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        氣管類器官在豬呼吸道冠狀病毒感染的發(fā)病機制和天然免疫應(yīng)答研究中的應(yīng)用

        2022-11-25 17:02:50JIANGCHENG-FAN,LILIANG,XUEMEI
        關(guān)鍵詞:基底上皮器官

        大部分冠狀病毒在體內(nèi)主要感染于呼吸道或腸道并造成機體損傷,嚴重威脅人類和動物的健康。豬呼吸道冠狀病毒(Porcine respiratory coronavirus,PRCoV)是豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)的自然性基因缺失變異株,與TGEV 基因組序列的同源性達96%,但其只對呼吸道具有嗜性,主要表現(xiàn)為非典型間質(zhì)性肺炎或輕微的亞臨床狀態(tài)。因此,PRCoV是一種潛在的研究人類呼吸道冠狀病毒的動物呼吸道冠狀病毒模型。然而,缺乏能夠模擬豬體內(nèi)復(fù)雜氣管上皮系統(tǒng)的可傳代細胞模型是阻礙研究PRCoV感染發(fā)病機制的瓶頸。

        近期發(fā)表于《Journal of Virology》的研究論文,報道了利用從豬氣管基底干細胞培養(yǎng)建立的氣管上皮類器官感染PRCoV。利用豬氣管上皮類器官模型,證明氣管類器官(Airway organoids,AOs)中的PRCoV感染強烈地誘導(dǎo)了早期I 型和III 型干擾素(IFN)反應(yīng),并上調(diào)了炎癥基因的表達,包括模式識別受體(PRR)和促炎性細胞因子。該研究從仔豬氣管上皮分離基底干細胞,建立了能夠長期培養(yǎng)的豬三維氣管上皮類器官(3DAOs),并能連續(xù)傳代和凍存復(fù)蘇。通過間接免疫熒光試驗(IFA)和單細胞轉(zhuǎn)錄組測序(sc-RNA-seq)分析證實,建立的豬3DAOs 包含了氣管上皮主要的3 種細胞類型:基底細胞、杯狀細胞和纖毛細胞,重現(xiàn)了豬體內(nèi)氣管上皮多種細胞的復(fù)雜結(jié)構(gòu)。該研究發(fā)現(xiàn),三維(3D)和二維(2D)的AOs 均可以感染PRCoV。而與在AOs和腸道類器官中成功復(fù)制的TGEV 不同,PRCoV 僅在AOs 中可以更好地增殖,而不是在腸道類器官中。此外,AOs中的PRCoV感染誘導(dǎo)了強烈的早期I 型和III 型IFN 反應(yīng),并上調(diào)了炎癥基因的表達,包括PRR和促炎細胞因子。

        該研究建立了豬源氣管基底上皮干細胞的長期培養(yǎng)的豬氣管上皮類器官模型,重現(xiàn)了體內(nèi)氣管復(fù)雜的上皮細胞結(jié)構(gòu)。并證實PRCoV 和TGEV 對3DAOs 和2DAOs 均易感,同時表明PRCoV 感染在AOs 中能夠誘導(dǎo)強烈的IFN 和炎癥反應(yīng),模擬了與體內(nèi)PRCoV 感染相關(guān)的過程。冠狀病毒受體的組織分布是冠狀病毒感染發(fā)病機制的決定因素之一。PRCoV是TGEV 的天然突變體,其S 基因序列大量缺失。PRCoV 和TGEV 均利用APN 作為主要的受體進入細胞,而AOs sc-RNA-seq 結(jié)果表明,豬APN 主要在AOs 的非纖毛分泌細胞中表達,與病毒介導(dǎo)的3 種主要細胞類型中IFN-β 和炎性細胞因子的表達譜一致,表明PRCoV 在呼吸道上皮細胞中的細胞嗜性很大程度上取決于細胞表面APN 的豐度。同時,PRCoV 誘導(dǎo)顯著的IFN 反應(yīng)以及高IFN 敏感性可能導(dǎo)致PRCoV體內(nèi)感染后的輕度臨床癥狀。但是該項研究也存在著一定的局限性。其中之一,由于該系統(tǒng)中缺乏免疫細胞,因此無法探究氣管上皮細胞和免疫細胞之間的相互作用。而通過將氣管上皮類器官與從同一供體獲得的免疫細胞共培養(yǎng),將免疫細胞引入培養(yǎng)系統(tǒng)可能會加深對呼吸道冠狀病毒感染發(fā)病機制的理解。此外,該系統(tǒng)不能排除研究結(jié)果中僅反映AOs的細胞組成或分化的可能性。總之,該研究建立了豬源氣管上皮基底干細胞的豬3D 和2D 氣管上皮類器官模型,其可以作為一種良好的PRCoV 感染模型,并為研究豬呼吸道感染提供有力的工具。

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