魏鑫鑫,姚俊修,吳德軍,張仁堂*
(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院山東省高校食品加工技術(shù)與質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 泰安 271018;2.山東省林業(yè)科學(xué)研究院/山東省林木遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 濟(jì)南 250014)
忍冬科接骨木屬(Sambucus L.)植物大部分分布在地球北半球的溫帶和亞熱帶地區(qū),其品種可達(dá)20余種。我國(guó)的接骨木廣泛種植在我國(guó)的東北、西北至甘肅、西南至云南等地區(qū),本土品種有4種~5種,從國(guó)外引種栽培了1種~2種,如毛接骨木、血滿草和接骨草等[1-3]。
接骨木,又名接骨丹、大接骨丹、鐵骨散等,在5月~6月開花,9月~10月結(jié)果[4-5]。該植物含有糖及糖苷類、黃酮類、萜類、酚及酚苷類等生物活性物質(zhì),在世界范圍內(nèi)作為功能性成分廣泛用于食品、制藥、綠化以及洗護(hù)用品等[6-8]。接骨木根、莖、葉、花、果實(shí)均可入藥,用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、骨折等疾病[9],具有預(yù)防骨質(zhì)疏松、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抗艾滋病、降血糖、降血脂等[9-13]功能;另外接骨木還被用于制作各種飲料、果醬、果凍、果酒、調(diào)味品、眼霜以及洗發(fā)水等,同時(shí)還具有較高的觀賞價(jià)值[6,14-18]。本文對(duì)接骨木的活性成分及其功能進(jìn)行綜述,旨在為接骨木的合理開發(fā)和綜合利用提供理論基礎(chǔ)。
多糖(又叫多聚糖)是一類廣泛分布于自然界且具有多種生物活性的天然高分子化合物,是由10多個(gè)單糖(醛糖或酮糖)以α-糖苷鍵或β-糖苷鍵連接而成的碳水化合物聚合物,是生命有機(jī)體的重要組成部分,對(duì)維持機(jī)體正常生命活動(dòng)至關(guān)重要,分子量可達(dá)數(shù)萬(wàn)以上[19-20]。從植物、動(dòng)物以及微生物中提取的多糖具有抗氧化、抗腫瘤、抗疲勞、抗炎及抗菌等生物活性,又能控制細(xì)胞的分裂、分化,調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)與衰老[21-25]。
研究表明,從接骨木中提取、純化、冷凍干燥后的多糖為親水性淡黃色粉末。吳志誠(chéng)[26]采用傳統(tǒng)熱水提取法提取接骨木莖中的粗多糖,以溫度、料水比、時(shí)間為單因素設(shè)計(jì)試驗(yàn),得出料水比 1∶50(g/mL),在100℃溫度下浸提4 h為接骨木莖粗多糖的最佳提取工藝;分析了分別采用水提法、酸提法、超聲波輔助提取法、超聲波催化纖維素酶提取法提取接骨木葉粗多糖,提取率分別為7%、5.32%、6.78%、2.89%;并對(duì)提取的粗多糖進(jìn)行純化,按 1∶40(g/mL)在 100℃水中提取 3 h,加酶輔助,木瓜蛋白酶-TCA法(多糖溶液∶正丁醇=1∶1,體積比)脫蛋白質(zhì),多糖溶液與無(wú)水乙醇體積比為1∶4醇沉,接骨木粗多糖得率為15.36%。劉瑩等[27]研究表明,以1∶20(g/mL)的料液比,在85℃條件下提取3 h,接骨木莖粗多糖的提取率可達(dá)10.21%;之后劉瑩等[28]以接骨木葉為原料,得到75℃條件下,以1∶30(g/mL)料液比,提取3 h為接骨木葉粗多糖提取的最佳工藝,提取率可達(dá)15.52%;選擇石油醚、過(guò)氧化氫、木瓜蛋白酶法-三氯乙酸正丁醇聯(lián)合法對(duì)接骨木葉粗多糖進(jìn)行純化,純化后蛋白質(zhì)、糖、水分、灰分在接骨木葉粗多糖中的含量分別為5.38%、33.62%、12.56%、1.70%[29]。
黃酮類化合物是一類具有多種生理功能的天然生物活性成分,其特征是由一個(gè)雜環(huán)六元吡喃酮環(huán)連接的兩個(gè)苯環(huán),廣泛存在于水果、蔬菜和其他糧食作物中,是人類日常飲食中的重要組成部分,具有抗氧化、抗菌、抗腫瘤、抗病毒、降血脂等生物活性[30-34]。
蘇新芳等[13]用超聲波輔助提取接骨木葉總黃酮,結(jié)果表明最佳工藝參數(shù)為超聲頻率40 kHz、超聲功率500 W、料液比 1∶40(g/mL)、提取溫度 70℃、提取時(shí)間1 h,此時(shí)總黃酮提取率為18.67%;柳佳瑩[35]在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)響應(yīng)面試驗(yàn),得出接骨木葉總黃酮的最佳提取工藝:溫度70℃、時(shí)間1 h、乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、料液比 1∶70(g/mL),此條件下得率為 7.25%,純度為31.3%,后經(jīng)D101型大孔樹脂純化,純度可達(dá)70.30%;張爽等[36]采用響應(yīng)面法優(yōu)化接骨木葉總黃酮的提取工藝,得出接骨木葉總黃酮的提取量在料液比1∶19.53(g/mL),乙醇體積分?jǐn)?shù) 76.03%,超聲溫度40℃,超聲時(shí)間48.86 min條件下最大,為5.80 mg/g,超聲溫度對(duì)接骨木總黃酮提取率影響最??;李安林等[37]采用乙醇浸提法,得出提取溫度對(duì)接骨木莖總黃酮提取率的影響最大,乙醇濃度影響最小,以料液比1∶20(g/mL),乙醇濃度 95%,提取溫度 80℃,提取時(shí)間1 h為接骨木莖總黃酮的最佳提取工藝參數(shù)提取總黃酮,提取率可達(dá)1.37%。
花青素是一類帶有氧鎓離子的特殊水溶性天然植物色素,多以苷的形式廣泛存在于忍冬科植物的果實(shí)、根、莖、葉中[38-39]。其穩(wěn)定性較差,易受氧、溫度、光、酶、pH值影響,在高溫條件下易降解,而在酸性條件下穩(wěn)定[40-41],具有抗氧化、抗衰老、抗癌、抗炎、抗腫瘤、有效清除自由基和防止心血管疾病等[42-45]功能,特別是在抗氧化和清除自由基能力方面相當(dāng)于維生素C的20倍,因其安全無(wú)毒,被稱為目前最安全、最高效的天然抗氧化劑[46-47]。
于洪超等[48]以接骨木果實(shí)為原料,選用超聲波輔助提取法,得出料液比1∶40(g/mL),乙醇體積分?jǐn)?shù)69%,提取溫度49℃,提取時(shí)間0.5 h為接骨木花青素的最佳提取工藝,得率為2.54%。馮文娟等[49]以接骨木鮮果、干果為原料,采用乙醇浸提法提取花青素,此條件下花青素得率分別為0.43%和1.52%,后經(jīng)分離技術(shù)、正己烷萃取、大孔吸附樹脂(AB-8型)純化后,花青素得率分別為27.74%、29.32%,且正己烷純化花青素的效果較好。
接骨木具有多種生物活性,如Veberic等[50]從接骨木果實(shí)中鑒定出4種有機(jī)酸:檸檬酸、蘋果酸、莽草酸和延胡索酸;在槲皮素組中鑒別出槲皮素、槲皮素3-蘆丁苷和槲皮素3-葡萄糖苷,采用高效液相色譜發(fā)現(xiàn)有5個(gè)花青素峰。楊文松[51]以正丁醇萃取的接骨木花為研究對(duì)象,采用硅膠、聚酰胺柱、Sephadex LH-20等層析手段分離純化,在薄層色譜、核磁共振、質(zhì)譜、紅/紫外光譜等條件下,分離得到14個(gè)化合物及13個(gè)化合物結(jié)構(gòu)。另外,迄今為止,從接骨木屬植物分離出11個(gè)酚及酚苷類化合物,56個(gè)苯丙素類化合物,51個(gè)萜類化合物,35個(gè)黃酮類化合物以及13個(gè)生物堿類化合物等[2]。
接骨木具有較高的抗氧化活性,主要與接骨木果實(shí)的化學(xué)結(jié)構(gòu)和組成有關(guān),其富含酚類物質(zhì),對(duì)DPPH自由基的清除率約為82%~89%。李安林等[37]采用乙醇浸提法提取接骨木莖總黃酮,得出接骨木莖總黃酮對(duì)DPPH自由基活性的半數(shù)抑濃度IC50為23.81 μg/mL,表明總黃酮具有較強(qiáng)的抗氧化活性;馮文娟等[49]采用同樣的方法提取接骨木果實(shí)花青素,得出其質(zhì)量濃度與花青素對(duì)DPPH自由基清除能力成正比關(guān)系,在花青素質(zhì)量濃度為200 μg/mL時(shí),DPPH自由基的清除率為89.40%,相當(dāng)于維生素C的96.28%;柳佳瑩[35]將從接骨木葉中提取的總黃酮按照低(80.5 mg/kg)、中(161 mg/kg)、高(322 mg/kg)3 個(gè)劑量組,灌入小鼠胃中,再對(duì)小鼠的臟器、血液、股骨進(jìn)行藥理研究,得出接骨木葉總黃酮具有良好的抗氧化、抗骨質(zhì)疏松作用。Xiao等[14]從接骨木中分離出的香草酸,能刺激UMR106細(xì)胞增殖,增強(qiáng)堿性磷酸酶活性,改變成骨細(xì)胞功能和破骨細(xì)胞形成相關(guān)mRNA基因的表達(dá),證實(shí)了接骨木具有抗氧化、預(yù)防骨質(zhì)疏松癥、刺激堿性磷酸酶的活性、調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞等生理作用;Xiao等[52]以9個(gè)月的雌性鼠為模型,將去卵巢或假性手術(shù)的老齡鼠分組,口服給予低、中、高劑量接骨木12周,研究結(jié)果表明,接骨木中的木質(zhì)素能有效維持大鼠骨小梁和骨皮質(zhì)的健康、調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的形成過(guò)程,具有較強(qiáng)的抗骨質(zhì)疏松活性,同時(shí)在大鼠體內(nèi)具有抗氧化作用,在體外具有抑制血清合成的作用。
Roschek等[53]研究表明,從接骨木果實(shí)中提取的類黃酮是抗流感活性的重要組成部分,這些類黃酮分子通過(guò)合成5,7,30,40-4-O-甲基槲皮素和外消旋楊梅素與H1N1病毒粒子結(jié)合,在體外阻斷H1N1感染,阻止H1N1病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞,結(jié)合后的化學(xué)物質(zhì)再與H1N1病毒結(jié)合,阻止宿主細(xì)胞進(jìn)入或識(shí)別,進(jìn)而在體外抑制H1N1感染,達(dá)到抗病毒作用。雷用東等[11]以接骨木為原料,用提取物花色苷感染豬傳染性胃腸炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV) 的 豬 睪 丸(swine testicular,ST)貼壁細(xì)胞,研究表明花色苷濃度與ST存活數(shù)成正比關(guān)系,當(dāng)接骨木花色苷濃度為50 μg/mL時(shí),TGEV的活性最大,表明從接骨木中提取出的花色苷能有效抑制TGEV繁殖;而Torabian等[42]研究表明,高濃度的花青素能完全抑制流感病毒活性,低濃度花青素抑制抗流感病毒活性的能力較弱,其作用機(jī)理有:直接抑制病毒進(jìn)入;抑制病毒從細(xì)胞到細(xì)胞的傳播;調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的釋放,間接抑制病毒進(jìn)入。另外,Neves等[54]從接骨木中提取花青素,通過(guò)無(wú)細(xì)胞試驗(yàn)證實(shí),花青素對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)的毒性神經(jīng)具有保護(hù)作用,通過(guò)增強(qiáng)酶的活性及細(xì)胞的抗氧化防御能力對(duì)魚藤酮等氧化毒性刺激提供神經(jīng)保護(hù)作用。Weng等[55]指出接骨木莖乙醇提取物和一些酚酸(咖啡酸、綠原酸和沒食子酸)成分具有抗HCoV-NL63病毒活性。文獻(xiàn)[56-57]研究表明從接骨木中分別提取得到的落葉松樹脂醇、(+)-皮樹脂醇都具有抗真菌作用。趙淑紅等[58]從接骨木中提取的齊墩果酸、熊果酸也同樣具有抗病毒活性,可以有效治療急性病毒性肝炎。
王丹蕊等[59]研究多糖對(duì)大鼠糖尿病的調(diào)節(jié)作用,對(duì)幾種不同來(lái)源的植物多糖進(jìn)行比較,對(duì)雄性SD大鼠腹腔注射鏈脲菌素,設(shè)置對(duì)照試驗(yàn),利用動(dòng)態(tài)血糖測(cè)量方法得出結(jié)論,接骨木多糖能有效降低鏈脲佐菌素誘發(fā)糖尿病大鼠的血糖,同時(shí)血漿內(nèi)高密度脂蛋白水平明顯升高。Lv等[60]采用高壓液法提取接骨木種子油,用尿素包合法分離出亞油酸,采用不同濃度的亞油酸飼喂高脂血癥小鼠,通過(guò)亞油酸對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制作用的測(cè)定,得出接骨木中的亞油酸具有良好的降血脂、降血糖活性。
研究表明,接骨木除了具有抗氧化、抗骨質(zhì)疏松、抗炎、抗病毒、抗真菌、降血糖、降血脂活性外,還具有抗腫瘤、抗衰老、促進(jìn)骨折愈合、增強(qiáng)免疫以及影響成骨細(xì)胞增殖和分化等活性[9-13]。努爾曼·衣西堅(jiān)等[61]采用酶聯(lián)免疫法,證明了接骨木提取物能增強(qiáng)大鼠骨代謝情況,能有效促進(jìn)大鼠骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的合成,增強(qiáng)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞活性,促進(jìn)骨折愈合。宋琳亮等[62]采用熱水浸提法提取的接骨木莖多糖喂養(yǎng)大鼠,確定多糖對(duì)大鼠胰島細(xì)胞活力、細(xì)胞活性(四氧嘧啶感染后)以及接骨木莖多糖和四氧嘧啶共同對(duì)大鼠胰島細(xì)胞分泌胰島素功能的影響,結(jié)果表明接骨木莖多糖能促進(jìn)大鼠胰島細(xì)胞的增殖,避免大鼠胰島細(xì)胞遭受四氧嘧啶損傷。
接骨木作為一種植物,分布廣泛,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高,含有多種生物活性成分,除了具有預(yù)防骨質(zhì)疏松、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗腫瘤等作用,還具有護(hù)肝、保護(hù)神經(jīng)、抗抑郁等多種生理功能,并且在養(yǎng)生、飲食以及綠化美觀等方面被廣泛使用。近幾年來(lái),國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)接骨木抗炎、促進(jìn)骨折愈合等功能、接骨木的根皮和莖皮的化學(xué)成分、藥理作用以及對(duì)接骨木的生物活性物質(zhì)進(jìn)行提取分離、純化,發(fā)現(xiàn)接骨木在生理藥理功能方面的開發(fā)潛力巨大。但目前接骨木生物活性物質(zhì)以基礎(chǔ)研究為主,對(duì)其結(jié)構(gòu)鑒定及藥效機(jī)理的研究尚缺乏深入和系統(tǒng)的研究。
因此,加深對(duì)接骨木生物活性物質(zhì)的高效提取、分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定和藥理機(jī)理的研究,建立多種簡(jiǎn)單有效的實(shí)驗(yàn)?zāi)P?,?duì)接骨木各部分在臨床上的應(yīng)用,開發(fā)深層次接骨木藥品,促進(jìn)接骨木深加工、產(chǎn)業(yè)發(fā)展以及提高農(nóng)產(chǎn)品附加值、提高農(nóng)民收入、預(yù)防疾病、促進(jìn)人類健康等具有十分重要的意義。