劉仙喜，吳 夫，蔣啟程，劉 邦，陳 帥，周海龍

（1.海南省畜牧技術(shù)推廣總站，海南 ?？?571100；2.海南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，海南 海口 570228）

【研究意義】海南黑山羊是海南省唯一的地方優(yōu)良山羊品種，不但耐高溫濕熱、耐粗飼、合群性好，而且肉質(zhì)鮮美、膻味小，具有獨特的地方風(fēng)味，名列“海南四大名菜”之一［1］。隨著規(guī)?；B(yǎng)殖，海南黑山羊肺炎、羔羊痢疾、感冒、口瘡等疾病對其養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重影響，制約了該產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展［2］。這些疾病的發(fā)生與海南黑山羊免疫性能有密切關(guān)聯(lián)。黃芪多糖（Astragalus Polysaccharide，APS）是從黃芪的根莖中提取，含有鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖單糖等的水溶性復(fù)合植物多糖，對機(jī)體免疫有明顯促進(jìn)作用［3］，已廣泛應(yīng)用于畜禽疾病防控。諾麗（Morinda citrigoliaL.）為茜草科巴戟天屬，熱帶常綠、多年生小喬木或闊葉灌木［4］。近年來，研究人員對諾麗果及其提取物的藥用和保健功能開展了許多研究工作，發(fā)現(xiàn)其具有增強免疫、抗氧化、抑菌、降糖、抗腫瘤及保護(hù)心肌等多種生理功效［5］。但如何開發(fā)利用諾麗，建立海南黑山羊科學(xué)飼養(yǎng)方案，增強其免疫性能，提高養(yǎng)殖水平，促進(jìn)該產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展，仍有待深入研究。

【前人研究進(jìn)展】當(dāng)前海南黑山羊疾病主要采用化學(xué)類合成藥物、抗生素類或激素類藥物進(jìn)行治療，但這些藥物的使用不僅會產(chǎn)生殘留，還會導(dǎo)致耐藥性等問題［6-7］。諾麗作為添加劑在畜禽上已有相關(guān)應(yīng)用，不僅可提高雞的增重、屠宰率［8］，改善熱應(yīng)激［9］等情況，還可降低雞肉膽固醇、增加非飽和脂肪酸含量［10］。諾麗在提高蛋雞和鵪鶉的產(chǎn)蛋量和蛋品質(zhì)［11-12］，促進(jìn)鴨［13］、奶山羊［14］和羅非魚［15］的生長等方面均有重要的應(yīng)用價值。諾麗在抗氧化性［16-17］、抑菌［18］、抗腫瘤［19］、防治結(jié)腸炎［20］及其生化特性［21］等方面的研究已成為熱點。

【本研究切入點】目前有關(guān)海南黑山羊免疫性能的研究較少，而利用諾麗提高海南黑山羊免疫性能的研究尚未見報道。雖然諾麗在畜禽養(yǎng)殖中的應(yīng)用已有少量研究，但針對其提高畜禽免疫力的研究較少。如何有效增強海南黑山 羊的免疫性能是黑山羊產(chǎn)業(yè)中面臨的一個關(guān)鍵問題?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究以諾麗為材料，以提高海南黑山羊免疫性能為目的，比較諾麗和黃芪多糖提高免疫力的差異，設(shè)置諾麗高、中、低劑量處理等，分別在試驗0、30、60 d 測定各處理海南黑山羊的增重和免疫性能，從而篩選出諾麗和黃芪多糖的最佳飼喂方案，為進(jìn)一步開發(fā)海南黑山羊的綠色免疫增效劑奠定基礎(chǔ)，為推動其健康養(yǎng)殖及其產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2019 年3—7 月，在海南省東方市海南廣鑫牧業(yè)有限公司選取3～4 月齡、體重為11.28(±1.15）kg 的健康海南黑山羊54 只開展試驗。諾麗購自萬寧萬維諾麗生物科技有限公司，黃芪多糖購自南京德澤生物科技有限公司，山羊免疫球蛋白 ELISA 試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 試驗方法

將供試的54 只海南黑山羊隨機(jī)分成6 個處理：對照（每只每天飼喂200 g 精料）、低劑量諾麗處理（每只每天飼喂200 g 精料+5 g諾麗果粉）、中劑量諾麗處理（每只每天飼喂200 g 精料+10 g 諾麗果粉）、高劑量諾麗處理（每只每天飼喂200 g 精料+20 g 諾麗果粉）、黃芪多糖處理（每只每天飼喂200 g 精料+1 g 黃芪多糖）、混合處理（每只每天飼喂200 g 精料+5 g 諾麗果粉+1 g 黃芪多糖）。每千克預(yù)混料為日糧提供Mn 130 mg、Se 0.3 mg、VE50 mg、VD5 000 IU、VA15 000 IU、Fe 9 mg、Cu 12.5 mg、Zn 100 mg、I 1.5 mg。每個處理3 個重復(fù)，每個重復(fù)3 只海南黑山羊。每天8: 00和16: 00 分別將諾麗果粉和黃芪多糖粉拌在精料中進(jìn)行飼喂，并補充足量王草。試驗期為60 d。

1.3 測定項目及方法

1.3.1 生長性能 試驗0、30、60 d 對試驗羊進(jìn)行空腹稱重，試驗0～30、30～60、0～60 d 分別記為第一階段、第二階段和全期，統(tǒng)計每個時期各處理的平均日增重。

日增重=（試驗?zāi)┢谄骄w重-試驗初期平均體重）/飼喂天數(shù)

1.3.2 免疫指標(biāo) 試驗0、30、60 d 對所有試驗羊于頸靜脈采血5 mL；3 000 r/min 離心10 min 制備血清，置于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩０凑赵噭┖姓f明測定血清Ig G、IL-2 和IFN-γ 的含量，血清總蛋白和球蛋白含量送至海南金域醫(yī)學(xué)檢驗所檢測。

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2012 軟件進(jìn)行處理，通過SPSS 23.0 進(jìn)行單因素方差分析（One Way Analysis，ANOVA)，并用LSD和Duncan’s法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 諾麗對海南黑山羊生長性能的影響

由圖1 可知，試驗30 d 各處理海南黑山羊平均體重為：高劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞混合處理＞低劑量諾麗處理＞黃芪多糖處理＞對照，試驗60 d 各處理平均體重為：高劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞混合處理＞黃芪多糖處理＞低劑量諾麗處理＞對照，且高劑量諾麗處理顯著高于對照、低劑量諾麗處理和黃芪多糖處理。其中，高劑量諾麗處理海南黑山羊平均體重為17.14 (±0.70）kg，黃芪多糖處理平均體重為15.71 (±1.75）kg，可見高劑量諾麗處理的增重效果比黃芪多糖處理的增重效果更顯著。此外，隨著諾麗添加劑量的增加，海南黑山羊平均體重也增加。

圖1 不同處理海南黑山羊平均體重比較Fig.1 Comparison of the average body weight of Hainan black goats in different treatments

由圖2 可知，在試驗第一階段各處理日增重為：高劑量諾麗處理＞混合處理＞中劑量諾麗處理＞黃芪多糖處理＞低劑量諾麗處理＞對照，且高劑量諾麗處理和混合處理顯著高于對照。其中，高劑量諾麗處理日增重為103 (±32.31) g，低劑量諾麗處理日增重為70.33 (±34.87) g。全期各處理的日增重依次為：高劑量諾麗處理＞混合處理＞中劑量諾麗處理＞黃芪多糖處理＞低劑量諾麗處理＞對照，且高劑量諾麗處理和混合處理顯著高于對照。其中，高劑量諾麗處理日增重為97.27(±20.87) g，黃芪多糖處理日增重為78.00 (±12.24)g，可見高劑量諾麗處理日增重顯著高于黃芪多糖處理。與對照相比，低劑量諾麗處理、中劑量諾麗處理、高劑量諾麗處理、黃芪多糖處理、混合處理全期日增重分別提高3.38%、21.98%、45.54%、16.71%和33.88%。

圖2 不同階段各處理海南黑山羊日增重比較Fig.2 Comparison of daily gains of Hainan black goats at different stages in different treatments

2.2 諾麗對海南黑山羊免疫性能的影響

2.2.1 對血清總蛋白含量的影響 由圖3 可知，試驗0、30 d 各處理血清總蛋白含量差異不顯著，隨著飼喂時間的延長，黃芪多糖處理血清總蛋白含量為72.97 (±6.28) g/L，試驗60 d 血清總蛋白含量為78.23 (±6.39) g/L，而對照為68.9 (±6.01)g/L，黃芪多糖處理與對照之間存在顯著差異，表明黃芪多糖具有較強的免疫增效作用。除黃芪多糖處理外，其他處理間差異不顯著。此外，低劑量諾麗處理和黃芪多糖處理內(nèi)，不同處理時間海南黑山羊血清總蛋白含量差異顯著。

圖3 不同處理海南黑山羊血清總蛋白含量比較Fig.3 Comparison of serum total protein contents in Hainan black goats in different treatments

2.2.2 對血清球蛋白含量的影響 由圖4 可知，試驗30 d 各處理血清球蛋白含量為：黃芪多糖處理＞混合處理＞高劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞低劑量諾麗處理＞對照，黃芪多糖處理最高為42.90 (±6.47) g/L。試驗60 d 各處理血清球蛋白含量為：黃芪多糖處理＞混合處理=高劑量諾麗處理＞低劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞對照，黃芪多糖處理最高為47.57 (±7.11) g/L，而對照為36.00 (±4.51) g/L，且黃芪多糖處理顯著高于對照，表明黃芪多糖對血清球蛋白具有顯著增加作用。隨著飼喂時間的延長，各處理血清球蛋白有增加趨勢，且在試驗0～30 d 更明顯。

圖4 不同處理海南黑山羊血清球蛋白含量比較Fig.4 Comparison of serum globulin contents in Hainan black goats in different treatments

2.2.3 對血清IgG 含量的影響 由圖5 可知，試驗30 d 各處理血清IgG 含量為：高劑量諾麗處理＞混合處理＞黃芪多糖處理＞中劑量諾麗處理＞低劑量諾麗處理＞對照，且中劑量諾麗處理、高劑量諾麗處理、黃芪多糖處理和混合處理血清IgG 含量均與對照差異顯著，其中高劑量諾麗處理的血清IgG 含量為43.75 (±2.03) g/L，對照為38.49 (±2.94) g/L。試驗60 d 各處理血清IgG 含量為：高劑量諾麗處理＞混合處理＞黃芪多糖處理＞中劑量諾麗處理＞低劑量諾麗處理＞對照，試驗中5 個處理與對照均呈顯著差異，其中高劑量諾麗處理血清IgG 含量為49.17 (±3.52) g/L，對照為38.68 (±4.06) g/L。隨著飼喂時間的延長，試驗各處理血清IgG 含量有增加趨勢，且在試驗0～30 d 更明顯。其中，試驗30 d 高劑量諾麗處理、黃芪多糖處理和混合處理的血清lgG 水平均顯著高于對照，而試驗60 d 中劑量、高劑量諾麗處理、黃芪多糖處理和混合處理的血清lgG 也顯著高于對照。結(jié)果表明，諾麗和黃芪多糖的添加對海南黑山羊免疫性能的提高效果均較好。

圖5 不同處理海南黑山羊血清IgG 含量比較Fig.5 Comparison of serum IgG contents in Hainan black goats in different treatments

2.2.4 對血清IL-2 含量的影響 由圖6 可知，試驗30 d 時各處理血清IL-2 含量為：高劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞混合處理＞低劑量諾麗處理＞黃芪多糖處理＞對照，且中劑量諾麗處理和高劑量諾麗處理血清IL-2 含量與對照顯著差異，其中高劑量諾麗處理血清IL-2 含量為130.56 (±20.21) ng/L，對照為82.45 (±15.15) ng/L。試驗60 d 各處理血清IL-2 含量為：高劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞混合處理＞低劑量諾麗處理＞黃芪多糖處理＞對照，且各試驗處理均顯著高于對照，其中高劑量諾麗處理血清IL-2 含量為136.24 (±12.77) ng/L，對照為88.22 (±6.92) ng/L。隨著飼喂時間的延長，各處理血清IL-2 含量明顯增加，特別是高劑量諾麗處理，表明諾麗對IL-2 具有較強的增效作用。此外，IL-2 含量隨 著添加劑量的增加而增加，其中混合處理提高血清IL-2 的含量最顯著。

圖6 不同處理海南黑山羊血清IL-2 含量比較Fig.6 Co mparison of serum IL-2 co ntents in Hainan black goats in different treatments

2.2.5 對血清IFN-γ 含量的影響 由圖7 可知，試驗30 d 各處理血清IFN-γ 含量為：高劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞混合處理＞黃芪多糖處理＞低劑量諾麗處理＞對照，且各試驗處理均顯著高于對照，其中高劑量諾麗處理血清IFN-γ 含量為1 04.41 (±10.66) ng/L，對照為58.83 (±9.69) ng/L。試驗60 d 各處理血清IFN-γ 含量為：高劑量諾麗處理＞中劑量諾麗處理＞Ⅵ處理＞低劑量諾麗處理＞黃芪多糖處理＞對照，且各試驗處理均顯著高于對照，其中高劑量諾麗處理的血清IFN-γ 含量為112.72 (±10.94) ng/L，對照為70.57 (±13.50) ng/L。隨著飼喂時間的延長，各處理血清IFN-γ 含量增加顯著，特別是高劑量諾麗處理。結(jié)果表明諾麗對IFN-γ 具有顯著的促進(jìn)作用，且血清IFN-γ 含量均隨著添加劑量的增加而升高。

圖7 不同處理海南黑山羊血清IFN-γ 含量比較Fig.7 Comparison of serum IFN-γ contents in Hainan black goats in different treatments

3 討論

3.1 諾麗對海南黑山羊的增重效應(yīng)

研究表明，諾麗在促進(jìn)畜禽生長性能方面具有較好作用，如給肉雞飼喂新鮮的諾麗果汁，肉雞體重增加、飼料轉(zhuǎn)化率方面明顯升高；肉鴿的產(chǎn)蛋量（95.24%）也顯著高于對照（83.11%）［22］。在日本鵪鶉試驗中發(fā)現(xiàn)，諾麗不僅可提高其產(chǎn)蛋量，還可提升其蛋品質(zhì)［23］；Yancey等［24］用諾麗果肉飼喂育成牛，隨著日糧中諾麗果肉含量的增加，其平均日增重呈線性增加。而本試驗中，高劑量諾麗處理海南黑山羊的平均體重最高及日增重效果最佳；隨著添加劑量的增加，平均日增重也增加，與Yancey等［24］的研究結(jié)果相似。此外，在湖羊羔羊［25］和舍飼藏羊［26］飼糧中添加諾麗，平均日增重也顯著升高，這可能是由于諾麗果中富含蛋白質(zhì)，占果汁干物質(zhì)總量的11.3%，其主要氨基酸為天冬氨酸、谷氨酸和異亮氨酸；礦物質(zhì)含量占8.4%（干基重），主要是鉀、硫、鈣和磷［27］，同時諾麗也是錳和硒的潛在膳食來源；此外，還含有維生素A、維生素B 和維生素C 等，尤其以維生素C 含量較高［28］?？梢娭Z麗在促進(jìn)畜禽生長性能方面具有較好的開發(fā)前景。

3.2 諾麗對海南黑山羊的免疫增強效應(yīng)

諾麗除了具有顯著的增重效應(yīng)外，還具有明顯的免疫促進(jìn)作用，主要體現(xiàn)在血清總蛋白、免疫球蛋白等方面。Brooks等［6］研究表明，諾麗可以增強新生牛犢（尤其在斷奶前）的免疫力。本研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖處理的血清總蛋白和球蛋白含量顯著高于對照，添加諾麗果粉各處理的血清球蛋白含量均高于對照，且隨著添加劑量的增加，血清球蛋白含量也隨著升高，表明諾麗具有較好的免疫增效作用。這可能是由于白蛋白和球蛋白具有調(diào)節(jié)膠體滲透壓、物質(zhì)運輸、營養(yǎng)及免疫等功能；此外，當(dāng)機(jī)體遭遇病毒入侵時，可通過球蛋白來抵抗病原入侵。

免疫球蛋白是反映機(jī)體免疫性能的重要指標(biāo)之一，其中IgG 約占75%，在血液中含量最高，是機(jī)體免疫應(yīng)答中最持久、最重要的抗體，在抗感染中發(fā)揮重要作用［29］。IL-2 是體內(nèi)最主要、最強的T 細(xì)胞生長因子，是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的核心物質(zhì)，在細(xì)胞及體液免疫中發(fā)揮重要作用。IFN-γ 是動物機(jī)體最重要的細(xì)胞因子之一，是主要的巨噬細(xì)胞活化因子，具有強大的免疫調(diào)節(jié)作用和抗病毒、抗腫瘤作用。Pratap等［30］研究發(fā)現(xiàn)，諾麗果汁在體內(nèi)外均可增加刀豆素A（Con A），從而誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的增殖，IL-2、IFN-γ 的產(chǎn)生，以及磷酸胞外信號調(diào)節(jié)激酶的表達(dá)。含種籽的諾麗果汁還可促進(jìn)大鼠IL-2 和IFN-γ 的產(chǎn)生［31］。本試驗中，添加不同劑量的諾麗均能顯著提高海南黑山羊血清中IgG、IL-2 和IFN-γ 的含量，且血清中IgG、IL-2 和IFN-γ 的含量與其添加劑量呈正相關(guān)。徐榮等［32］給小鼠口服不同劑量的諾麗果粉30 d 后，中、高劑量處理的免疫增強效果較好，這可能與諾麗果中含有豐富的多糖（11.62 g/100g）［33］和豐富的氨基酸有關(guān)［34］。舒迎霜等［35］研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖能顯著提高犬血清IgG 和IFN-γ 含量；蒙洪嬌等［36］研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加黃芪多糖，斷奶仔豬的血清IL-2、IFN-α、IgA、IgG 含量均上升。本研究中，添加1 g 黃芪多糖，海南黑山羊的血清IgG、IL-2 和IFN-γ 含量也顯著增加，可見，諾麗和黃芪多糖在畜禽免疫增效方面均具有顯著作用。

4 結(jié)論

本研究在海南黑山羊飼養(yǎng)60 d 時，高劑量諾麗處理的平均體重為17.14 (±0.70) kg，日增重為97.27 (±20.87) g，顯著提高了海南黑山羊的生長性能。黃芪多 糖處理的血清總蛋白和球蛋白含量顯著高于對照，表明其具有較強的免疫促進(jìn)作用。此外，高劑量諾麗處理血清IgG、IL-2 和IFN-γ 的含量均顯著高于對照，飼養(yǎng)60 d 分別為49.17 (±3.52) g/L、136.24 (±12.77) ng/L、112.72(±10.94) ng/L，且血清IgG、IL-2 和IFN-γ的含量隨著添加劑量增加而提高，可見諾麗具有較強的免疫增效作用。本研究結(jié)果表明，每只海南黑山 羊每天日糧中添加20 g 諾麗果粉，飼喂 60 d，其平均體重、日增重及其免疫性能均有顯著提升。該研究結(jié)果為進(jìn)一步開發(fā)海南黑山羊的免疫增效劑奠定了基礎(chǔ)，對諾麗的進(jìn)一步開發(fā)利用具有重要參考價值。