黎 明，扎拉嘎，滿 達，唐和斯，李云鵬，雙 金*

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古圣牧高科牧業(yè)有限公司，呼和浩特 010010）

脂肪酸β-氧化在為卵泡細胞成熟和發(fā)育提供能量［1］的同時也產(chǎn)生了過氧化物、羥基自由基及過氧化氫等活性氧，生理水平的活性氧有利于卵泡細胞成熟［2］，但大量的活性氧可能會破壞線粒體的DNA和蛋白質(zhì)，干擾線粒體功能并影響線粒體分布［3］。而且卵母細胞在氧化脅迫（由高濃度的活性氧引起氧化損傷）的情況下將產(chǎn)生大量的氧自由基，可能導(dǎo)致脂肪酸的過氧化反應(yīng)，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化氫、活潑醛類等過氧化產(chǎn)物。有研究認為，過氧化產(chǎn)物會破壞細胞的生物膜和核酸［2］。牛羊等大家畜卵泡細胞內(nèi)脂肪酸含量較高，脂肪酸β-氧化僅能消耗部分脂肪酸，而剩余脂肪酸容易受到過氧化的影響［3］。硒是谷胱甘肽過氧化物酶的組成成分，體內(nèi)適當(dāng)含量時可消除脂質(zhì)過氧化物的毒性作用，消除對卵泡細胞的迫害，促進卵泡發(fā)育。同時，黃體生成激素（LH）和卵泡生成激素（FSH）有利于卵泡的發(fā)育，即卵泡顆粒細胞和卵泡膜細胞層的形成［4］。雌激素（E2）和孕酮（P）是由卵泡顆粒細胞與卵泡膜細胞層共同參與完成的［4］。部分E2進入血液循環(huán)，丘腦下部和腦垂體對E2的低濃度產(chǎn)生反饋，分泌更多的FSH，刺激顆粒細胞，使得E2的分泌持續(xù)增加，最終達到排卵前的峰值，啟動LH分泌，觸發(fā)排卵。試驗將小球藻活性硒和蛋氨酸硒、亞硒酸鈉制成的富硒飼料添加劑添加于母羊飼糧中，探討硒對母羊發(fā)情周期生殖激素的影響，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 硒添加劑的制備

硒源：由有機硒和無機硒提供，其中有機硒由小球藻硒和蛋氨酸硒組成。小球藻硒元素凈含量為2 000 mg／kg；蛋氨酸硒由L-硒代蛋氨酸提供，分子式為C5H11NO2Se，硒元素凈含量為1 210.00 mg／kg；無機硒為亞硒酸鈉，分子式為Na2SeO3，硒元素凈含量為1.00%。

礦物質(zhì)原料：其中有鈣、硫、銅、鋅等4種礦物質(zhì)。鈣由磷酸氫鈣提供，分子式為CaHPO4·2H2O，鈣元素凈含量為23.26%；硫由元明粉（即無水硫酸鈉）提供，硫元素凈含量為22.53%；銅由硫酸銅提供，分子式為CuSO4·5H2O，銅元素凈含量為24.94%；鋅由硫酸鋅提供，分子式為ZnSO4·H2O，鋅元素凈含量為36.00%。

維生素原料：由維生素E和維生素B7組成。

其他原料：其他原料由抗氧化劑、稀釋劑和載體等組成。其中抗氧化劑為乙氧基喹啉，稀釋劑為碳酸鈣，載體為玉米面。

根據(jù)母羊繁殖需要選擇硒源，確定礦物質(zhì)原料和維生素原料添加量，制成富硒飼料添加劑，在母羊全價料中按1%比例添加。

1.2 試驗動物

2～3歲蒙古羊母羊20只，體重為（40±3）kg，健康，膘情達到繁殖要求。將20只母羊隨機分為2組，組間體重差異不顯著。

1.3 試驗設(shè)計

按照NRC標(biāo)準(zhǔn)（2007版）配制飼糧。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧（要求把母羊飼糧營養(yǎng)水平進行計算調(diào)整）［5］，試驗組飼喂含有1%富硒飼料添加劑的飼糧。試驗期為36 d，其中預(yù)試期為15 d、正試期為21 d。飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 飼糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Tab.1 The com position and nutritional level of the base diet（DM）

1.4 飼養(yǎng)管理

母羊全期舍飼，每組一欄。每天上午和下午定量飼喂全混合飼糧（TMR）各1次，自由飲水。并認真觀察母羊采食、反芻情況，發(fā)現(xiàn)異常羊只要查找原因并及時處置，做好記錄。

1.5 樣品的采集與制備

5 d的預(yù)飼期后給每只母羊肌內(nèi)注射1 mL氯前列腺烯醇（PG），隔8 d再注射PG 1mL，6 d后給每只羊安裝陰道栓，11 d后撤陰道栓并肌內(nèi)注射孕馬血清促性腺激素（PMSG）400 IU。每組隨機選取6只母羊，在撤栓前1天及發(fā)情周期第1，10，20天采血。3 500 r／min離心10 min，分離出血清，置于-20℃冰箱中保存，待測。

1.6 測定項目

測定指標(biāo)包括FSH、LH、E2和P，均用放射免疫分析法測定（試劑盒來自寶信生物科技有限公司）。

1.7 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)采用單因子方差分析（期間）和配對重復(fù)觀察值相等t檢驗（組間），均值的多重比較用鄧肯氏法。

2 結(jié)果與分析

母羊發(fā)情周期內(nèi)生殖激素測定結(jié)果見表2。

2.1 日糧中添加硒對母羊血清中E2含量的影響

見圖1。

由表2、圖1可知：日糧中添加硒的試驗組母羊血清E2含量除了撤栓前1天顯著高于對照組母羊（P＜0.05）外，其余時期組間均差異不顯著（P＞0.05）。不同時期2個組E2含量均呈先降低后略升高的趨勢。對照組血清E2含量在撤栓前1天最高，顯著高于其他三個時期（P＜0.05），在發(fā)情周期第1天顯著高于發(fā)情周期第10天（P＜0.05）；試驗組血清E2含量在撤栓前最高，極顯著高于其他三個時期（P＜0.01），在發(fā)情周期第1天極顯著高于發(fā)情周期第10，20天（P＜0.01）。

圖1 硒對母羊血清中E2含量影響趨勢Fig.1 Effect of selenium on E2 content in ewe serum

表2 母羊發(fā)情周期生殖激素測定結(jié)果Tab.2 Effect on reproductive hormones in ewe during oestrus cycle

2.2 日糧中添加硒對母羊血清中P含量的影響

見圖2。

圖2 硒對母羊血清中P含量影響趨勢Fig.2 Effect of selenium on P content in ewe serum

由表2、圖2可知：日糧中添加硒的試驗組母羊血清P含量除了發(fā)情周期第10天顯著高于對照組（P＜0.05）外，其余時期略高于對照組，但組間均差異不顯著（P＞0.05）。不同時期2個組P含量均呈先降低后升高的趨勢。對照組血清P含量在發(fā)情周期第20天最高；發(fā)情周期第1天最低，顯著低于其他時期（P＜0.05）；試驗組血清P含量在發(fā)情周期第10天最高；在發(fā)情周期第1天最低，顯著低于其他時期（P＜0.05）。

2.3 日糧中添加硒對母羊血清中LH含量的影響

見圖3。

圖3 對母羊血清中LH含量影響趨勢Fig.3 Effect of selenium on LH content in ewe serum

由表2、圖3可知：日糧中添加硒的試驗組母羊血清LH含量除了撤栓前1天顯著高于對照組（P＜0.05）外，其余時期組間均差異不顯著（P＞0.05）。不同時期2個組LH含量均呈降低趨勢。對照組血清LH含量在撤栓前1天最高，顯著高于發(fā)情周期第10，20天（P＜0.05）；試驗組血清LH含量也是在撤栓前1天最高，顯著高于發(fā)情周期第1，10天（P＜0.05），而與發(fā)情周期第20天之間差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 日糧中添加硒對母羊血清中FSH含量的影響

見圖4。

圖4 硒對母羊血清中FSH含量影響趨勢Fig.4 Effect of selenium on FSH content in ewe serum

由表2、圖4可知：日糧中添加硒的試驗組母羊血清FSH含量除了撤栓前1天顯著高于對照組（P＜0.05）外，其余時期組間均差異不顯著（P＞0.05）。不同時期2個組FSH含量均呈下降趨勢。

3 討論

本試驗中，試驗組血清E2、LH和FSH含量在撤栓前1天均顯著高于對照組，發(fā)情第10天血清P含量顯著高于對照組。動物卵母細胞發(fā)育所需能量主要來自于葡萄糖和脂肪酸，葡萄糖經(jīng)過三羧循環(huán)提供ATP，脂肪酸則通過β-氧化和三羧循環(huán)提供比葡萄糖更多的ATP［1］。脂肪酸β-氧化在為卵泡細胞成熟和發(fā)育提供能量的同時也產(chǎn)生了過氧化物、羥基自由基及過氧化氫等活性氧，生理水平的活性氧有利于卵泡細胞成熟［2］，但大量的活性氧可能會破壞線粒體的DNA和蛋白質(zhì)，干擾線粒體功能并影響線粒體分布，從而影響卵泡生長［3］。而且卵母細胞在氧化脅迫（由高濃度的活性氧引起氧化損傷）情況下，將產(chǎn)生大量的氧自由基，可能導(dǎo)致脂肪酸的過氧化反應(yīng)，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化氫、活潑醛類等過氧化產(chǎn)物。有研究認為，過氧化產(chǎn)物能破壞細胞的生物膜和核酸［4］。牛羊等大家畜卵泡細胞內(nèi)脂肪酸含量較高，脂肪酸β-氧化僅能消耗部分脂肪酸，而剩余脂肪酸容易受到過氧化的影響［1］。硒是谷胱甘肽過氧化物酶的組成成分，體內(nèi)含量適宜時可消除脂質(zhì)過氧化物的毒性作用，消除對卵泡細胞的迫害，促進卵泡發(fā)育。同時，LH和FSH有利于卵泡的發(fā)育，即卵泡顆粒細胞和卵泡膜細胞層的形成［5］。E2和P是由卵泡顆粒細胞與卵泡膜細胞層共同參與完成的［5］，部分E2進入血液循環(huán)，丘腦下部和腦垂體對E2的低濃度產(chǎn)生反饋，分泌更多的FSH，刺激顆粒細胞，使得E2的分泌持續(xù)增加，最終達到排卵前的峰值，啟動LH分泌，觸發(fā)排卵。

其次，由發(fā)情周期內(nèi)生殖激素含量的變化看，母羊血清E2濃度在撤栓前1天和發(fā)情第1天濃度較高，符合母羊排卵直前血清E2濃度最高的生理變化規(guī)律［5］；血清P濃度在發(fā)情周期第10～20 d進入高位態(tài)勢，說明早期胚胎已由囊胚期進入著床并結(jié)束賦植過程，同時卵巢進入黃體期；血清LH和FSH已完成卵泡成熟與排卵的任務(wù)，隨之進入下降階段。

4 結(jié)論

飼糧中添加活性硒使母羊血清生殖激素上升，尤其是撤栓前1天效果更明顯；在發(fā)情周期內(nèi)，血清E2含量在發(fā)情初期最高，P含量由發(fā)情周期第10天進入高位態(tài)勢，血清LH和FSH含量也是初期高、后進入下降態(tài)勢。說明飼糧活性硒可以促進母羊生殖激素的分泌。