存在關(guān)聯(lián)；2）探明MYST2基因與大白豬的平均日增重是否存在關(guān)聯(lián)。

2 材料與方法

2.1 試驗豬群與數(shù)據(jù)分析

2019年10月，隨機選擇云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院試驗動物群中150頭180日齡的大白豬群為試驗材料，采用已建立的PCR-PstI-RFLP方法進行多態(tài)性檢測，并分析豬不同基因型與活體瘦肉率和平均日增重的相關(guān)關(guān)系。采用SAS統(tǒng)計軟件General Linear Module程序進行單標記方差分析并進行顯著性檢驗，所采用模型為：Yij=μ+Gi+Sj+bijX+Eij，其中Yij為性狀表現(xiàn)值，μ為平均值，Gi為基因型效應(yīng)（包括加性效應(yīng)和顯性效應(yīng)，加性效應(yīng)用1、0、-1分別代表AA、AB、BB基因型，顯性效應(yīng)用1、-1、1代表AA、AB、BB基因型），Sj為性別效應(yīng)，bij為活體體重的回歸系數(shù)，X為活體體重，Eij為殘差。

2.2 試驗方法

（1）從豬耳組織中提取基因組DNA，根據(jù)豬MYST2基因序列和兩條遺傳標記特異引物（表1），用該兩條引物在豬基因組DNA中進行PCR擴增，PCR反應(yīng)體系為：2.0 μL DNA （100 ng），2.5 μL 2 mmol/L mixed dNTPs，2.5 μL 10×Taq DNA polymerase buffer，2.5 μL 25 mmol/L MgCl2，1 μL 20 μmol/L第1引物，1 μL 20 μmol/L第2引物，2 unit of Taq DNA polymerase（1 U/μL），11.5 μL無菌水。得到PCR產(chǎn)物。所述的PCR程序為：94 ℃ 4 min，35個循環(huán)94 ℃ 50 s，58 ℃ 45 s，72 ℃ 50 s，然后72 ℃ 10 min，最后4 ℃終止反應(yīng)。

（2）將步驟（1）中得到的PCR產(chǎn)物用PstI限制性內(nèi)切酶酶切，反應(yīng)體系為：10 μL PCR產(chǎn)物，7 μL無菌水，1 μL PstI（10 U），2 μL 10×buffer，PCR產(chǎn)物PstI酶切反應(yīng)條件為：混合物在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 h。在含有EB（溴化乙錠）的2%瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切結(jié)果，凝膠成像系統(tǒng)觀察并記錄基因型。

3 結(jié)果與分析

3.1 試驗結(jié)果

根據(jù)條帶差異，可分為3種基因型：1）AA型：具有282 bp、164 bp 2條帶；2）BB型：只有446 bp 1條帶；3）AB型：同時具有446 bp、282 bp、164 bp 3條帶（圖1）。

圖1 大白豬MYST2基因分型檢測結(jié)果

3.2 MYST2基因型與大白豬活體瘦肉率和平均日增重的關(guān)聯(lián)分析

在150頭大白豬群中進行了不同基因型與活體瘦肉率和平均日增重間關(guān)聯(lián)分析，統(tǒng)計分析結(jié)果見表2。

表2 MYST2基因型與大白豬活體瘦肉率和平均日增重的關(guān)聯(lián)分析

4 結(jié)論與討論

在參與試驗的150頭大白豬中，基因型AA個體的活體瘦肉率極顯著高于BB基因型個體（P<0.01），基因型AA個體的活體平均日增重極顯著高于BB基因型個體（P<0.01）。經(jīng)分析結(jié)果綜合考慮，選擇MYST2基因中含有AA基因型的個體作為種畜，可以極顯著提高大白豬后代的瘦肉率與平均日增重。