賈 筠， 杜望磊， 肖廣智， 趙春紅， 楊西超

(空軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床免疫科， 陜西 西安 710032)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是以關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥、血管翳形成，關(guān)節(jié)軟骨及骨破壞為基本病理表現(xiàn)的全身性、慢性自身免疫性疾病，臨床表現(xiàn)多為對(duì)稱性、侵蝕性多關(guān)節(jié)炎[1]。RA確切發(fā)病機(jī)制不明，但其是使人類勞動(dòng)力喪失和殘疾的主要病因之一，早期診斷、早期治療對(duì)提升患者預(yù)后至關(guān)重要[2]。研究發(fā)現(xiàn)，維生素D在鈣磷代謝、細(xì)胞增殖分化、免疫功能調(diào)節(jié)等方面有著重要作用；破骨細(xì)胞分化因子(osteoclast differentiation factor,RNAKL)是前體破骨細(xì)胞分化成熟的重要起始因子，故血清趨化因子、RNAKL及25-羥維生素D[25-hydroxy vitamin D,25(OH)D]可能在RA的發(fā)生進(jìn)展中有著重要作用[3,4]。本文旨在研究血清趨化因子配體20(C-C chemokine ligand 20,CCL20)、RNAKL及25(OH)D水平與疾病進(jìn)展的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1一般資料：回顧性分析2019年1月至2021年12月于我院診治的289例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者，并將其納入RA組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者診斷符合1987年ACR和(或)2010年EULAR類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎分類標(biāo)準(zhǔn)[5]，見表1和表2；②患者均為新確診病例，且未曾服用抗風(fēng)濕藥物、活性維生素D藥物、糖皮質(zhì)激素等治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①半年內(nèi)服用過維生素D或其類似物；②不能正常進(jìn)食或長(zhǎng)期臥床、不能接受陽(yáng)光照射者；③合并甲狀腺疾病者；④合并嚴(yán)重肝腎疾病、糖尿病等嚴(yán)重疾病或其他嚴(yán)重并發(fā)癥；⑤臨床資料丟失或不詳盡者。同時(shí)將同期于我院健康體檢且體檢結(jié)果無(wú)異常、無(wú)重大疾病史手術(shù)史的100例體檢者納入對(duì)照組。比較RA組及對(duì)照組患者的年齡、性別比等一般資料，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表1 1987年ACR類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎分類標(biāo)準(zhǔn)[5]

表2 2010年EULAR類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎分類標(biāo)準(zhǔn)[5]

表3 兩組患者一般資料的比較分析

1.2方法：根據(jù)RA患者的28個(gè)關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)度評(píng)分(disease activity score 28-jointcount,DAS28)對(duì)其進(jìn)行分組，DAS28評(píng)分<2.6為RA緩解組，DAS28評(píng)分≥2.6為RA活動(dòng)組[6]。

1.2.1血清趨化因子配體20水平的檢測(cè)：空腹下，健康者與RA患者均被抽取靜脈血10mL，3000r/min，15min離心分離血清，-80℃保存血清待檢。使用美國(guó)RD System公司的ELISA雙抗體試劑盒檢測(cè)血清CCL20水平。在預(yù)先涂有CCL20受體的多克隆抗體微量滴定板中加入待檢血清樣品，25℃溫育90min后洗滌7次；4℃下，用辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠單克隆抗體孵育CCL20，30min后洗滌9次；向各孔加入底物溶液；室溫下滴定板避光孵育30h；使用終止液將反應(yīng)終止。使用微量滴定板讀數(shù)器，測(cè)量450nm下樣本的吸光度(A值)，并根據(jù)濃度-A值標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品濃度。

1.2.2RNAKL水平的檢測(cè)：采用ELISA法檢測(cè)待檢血清中RNAKL，選用上海江萊生物科技有限公司的試劑盒，并嚴(yán)格按照試劑盒使用說(shuō)明操作。

1.2.325-羥維生素D水平的檢測(cè)：采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)待檢血清中25(OH)D水平，試劑盒來(lái)自德國(guó)西門子公司，并嚴(yán)格按照試劑盒使用說(shuō)明操作。

2 結(jié) 果

2.1RA組患者與對(duì)照組對(duì)象血清CCL20、RNAKL、25(OH)D水平的比較分析：與對(duì)照組健康對(duì)象比較，RA患者血清CCL20、RNAKL水平顯著升高，25(OH)D水平顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表4 RA組患者與對(duì)照組對(duì)象血清CCL20 RNAKL 25(OH)D水平的比較分析

2.2RA緩解組與RA活動(dòng)組患者血清CCL20、RNAKL、25(OH)D水平的比較分析：RA緩解組患者114例，RA活動(dòng)組患者175例，RA活動(dòng)組患者血清CCL20、RNAKL水平顯著高于RA緩解組患者，血清25(OH)D水平比較，RA活動(dòng)組患者顯著低于RA緩解組患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表5。

表5 RA組患者與對(duì)照組對(duì)象血清CCL20 RNAKL 25(OH)D水平的比較分析

2.3血清CCL20、RNAKL、25(OH)D水平與DAS28評(píng)分相關(guān)性的分析：以DAS28評(píng)分作為RA疾病進(jìn)展的變量，血清CCL20、RNAKL水平與DAS28評(píng)分呈正相關(guān)(P<0.05)，血清25(OH)D水平與DAS28評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，見表6。

表6 血清CCL20 RNAKL 25(OH)D水平與DAS28評(píng)分相關(guān)性的分析

3 討 論

RA的確切發(fā)病機(jī)制尚不明確，臨床表現(xiàn)主要為對(duì)稱性、侵蝕性多關(guān)節(jié)炎，是導(dǎo)致人類喪失勞動(dòng)力、甚至引起人類殘疾的主要疾病之一。RA發(fā)生與發(fā)展是遺傳因素、感染因素、環(huán)境因素等共同作用，引起異常的免疫反應(yīng)而導(dǎo)致的損傷和修復(fù)過程[7]。目前，RA不能根治，治療的主要目標(biāo)是達(dá)到臨床緩解，沒有明顯炎癥活動(dòng)癥狀和體征，或低疾病活動(dòng)度[8]。因此既可判斷RA活動(dòng)性，又可預(yù)測(cè)RA疾病進(jìn)展的生物學(xué)指標(biāo)的尋找至關(guān)重要。CCL20又名巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-3α(macrophage inflammatory protein-3α,MIP-3α)，與其受體CCR6結(jié)合后，激發(fā)特異性抗原免疫反應(yīng)，導(dǎo)致炎性細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)釋放，以多種不同途徑參與RA關(guān)節(jié)滑膜慢性炎癥、血管翳形成、關(guān)節(jié)軟骨及骨破壞的病理改變[9]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，相較于健康對(duì)照組，CCL20在RA患者中表達(dá)顯著升高，且CCL20血清水平與RA疾病的進(jìn)展呈正相關(guān)。這可能是CCL20促進(jìn)固有免疫細(xì)胞及獲得性免疫細(xì)胞活化，并轉(zhuǎn)移至關(guān)節(jié)，促進(jìn)IL-l、IL-6、TNF-α等炎性細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)相互募集，導(dǎo)致關(guān)節(jié)滑膜炎進(jìn)展。

在RA疾病進(jìn)展過程中，破骨細(xì)胞為關(guān)節(jié)軟骨和骨破壞的效應(yīng)細(xì)胞，RANKL屬于周圍炎性細(xì)胞因子，能夠啟動(dòng)前體破骨細(xì)胞的分化與成熟，與骨破壞的程度關(guān)系密切[10]。CCL20能夠通過促進(jìn)細(xì)胞融合、細(xì)胞簇的形成及MMP-9的釋放，刺激破骨細(xì)胞前體細(xì)胞群分化，并在RANKL作用下被激活成熟為破骨細(xì)胞，造成骨侵蝕[11]。這與本研究血清RANKL水平與RA疾病進(jìn)展呈正相關(guān)的結(jié)果一致。

本研究發(fā)現(xiàn)，相較于健康對(duì)照組，RA患者血清25(OH)D水平顯著降低，且相關(guān)性分析顯示，血清25(OH)D水平與疾病進(jìn)展呈負(fù)相關(guān)。25(OH)D是維生素D經(jīng)過2次羥化后的穩(wěn)定形式，25(OH)D缺乏，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞增殖、抗原提呈及抗體表達(dá)障礙，IL-2、IL-6等細(xì)胞因子釋放增多，加重細(xì)胞炎性損傷[12]。維生素D受體在樹突狀細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞表面高表達(dá)，能夠通過免疫系統(tǒng)抑制炎癥反應(yīng)，25(OH)D缺乏導(dǎo)致細(xì)胞旁分泌及自分泌障礙，炎癥反應(yīng)加重[13]。

綜上所述，血清CCL20、RNAKL水平與RA疾病進(jìn)展呈正相關(guān)，血清25(OH)D水平與RA疾病進(jìn)展呈負(fù)相關(guān)，CCL20、RNAKL、25(OH)D可作為監(jiān)測(cè)疾病活動(dòng)性的生物學(xué)指標(biāo)，協(xié)助醫(yī)生綜合、全面判斷患者病情。