許昌超，張俊濤，蘇 楊，冼卓慧

（廣州市林業(yè)和園林科學(xué)研究院，廣東 廣州 510405）

【研究意義】磷是植物生長(zhǎng)的必需大量元素，土壤中有相當(dāng)一部分的磷經(jīng)過(guò)土壤化學(xué)途徑被固定下來(lái)，無(wú)法被植物直接利用，限制了土壤磷素的有效性以及磷肥的肥效。在我國(guó)南方紅壤區(qū)，土壤磷元素已經(jīng)成為農(nóng)林生產(chǎn)過(guò)程中的重要限制性因子［1-2］。研究發(fā)現(xiàn)，土壤中存在一類微生物，可將土壤中被固定下來(lái)的磷轉(zhuǎn)化為有效磷，這類微生物被稱作解磷微生物，該發(fā)現(xiàn)為提升土壤有效磷含量開(kāi)辟了新的途徑［3-4］。前期，從紅壤中篩選出一株可提高土壤有效磷含量的解磷菌株P(guān)enicillium brocae（咖啡果小蠹青霉菌），對(duì)小白菜（Brassica chinensisL.）和矮牽牛（Petunia hybrida）具有顯著的促生效果［5-6］。目前，國(guó)外已有解磷青霉菌進(jìn)入商業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)用，如以拜萊青霉菌為原料的解磷菌劑JumpStart?［7］。關(guān)于解磷菌的研究報(bào)道并不鮮見(jiàn)，主要集中在液體培養(yǎng)條件下的溶磷能力檢測(cè)和小分子有機(jī)酸分泌相關(guān)的溶磷機(jī)理闡釋，但要真正了解解磷菌在土壤環(huán)境中的作用效果，還需要加強(qiáng)其在土壤中定殖動(dòng)態(tài)和解磷能力方面的研究，相關(guān)研究成果對(duì)推進(jìn)解磷菌劑的實(shí)際應(yīng)用具有積極意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】外源接種的解磷菌在土壤中能夠定殖是發(fā)揮解磷作用的前提，土壤中復(fù)雜的微生物環(huán)境給研究特定解磷菌在數(shù)量上的動(dòng)態(tài)變化帶來(lái)困難［8］。張小蘭等［8］和Nacoon等［9］利用平板計(jì)數(shù)法研究了解磷菌株在無(wú)菌土壤環(huán)境中的定殖情況，并發(fā)現(xiàn)土壤定殖能力強(qiáng)的菌株在溶磷效果方面表現(xiàn)更好，該方法對(duì)評(píng)估解磷菌的應(yīng)用潛力具有參考意義，但尚不能反映出實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中土壤環(huán)境微生物對(duì)解磷菌定殖的影響。也有研究人員利用非滅菌土壤開(kāi)展了解磷菌定殖方面的研究，如龔明波等［10］利用解磷菌篩選平板研究了解磷青霉菌P.aculeatum在自然土壤中的定殖動(dòng)態(tài)，該方法要求能夠準(zhǔn)確判斷P.aculeatum與其他土壤解磷菌在形態(tài)上的差異，通用程度上存在一定的局限性；王向英等［11］通過(guò)質(zhì)粒將氨芐和四環(huán)素抗性基因?qū)氲絻芍杲饬准?xì)菌中，并利用含有相應(yīng)抗生素的篩選平板對(duì)兩株解磷菌在自然土壤中的定殖動(dòng)態(tài)進(jìn)行了研究，并發(fā)現(xiàn)解磷菌定殖數(shù)量和解磷效果存在一定關(guān)聯(lián)。除平板計(jì)數(shù)法以外，Gómez-Mu?oz等［12］利用qPCR 對(duì)接種到土壤中的P.aculeatum群落豐度進(jìn)行定量，qPCR 是目前常用的土壤微生物群落豐度定量分析技術(shù)，但是要精確定量某一種功能菌則還需要保證設(shè)計(jì)引物的高度特異性，且qPCR 用于土壤中微生物定量也存在一些異議，有研究人員認(rèn)為利用qPCR 會(huì)將微生物殘?bào)w的DNA 也擴(kuò)增出來(lái)，進(jìn)而對(duì)研究土壤中微生物的消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)變化造成干擾［13］。因此，平板計(jì)數(shù)法仍然是當(dāng)前菌落計(jì)數(shù)最直觀和可靠的方法，該方法用于解磷菌定殖動(dòng)態(tài)分析的關(guān)鍵在于如何提高平板的篩選特異性。【本研究切入點(diǎn)】獲得具有篩選標(biāo)記的P.brocea菌株，并利用篩選標(biāo)記更為準(zhǔn)確地對(duì)P.brocea在自然土壤中的存活數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)，同時(shí)分析解磷菌定殖對(duì)土壤有效磷含量的影響。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本研究擬重點(diǎn)解決兩個(gè)問(wèn)題，即如何排除土壤環(huán)境中的雜菌對(duì)解磷菌P.brocea計(jì)數(shù)的干擾以及外源接種到土壤中的P.brocea在數(shù)量上是如何消長(zhǎng)變化的。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 菌株 解磷菌P.brocae為本實(shí)驗(yàn)室前期從土壤中篩選出來(lái)的解磷菌株，能夠提升鈣鎂磷肥肥效和土壤有效磷含量，并促進(jìn)小白菜和矮牽牛植株生長(zhǎng)［5-6］。同時(shí)，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的絲狀真菌轉(zhuǎn)化體系將含有綠色熒光基因（gfp）、潮霉素抗性基因（hph）及β-葡萄糖苷酸酶基因（gus）的T-DNA 片段插入到P.brocae基因組中，獲得大量轉(zhuǎn)化子并構(gòu)建了文庫(kù)［6］。P.brocae轉(zhuǎn)化子Z3 即挑選自文庫(kù)并用于本研究，與野生型菌株在表觀上無(wú)明顯差異。

1.1.2 培養(yǎng)基 解磷菌培養(yǎng)和生長(zhǎng)量監(jiān)測(cè)采用馬鈴薯葡萄糖水（PDB）培養(yǎng)基，解磷能力測(cè)定和群落計(jì)數(shù)采用Pikovskaya（PVK）培養(yǎng)基［5，14］。

1.1.3 供試土壤 解磷菌接種土壤采集自增城苗場(chǎng)苗木栽培地塊，為南方地區(qū)常見(jiàn)紅壤。土壤pH 值為4.90±0.04，有機(jī)質(zhì)含量為34.4(±0.5) g/kg，全氮含量1.22 (±0.04) g/kg，全磷含量1.06 (±0.02) g/kg，全鉀含量9.45 (±0.02) g/kg，水解氮含量120.6 (±0.2) mg/kg，有效磷含量10.4 (±0.1) mg/kg，速效鉀含量53.3 (±0.6) mg/kg。

1.1.4 主要試劑和儀器 潮霉素B（羅氏）和鏈霉素購(gòu)自廣州研信生物，真菌DNA 提取試劑盒（Omega HP Fungal DNA Kit）購(gòu)自廣州飛揚(yáng)生物，Taq 酶和dNTP 購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司，即用型GUS 染色液購(gòu)自飛凈生物科技公司，利用Leica 熒光顯微鏡觀察菌體綠色熒光。

1.2 測(cè)定項(xiàng)目及方法

1.2.1gfp和hph基因片段檢測(cè) 利用試劑盒提取解磷菌P.brocae野生型及轉(zhuǎn)化子Z3 基因組，并以此為模版分別用引物gfpF/gfpR（5′-ACTGGAGTTGTCCCAATTCTTG-3′/ 5′-CATCCATGCCATGTGTAATCCC-3′）和hphF/hphR（5′-TACACAGCCATCGGTCCAGACG-3′/ 5′-CCGATTCCGGAAGTGCTTGACA-3′）擴(kuò)增gfp和hph基因片段。擴(kuò)增程序如下：95 ℃ 2 min；95 ℃30 s，58 ℃ 20 s，72 ℃ 1 min（32 cycles）；72 ℃3 min；4 ℃ forever。PCR 產(chǎn)物經(jīng)1.0%（W/V）瓊脂糖凝膠電泳后，觀察目的片段大小并切膠回收后送華大基因測(cè)序確認(rèn)。

1.2.2 GUS 染色和熒光觀察 將GUS 染色液稀釋到工作濃度。用手術(shù)刀切取菌落邊緣帶有菌絲的固體培養(yǎng)基團(tuán)塊，放入1.5 mL 離心管并添加0.5 mL GUS 染色液。搖床振蕩（往復(fù)140 r/min，37 ℃）30 min 左右即可觀察著色。用移液槍頭挑取少量液體條件下培養(yǎng)獲得的菌絲體，均勻涂布在載玻片上并利用熒光顯微鏡觀察（激發(fā)波長(zhǎng)488 nm）綠色熒光。

1.2.3 解磷菌生長(zhǎng)量和解磷能力測(cè)定 將解磷菌接種到PDA 平板上培養(yǎng)至產(chǎn)生孢子，收集孢子并稀釋至106CFU/mL。將50 mL PDB 培養(yǎng)基分裝到250 mL 錐形瓶中，并接種0.5 mL 上述孢子懸液（5 個(gè)重復(fù)）。將錐形瓶置于搖床培養(yǎng)（160 r/min，28 ℃），分別于培養(yǎng)后2、4、6、8、10 d 進(jìn)行取樣，抽濾收集菌體，并在60 ℃條件下烘干至恒重。

另外，將1×106CFU/mL 解磷菌孢子懸液接種到PVK 液體培養(yǎng)基中（5 個(gè)重復(fù)），置于溫控?fù)u床培養(yǎng)（160 r/min，28 ℃），分別于培養(yǎng)后2、4、6、8、10 d 進(jìn)行取樣，用磷鉬藍(lán)比色法測(cè)定上清有效磷含量。

1.2.4 解磷菌在土壤中的定殖動(dòng)態(tài) 于2021 年8 月在廣州市林業(yè)和園林科學(xué)研究院3 號(hào)實(shí)驗(yàn)樓樓頂大棚內(nèi)開(kāi)展解磷菌土壤接種試驗(yàn)。將供試土壤充分均質(zhì)化后，向其中接種解磷菌孢子懸液至終濃度為1×106CFU/g 土壤，維持土壤濕度30%～50%（3 個(gè)重復(fù)）。每隔7 d 采集1 次土壤樣本，連續(xù)采集10 次。取1 g 土壤樣本，用無(wú)菌水按102～105梯度稀釋后涂布到PVK 固體平板上（含200 mg/L 潮霉素B 和100 mg/L 鏈霉素），28 ℃靜置培養(yǎng)至平板上出現(xiàn)菌落，統(tǒng)計(jì)產(chǎn)生溶磷圈的真菌菌落數(shù)量，對(duì)存疑的菌落進(jìn)行GUS 染色或GFP 觀察確認(rèn)，每個(gè)平板上的菌落計(jì)數(shù)在10～80 CFU 的為有效計(jì)數(shù)結(jié)果［10］。

1.2.5 土壤有效磷含量測(cè)定 對(duì)接種解磷菌的土壤有效磷含量進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，每隔7 d 采集1 次土壤樣本，連續(xù)采集10 次。土壤經(jīng)風(fēng)干研磨后，過(guò)孔徑2 mm 篩，用NaHCO3浸提法測(cè)定有效磷含量。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析和圖表制作采用Microsoft Office Excel 2016 和SPSS 22.0 軟件，采用最小顯著性差異法（LSD）進(jìn)行數(shù)據(jù)差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 轉(zhuǎn)化子Z3 攜帶的分子標(biāo)記檢測(cè)

圖1 為解磷菌P.brocae轉(zhuǎn)化子Z3 和野生型菌株Wt 在PVK 平板上生長(zhǎng)7 d 后菌落形態(tài)，表觀上看轉(zhuǎn)化子Z3 和野生型菌株無(wú)太大差異（圖1A）。另外，轉(zhuǎn)化子Z3 可以在含有200 mg/L 潮霉素B 的PVK 平板上正常生長(zhǎng)，而野生型菌株則無(wú)法產(chǎn)生菌落，說(shuō)明轉(zhuǎn)化子Z3 具有潮霉素抗性，可以作為接下來(lái)菌株的篩選標(biāo)記（圖1A）。通過(guò)PCR 從轉(zhuǎn)化子Z3 基因組上擴(kuò)增出符合預(yù)期大小的hph和gfp基因片段，約分布在700 bp 左右，并通過(guò)片段測(cè)序驗(yàn)證，表明轉(zhuǎn)化子Z3 中含有hph和gfp基因（圖1B）。最后，利用GUS 染色劑和熒光顯微鏡分別在轉(zhuǎn)化子Z3 菌絲上檢測(cè)到染料著色和綠色熒光，表明gfp和gus基因在轉(zhuǎn)化子Z3 中均可以正常表達(dá)（圖1C）。

圖1 轉(zhuǎn)化子Z3 及其攜帶的分子標(biāo)記檢測(cè)Fig.1 Detection of transformant Z3 and its molecular markers

2.2 轉(zhuǎn)化子Z3 和野生型菌株的生長(zhǎng)速率和解磷能力比較

為進(jìn)一步論證轉(zhuǎn)化子Z3 可以用于解磷菌P.brocae在土壤中的定殖動(dòng)態(tài)和解磷效果分析，對(duì)轉(zhuǎn)化子Z3 和野生型菌株的生長(zhǎng)速率和溶磷能力進(jìn)行比較。連續(xù)10 d 的菌絲體干質(zhì)量監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)表明，轉(zhuǎn)化子Z3 和野生型菌株具有趨勢(shì)相近的生長(zhǎng)曲線，并且二者在各監(jiān)測(cè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)上的菌絲體干質(zhì)量均無(wú)顯著差異，培養(yǎng)后10 d 轉(zhuǎn)化子Z3 和野生型菌株的菌絲體干質(zhì)量分別達(dá)到12.91 (±0.50)、12.76 (±0.17) mg/L（圖2）。另外，溶磷能力分析表明轉(zhuǎn)化子Z3和野生型菌株培養(yǎng)10 d 內(nèi)具有相近的溶磷曲線，二者的溶磷量亦無(wú)顯著差異，且轉(zhuǎn)化子Z3和野生型菌株在培養(yǎng)10 d 內(nèi)的溶磷峰值分別可達(dá)到392.82 (±5.11)、395.38 (±19.94) mg/L（圖3）。

圖2 轉(zhuǎn)化子Z3 和野生型菌株Wt 的生長(zhǎng)曲線Fig.2 Growth curves of transformant Z3 and Wt

圖3 轉(zhuǎn)化子Z3 和野生型菌株Wt 的解磷曲線Fig.3 Phosphate solubilization curves of transformant Z3 and Wt

上述研究結(jié)果表明，轉(zhuǎn)化操作對(duì)轉(zhuǎn)化子Z3的菌體生長(zhǎng)速率和溶磷能力未產(chǎn)生顯著影響，可替代野生型菌株用于P.brocae在土壤中的定殖動(dòng)態(tài)和解磷效果分析。

2.3 轉(zhuǎn)化子Z3 在土壤中的定殖動(dòng)態(tài)和解磷效果

對(duì)轉(zhuǎn)化子Z3 在土壤中的菌落數(shù)量進(jìn)行為期70 d 的監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化子Z3 接種后的前兩周土壤中存活的菌落數(shù)量呈下降趨勢(shì)，由預(yù)先接種的1×106CFU/g 土壤分別下降到接種后1 周的2.2×105CFU/g 土壤和接種后2 周的1×105CFU/g土壤（圖4）。接種后3 周土壤中轉(zhuǎn)化子Z3 的數(shù)量大幅提升并達(dá)到峰值（4.3×106CFU/g），接種后3 周到接種后7 周解磷菌在土壤中的定殖數(shù)量開(kāi)始緩慢下降，并維持在1×105CFU/g 土壤數(shù)量級(jí)以上（圖4）。從接種后7 周開(kāi)始，轉(zhuǎn)化子Z3 在土壤中的定殖數(shù)量開(kāi)始快速下降，從接種后7 周的3.4×105CFU/g 土壤降至接種后10 周的1.4×103CFU/g 土壤（圖4）。

圖4 轉(zhuǎn)化子Z3 在土壤中的定殖數(shù)量和土壤有效磷含量曲線Fig.4 Colony number of transformant Z3 in soil and soil available phosphate content curve

同時(shí)，本研究對(duì)轉(zhuǎn)化子Z3 接種后土壤有效磷含量進(jìn)行跟蹤研究。數(shù)據(jù)分析結(jié)果表明，從接種后1 周開(kāi)始土壤有效磷含量從10.6 mg/L 逐步提升，至接種后7 周達(dá)到峰值14.7 mg/L，土壤有效磷較本底值增加41.3%。接種7 周后土壤有效磷含量逐步下降，至接種后10 周降至12.7 mg/L，較土壤本底值有效磷含量仍高出22.1%（圖4）。

通過(guò)轉(zhuǎn)化子Z3 定殖數(shù)量變化曲線和土壤有效磷含量變化曲線的綜合比較分析發(fā)現(xiàn)，土壤有效磷含量上升階段，轉(zhuǎn)化子Z3 在土壤中的檢出數(shù)量均維持在1×105CFU/g 土壤數(shù)量級(jí)左右或以上，當(dāng)土壤解磷菌數(shù)量呈下降趨勢(shì)并明顯低于1×105CFU/g 時(shí)，土壤有效磷含量也隨之降低（圖4）。

3 討論

隨著研究的深入，越來(lái)越多的高效解磷菌被篩選出來(lái)。劉春菊等［15］和李豆豆等［16］從土壤中獲得的解磷真菌在液體培養(yǎng)條件下對(duì)磷酸鈣的溶解量分別高達(dá)1 386.93、869.62 mg/L。另有報(bào)道，培養(yǎng)條件經(jīng)過(guò)優(yōu)化的解磷細(xì)菌在實(shí)驗(yàn)室條件下對(duì)磷酸鈣的解磷能力也可達(dá)到424.14 mg/L［17］。然而，解磷菌施入到土壤環(huán)境后會(huì)因微生物間的拮抗、競(jìng)爭(zhēng)作用或貧瘠的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境造成生長(zhǎng)和解磷能力上的變化，往往達(dá)不到實(shí)驗(yàn)室條件下的理想狀態(tài)［18］。因此，很有必要加強(qiáng)解磷菌在土壤中的定殖動(dòng)態(tài)和解磷效果的研究，為實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用提供參考［19］。

土壤中含有大量的雜菌，利用平板計(jì)數(shù)法對(duì)接種到土壤中的特定解磷菌進(jìn)行定量時(shí)存在較多難點(diǎn)，一方面要盡量減少雜菌數(shù)量，另一方面要能準(zhǔn)確甄別外觀形態(tài)上類似的雜菌。利用無(wú)菌土壤進(jìn)行解磷菌定殖動(dòng)態(tài)方面的研究雖然可以避免雜菌干擾，但無(wú)法反映出土壤原生微生物對(duì)菌株定殖的影響，研究表明菌株在滅菌土壤中的定殖數(shù)量和續(xù)存時(shí)間要顯著高于非滅菌土壤［11,20］。本研究利用鏈霉素和潮霉素增強(qiáng)了解磷菌PVK 篩選平板的特異性，鏈霉素可大大減少平板上細(xì)菌菌落的數(shù)量，潮霉素則可篩選掉大量解磷真菌。最后，利用轉(zhuǎn)化子Z3 攜帶的綠色熒光或GUS 活性對(duì)存疑的菌落進(jìn)一步甄別，提高了平板計(jì)數(shù)的效率和準(zhǔn)確性。Xian等［21］通過(guò)類似方法實(shí)現(xiàn)了對(duì)土壤中生防菌棘孢木霉的定量，李穎等［22］也通過(guò)利福平標(biāo)記實(shí)現(xiàn)了植物促生細(xì)菌在土壤中的定殖情況分析。此外，許昌超等［6］還利用菌株攜帶的GUS 標(biāo)記研究了該解磷菌在植物根部組織中的定殖情況。目前，通過(guò)T-DNA 插入或質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的方式將外源基因?qū)胨拗骶菍?shí)現(xiàn)宿主菌株分子標(biāo)記的兩種便捷途徑，但二者各有優(yōu)缺點(diǎn)。相較后者，前者雖然更穩(wěn)定（不易隨著傳代次數(shù)增加而丟失），但容易造成宿主基因發(fā)生插入突變［23］。另外，在宿主菌中引入外源基因很容易導(dǎo)致宿主菌的生長(zhǎng)和代謝狀態(tài)發(fā)生改變。因此，在利用這些方法時(shí)應(yīng)確認(rèn)相關(guān)操作不會(huì)對(duì)菌株的生長(zhǎng)和相應(yīng)功能產(chǎn)生顯著影響。本研究結(jié)果表明，轉(zhuǎn)化子Z3 在生長(zhǎng)速率和解磷能力上與野生型菌株并無(wú)顯著差異，猜測(cè)T-DNA 的插入位點(diǎn)位于基因組的非編碼序列區(qū)域，未直接影響到基因的表達(dá)，在真核生物中非編碼區(qū)域的占比可能超過(guò)基因組的98%［24］。

總體來(lái)看，外源微生物接種到土壤后的定殖動(dòng)態(tài)變化情況還受到菌株自身遺傳特性、土壤理化環(huán)境、土著微生物種類、地表植物類別及其根系分泌物情況等諸多因素影響，并且各因素之間的關(guān)聯(lián)較為復(fù)雜，制約了當(dāng)前功能菌株在土壤中定殖機(jī)制的研究進(jìn)展。

另外，本研究結(jié)果表明，接種到土壤環(huán)境中的解磷菌轉(zhuǎn)化子Z3 在數(shù)量上呈先下降、后上升和再下降的總體趨勢(shì)。菌種接種到土壤后數(shù)量上的先降后升，可能與菌株對(duì)土壤環(huán)境的適應(yīng)性調(diào)整有關(guān)，在對(duì)一株生防木霉的土壤定殖動(dòng)態(tài)研究過(guò)程中也發(fā)現(xiàn)了類似現(xiàn)象［25］。后期數(shù)量上的衰減則可能因種群數(shù)量擴(kuò)大受到土著微生物的拮抗或相互間養(yǎng)分和空間的競(jìng)爭(zhēng)有關(guān)。龔明波等［10］研究發(fā)現(xiàn)在30 ℃正常環(huán)境溫度下，解磷菌P.aculeatum定殖數(shù)量在接種到土壤后14 d 達(dá)到峰值，接種后49 d 基本消亡。

本研究發(fā)現(xiàn)，解磷菌轉(zhuǎn)化子Z3 接種后能提高土壤有效磷含量。在監(jiān)測(cè)時(shí)段內(nèi)，土壤有效磷呈先升后降的趨勢(shì)，即當(dāng)解磷菌數(shù)量呈下降趨勢(shì)并明顯低于105CFU/g 土壤時(shí)，土壤有效磷含量也隨之降低。該現(xiàn)象表明，轉(zhuǎn)化子Z3 的定殖數(shù)量對(duì)維持解磷效果可能具有重要作用，土壤中被解磷菌釋放出來(lái)的有效磷可能會(huì)隨著解磷菌數(shù)量的衰減而被重新固定下來(lái)。因此，優(yōu)化解磷條件，提升解磷菌在土壤中的定殖數(shù)量以及定殖穩(wěn)定性是解磷菌劑開(kāi)發(fā)和應(yīng)用的重點(diǎn)研究方向［19,26］。

4 結(jié)論

本研究利用潮霉素抗性基因和GUS 基因等篩選標(biāo)記的插入和表達(dá)，解決了從土壤環(huán)境中特異地分離和鑒定解磷菌P.brocae菌落的技術(shù)問(wèn)題，并利用該技術(shù)研究解磷菌接種土壤后在數(shù)量上的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。轉(zhuǎn)化子Z3 接種土壤后在數(shù)量上呈下降-上升-下降的總體趨勢(shì)，定殖數(shù)量在接種后10 周仍可維持在1.4×103CFU/g 土壤的水平，說(shuō)明轉(zhuǎn)化子Z3 具有良好的土壤環(huán)境適應(yīng)能力。轉(zhuǎn)化子Z3 接種可顯著提高有效磷含量，最高可較接種前提升41.3%（接種后7 周），至接種后10 周較初始土壤有效磷含量仍高出22.1%。最后，轉(zhuǎn)化子Z3 土壤定殖數(shù)量維持在105CFU/g 土壤的水平或以上時(shí)，土壤有效磷含量總體呈增加趨勢(shì)，且隨著后期解磷菌土壤定殖數(shù)量上的衰減，有效磷含量也呈下降趨勢(shì)，間接表明解磷菌在土壤中的解磷效果可能依賴解磷菌的定殖數(shù)量。