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        新疆部分地區(qū)豬瘟病毒抗體水平檢測及分析

        2022-12-05 09:57:48常軍帥王紫陽屈勇剛
        養(yǎng)豬 2022年6期
        關(guān)鍵詞:檢測

        常軍帥,李 娜,王紫陽,屈勇剛,梁 晏,趙 玉,陳 寧

        (1.石河子大學動物科技學院,新疆 石河子 832003;2.動物疾病防控兵團重點實驗室,新疆 石河子 832003)

        隨著我國經(jīng)濟的飛速發(fā)展,對豬肉的需求量也日益增多,促使我國生豬存欄量、豬肉產(chǎn)量穩(wěn)居全球第一[1]。但與發(fā)達國家相比,我國養(yǎng)殖水平相對較低,規(guī)模較小,致使豬病易發(fā)、頻發(fā)、較難凈化,嚴重影響了豬場的經(jīng)濟效益。豬瘟(CSF)俗稱“豬霍亂”,又稱“爛腸瘟”,是由豬瘟病毒(CSFV)引起的一種只感染豬的病毒性傳染病,該病毒自1810年在美國發(fā)現(xiàn)之后,100多年內(nèi)法國、英國、日本及我國也相繼報道出CSFV的本土病例出現(xiàn)[2]。CSFV傳播迅速,致死率高,被世界動物衛(wèi)生組織(Office International Des Epizooties, OIE)在《國際動物衛(wèi)生法典》中列為必須上報的疾病,在我國的《家畜家禽防疫條例實施細則》中也明確規(guī)定其為一類傳染病?!秶抑虚L期動物疫病防治規(guī)劃(2012—2020年)》將CSF列為優(yōu)先防治和重點防范的動物疫病[3]。CSFV分為3個基因型(基因1~3型)和11個基因亞型(1.1~1.4、2.1~2.3和3.1~3.4),其中我國流行的優(yōu)勢毒株為2.1b[2]。20世紀50年代,我國研發(fā)出了豬瘟兔化弱毒疫苗(C株),并于1965年提出根除豬瘟計劃,在我國及世界豬瘟凈化工作上發(fā)揮了關(guān)鍵作用。但由于我國養(yǎng)殖模式多元化、養(yǎng)殖人員技術(shù)水平參差不齊、生物安全防控意識薄弱、相關(guān)政策不夠完善等原因,導致CSF在我國凈化不徹底,急性型轉(zhuǎn)變?yōu)槁孕?、溫和型,呈現(xiàn)種豬長期帶毒、仔豬先天感染等癥狀。對于凈化CSF而言,疫苗免疫是最簡單、最有效的方法,但由于各種原因,導致疫苗免疫不合格,抗體水平低,致使CSF在我國以散發(fā)流行為主。

        ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)抗體檢測方法,價格低廉、快捷方便、特異靈敏,在評價抗體水平時最為常用。本試驗為了解新疆部分地區(qū)CSFV的免疫狀況,對2019—2020年采集的1 238份豬血清進行CSFV抗體檢測,根據(jù)結(jié)果對各豬場、各豬群進行免疫程序優(yōu)化,以減少CSFV及其相關(guān)疾病的發(fā)生。

        1 材料

        1.1 樣品

        2019年1月至2020年12月期間從新疆石河子市、伊犁哈薩克自治州、阿克蘇市、巴音郭楞蒙古自治州、奎屯市、塔城地區(qū),按照地區(qū)、豬場及豬群類別的不同隨機采集了1 238份血樣,分離血清后立即在石河子大學動物科技學院進行檢測。其中哺乳仔豬145份、保育豬132份、肥育豬81份、后備豬163份、繁殖母豬548份、種公豬169份。

        1.2 材料和儀器

        豬瘟病毒(CSFV)抗體檢測試劑盒購自北京愛德士元亨生物科技有限公司;獸用一次性采血器5 mL為南昌市山力畜牧器械有限公司產(chǎn)品;自動酶標儀購自青島智匯谷信息技術(shù)有限公司。

        2 方法

        2.1 樣品及試劑準備

        新鮮的、冷藏(2~8 ℃少于8 d)的、冰凍的血清都可用于檢測;所有試劑需恢復至20 ℃,輕微震蕩混勻。

        2.2 ELISA檢測方法

        在每個CSFV抗原包被孔內(nèi)加入50 μL樣品稀釋液,每孔再分別加入50 μL樣品、陰性對照、陽性對照(陰、陽對照各2孔),輕微震蕩后加蓋封條放入20 ℃環(huán)境下孵育2 h;洗滌3次,每孔加100 μL酶標,加蓋封條后放入20 ℃環(huán)境下孵育30 min;再次洗滌,加入100 μL底物溶液,放置10 min后再加入100 μL終止液,即可在450 nm出測量樣本及對照的吸光值。

        2.3 結(jié)果判定

        試驗成立的標準為陰性對照平均值>0.50,且陽性對照阻斷率>50%,該檢測結(jié)果才能有效。阻斷率%=(陰性對照平均值-樣品OD450)/陰性對照平均值。當阻斷率≥40%判定為陽性,阻斷率≤30%為陰性,阻斷率介于30%~40%之間為可疑。

        2.4 數(shù)據(jù)分析

        使用SPSS軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,計算各組數(shù)據(jù)的差異。

        3 結(jié)果

        3.1 不同豬場PRRSV抗體檢測結(jié)果

        在1 238份樣品中,85.70%(1 061/1 238)的血清有CSFV的抗體存在,平均阻斷率為67.88%。A~F豬場的陽性率分別為91.11%(287/315)、94.91%(56/59)、81.40%(210/258)、80.80%(101/125)、86.35%(215/249)、82.76%(192/232);其中B場的平均阻斷率最高,為70.26%,D場的平均阻斷率最低,為61.00%;D豬場的平均阻斷率與A、B、C、E場存在顯著差異(P<0.05);F豬場的平均阻斷率與A、B、C、D、E場差異不顯著(P>0.05)。結(jié)果見表1。

        表1 不同豬場CSFV抗體檢測結(jié)果

        3.2 不同類別豬群CSFV抗體檢測結(jié)果

        各類別豬群中,哺乳仔豬、保育豬、肥育豬、后備豬、繁殖母豬、種公豬陽性率分別為62.76%(91/145)、68.18%(90/132)、69.14%(56/81)、90.18%(147/163)、94.34%(517/548)、94.75%(160/169);其中繁殖母豬的平均阻斷率最高,為74.05%,保育豬的平均阻斷率最低,為50.91%;肥育豬的平均阻斷率與哺乳仔豬、保育豬、后備豬、繁殖母豬、種公豬存在顯著差異(P<0.05);種公豬的平均阻斷率與后備豬、繁殖母豬差異不顯著(P>0.05)。結(jié)果見表2。

        表2 不同類別豬群CSFV抗體檢測結(jié)果

        4 討論與分析

        目前我國CSFV主要表現(xiàn)為持續(xù)性感染和非典型性感染,造成這個結(jié)果的原因主要有兩個:一是CSFV可垂直傳播,種豬群凈化不徹底,所產(chǎn)仔豬在生長過程中可持續(xù)向環(huán)境排毒,對其他健康豬造成威脅;二是無效的疫苗免疫驅(qū)動了CSFV向低毒力凈化,才導致CSF病例多為非典型癥狀[4]。因此,對免疫效果及時評價、定期調(diào)整,才能更好地保證健康養(yǎng)殖。

        檢測結(jié)果得出,CSFV的抗體陽性率為85.70%(1 061/1 238),明顯高于國家規(guī)定的70%,證明各地區(qū)對CSFV的免疫效果良好[5];平均阻斷率為67.88%,明顯高于40%,說明該地區(qū)豬群CSFV抗體水平較高。谷思穎等[6]曾對該地區(qū)進行過CSFV抗體檢測,得出2018年的平均陽性率為84.11%(270/321),與之相比,本試驗抗體水平略有上升,可能受2019—2020年高豬價的影響。在各豬場中,D豬場陽性率最低,為80.80%(101/125),而B豬場陽性率高達94.91%(56/59),造成D豬場陽性率低的原因可能是疫苗注射量不足。免疫劑量不足是免疫失敗的主要原因,D豬場可結(jié)合本豬場傳統(tǒng)和現(xiàn)狀制定出更科學、高效的免疫程序[7]。各類別豬群中,哺乳仔豬的陽性率最低,為62.76%(91/145)。對于這種現(xiàn)象,可在母豬產(chǎn)前40~20 d加強免疫1次,提高乳汁中母源抗體水平;也可檢測該地區(qū)仔豬母源抗體半衰期時間,即母源抗體的效價在1∶8~1∶64時,及時對仔豬進行CSFV疫苗免疫,這樣才能使母源抗體不干擾免疫效果;保育豬、肥育豬的陽性率也未達到國家規(guī)定的70%的抗體陽性率,為了提高免疫效果,注射疫苗同時肌肉注射亞硒酸鈉維生素E或左旋咪唑等免疫增強劑[7]。

        總之,在防控CSFV中疫苗免疫雖是最重要的一個環(huán)節(jié),但也離不開綜合防控措施。加強飼養(yǎng)管理,保證豬舍環(huán)境衛(wèi)生,才能更好地提高豬群對疾病的抵抗力。同時凈化豬場中的豬圓環(huán)病毒病、豬藍耳病等免疫抑制疾病,減少疫苗免疫過程中的干擾因素,免疫效果才能達到預期效果。同時,針對抗體值明顯高于平均水平的豬只要進行CSFV的抗原檢測,才能確保生豬養(yǎng)殖事業(yè)能夠長久穩(wěn)定的發(fā)展。

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