文│毛鵬飛 （山東省博興縣畜牧獸醫(yī)服務(wù)中心）

豬鏈球菌病是豬場(chǎng)常見的細(xì)菌性傳染病，其病原菌——豬鏈球菌是一種人畜共患致病性病原菌，全世界已有30多個(gè)國(guó)家共報(bào)告過超過1600例人感染病例，但這樣的數(shù)字可能是被低估的，因?yàn)樵S多病例可能被誤診而未被報(bào)告。豬鏈球菌病在1998年江蘇地區(qū)和2005年四川資陽(yáng)地區(qū)流行病期間造成人死亡病例。

豬鏈球菌根據(jù)細(xì)菌莢膜抗原的不同可被分為33個(gè)血清型，分別為1-31、33和1/2型，不同的血清型以及相同血清型不同菌株的致病力均不同。新的研究表明20、22和26型的基因與其他血清型不同，被定義為副豬鏈球菌（Streptococcus parasuis）。對(duì)豬致病的血清型包括1、2、3、7、9、14、22和1/2型，按照臨床病理流行率可知最常被分離出的血清型依次為2型、9型和3型。9型多是在歐洲感染豬病例中被分離出來的。其中2型（Streptococcus suis 2，SS2）致病力最強(qiáng)，引起豬鏈球菌病的最主要病原就是SS2，其還可以通過傷口和呼吸道等途徑感染人，SS2引起的豬鏈球菌病幾乎所有養(yǎng)豬國(guó)家均有報(bào)道，經(jīng)濟(jì)損失和公共衛(wèi)生影響巨大。

由于規(guī)?；B(yǎng)殖模式下飼養(yǎng)密度大、豬只抗逆性差、豬場(chǎng)生物安全防控不合規(guī)、病原變異和病原耐藥性嚴(yán)重等原因，豬鏈球菌病在臨床上易發(fā)生且很容易和其他幾種疾病混合感染、繼發(fā)感染，因此需要對(duì)豬鏈球菌病的發(fā)病機(jī)制、鑒定方法和現(xiàn)有的疫苗進(jìn)展進(jìn)行綜述，這對(duì)該傳染病的防控和豬場(chǎng)安全生產(chǎn)具有積極意義。

一、發(fā)病機(jī)制

仔豬可能通過垂直傳播感染，即通過母豬的菌群微生物感染，或者通過與豬群其他成員的接觸進(jìn)行水平傳播。豬鏈球菌能夠在糞便、灰塵和水中長(zhǎng)期存活。蒼蠅可以攜帶這種細(xì)菌，經(jīng)蒼蠅攜帶的細(xì)菌能持續(xù)感染5天以上，因此蒼蠅被認(rèn)為是豬鏈球菌感染的重要媒介。豬鏈球菌還可通過氣溶膠傳播。人感染的途徑可能是飼養(yǎng)者通過呼吸道被感染，也可能通過傷口接觸受感染的動(dòng)物或受污染的肉類?；蚴秤梦粗笫斓母腥矩i肉，因?yàn)椴≡梢远ㄖ膊⒋┻^消化系統(tǒng)的上皮屏障。

豬鏈球菌結(jié)構(gòu)及致病機(jī)制極其復(fù)雜，以研究最多的SS2為代表。SS2的莢膜多糖、細(xì)胞外因子、反轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，胞壁糖化蛋白、溶血素、粘附素、豬鏈球菌類細(xì)菌素抑制物、纖維連接蛋白結(jié)合蛋白和谷氨酸脫氫酶在該病原菌的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。豬鏈球菌的感染步驟主要是：

豬鏈球菌表達(dá)幾種蛋白質(zhì)因子，粘附到細(xì)胞或細(xì)胞外基質(zhì)成分（如纖維連接蛋白），從而在宿主身上定殖。莢膜多糖能夠保護(hù)細(xì)菌不被宿主免疫系統(tǒng)吞噬和清除。

一旦病原菌在宿主中存活，就能通過溶血素溶解上皮細(xì)胞進(jìn)行血液傳播。溶血素并不是豬鏈球菌穿過上皮細(xì)胞傳播的惟一因素，其他機(jī)制尚未被研究清楚。一旦進(jìn)入血液，豬鏈球菌必須逃離或抵抗宿主的免疫系統(tǒng)才能持續(xù)感染。多糖莢膜在這一階段起著重要作用，因?yàn)樗Ｗo(hù)細(xì)菌免受中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的吞噬，還幫助細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)存活。豬鏈球菌還可以粘附在單核細(xì)胞表面，以逃避免疫系統(tǒng)。豬鏈球菌菌株產(chǎn)生H結(jié)合蛋白，它能幫助豬鏈球菌抵抗免疫系統(tǒng)的吞噬作用。

豬鏈球菌的多種成分可觸發(fā)宿主的促炎反應(yīng)，促炎反應(yīng)被過度激活可能引發(fā)感染性休克。這種反應(yīng)可以增加血腦屏障的通透性，誘發(fā)腦膜炎，在此過程中豬鏈球菌向大腦移動(dòng)。

病原菌穿過血腦屏障，侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致被感染豬和人的腦膜炎。豬鏈球菌感染的嚴(yán)重臨床癥狀之一是發(fā)展為腦膜炎，并伴有永久性后遺癥，如聽力損失。華中農(nóng)業(yè)大學(xué)研究發(fā)現(xiàn)豬鏈球菌產(chǎn)生的透明質(zhì)酸酶能夠與血管生成素抑制劑結(jié)合，觸發(fā)宿主體內(nèi)血管生成素的激活，導(dǎo)致血管通透性增加，從而幫助豬鏈球菌穿過血腦屏障。

二、鑒定方法

由豬鏈球菌引起的豬鏈球菌病不可預(yù)測(cè)，發(fā)病快速，病程嚴(yán)重，因此對(duì)該病的及時(shí)診斷和提前干預(yù)十分重要。

1.臨床檢查和病理剖檢。檢查眼結(jié)膜、鼻黏膜、陰道黏膜等是否潮紅和發(fā)紺，檢查皮膚顏色是否有紫紅、蒼白等狀況，檢查糞尿顏色、糞便形狀，檢查呼吸頻率、心率和直腸溫度等。

檢查體表淋巴結(jié)有無出血、腫大、化膿及壞死等，檢查腹腔、胸腔有無積液，檢查腦膜出血、腦水腫等。

2.常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)方法。從受感染動(dòng)物的典型病變器官中分離出細(xì)菌，通過細(xì)菌形態(tài)、細(xì)菌培養(yǎng)和細(xì)菌生化特性對(duì)豬鏈球菌進(jìn)行初步鑒定。含有慶大霉素、結(jié)晶紫、萘啶酸和5%脫蛋白牛血的胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)豬鏈球菌。菌落呈針尖大小，圓形，露珠狀，半透明，革蘭氏染色顯示革蘭氏陽(yáng)性球菌呈單或雙排列，并伴有少量短鏈。不同類型豬鏈球菌的生化檢測(cè)結(jié)果差異很大，細(xì)菌的形態(tài)和培養(yǎng)特征很難分型，需要其他檢測(cè)方法才能準(zhǔn)確鑒定。

3.免疫學(xué)方法。免疫分析技術(shù)利用抗原和抗體之間的高度特異性結(jié)合特性，根據(jù)這種結(jié)合引起的特異性反應(yīng)進(jìn)行定量或定性檢測(cè)?，F(xiàn)代免疫學(xué)技術(shù)已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了高度靈敏和快速高通量的診斷檢測(cè)，并通過引入酶催化反應(yīng)、熒光或同位素標(biāo)記作為特異性標(biāo)記，發(fā)展成為多種免疫分析方法。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）基于免疫分析技術(shù)，利用酶催化反應(yīng)增強(qiáng)特異性抗原抗體反應(yīng)的敏感性，適用于豬鏈球菌感染的大規(guī)模現(xiàn)場(chǎng)診斷，現(xiàn)已發(fā)展出多種新型ELISA技術(shù)，成熟的商業(yè)試劑盒應(yīng)用廣泛。膠體金免疫層析法（GICA）操作方便，結(jié)果明確，無需復(fù)雜的操作、技術(shù)和專用設(shè)備。免疫熒光法，操作簡(jiǎn)單，靈敏度和特異性高，納米技術(shù)的發(fā)展為免疫熒光分析帶來了新的機(jī)遇，被認(rèn)為是病原體分析最有前景的分析技術(shù)。表面增強(qiáng)拉曼散射光譜（SERS），臨床應(yīng)用潛力巨大。免疫磁珠分離（IMS）利用抗原和抗體的特異性反應(yīng)以及磁珠的磁響應(yīng)進(jìn)行分離和富集的技術(shù)，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、分離速度快的特點(diǎn)，可以消除基質(zhì)干擾，富集復(fù)雜樣本中的目標(biāo)檢測(cè)對(duì)象。免疫傳感器最終將特異性結(jié)合或化學(xué)變化轉(zhuǎn)換為輸出信號(hào)，不受干擾，分為電化學(xué)免疫傳感器、質(zhì)量檢測(cè)免疫傳感器、光學(xué)免疫傳感器和熱量測(cè)定傳感器。

4.分子檢測(cè)。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)，開發(fā)血清型特異性PCR檢測(cè)方法，用于快速、靈敏地檢測(cè)多個(gè)血清型的豬鏈球菌。多重引物PCR，是在傳統(tǒng)PCR基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種PCR擴(kuò)增技術(shù)，采用多對(duì)特異性引物在PCR系統(tǒng)中同時(shí)擴(kuò)增不同的DNA片段，大大提高了檢測(cè)效率。熒光定量PCR，不僅具有傳統(tǒng)PCR擴(kuò)增效率高的特點(diǎn)，而且具有光譜技術(shù)的高特異性、高靈敏度和高精度的特點(diǎn)，而且熒光定量PCR可以區(qū)分是當(dāng)前感染和先前感染，這是免疫學(xué)分析無法做到的一個(gè)方面。環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）、DNA芯片和脈沖場(chǎng)凝膠電泳等技術(shù)也被廣為應(yīng)用。

三、疫苗進(jìn)展

豬鏈球菌病防控最關(guān)鍵是要注重生物安全，注重消毒、營(yíng)養(yǎng)平衡和飼養(yǎng)管理，但疫苗的研發(fā)是最受期待的防控措施。由于豬鏈球菌也是一種人畜共患病，因此活疫苗的安全性是一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題，引入活疫苗的風(fēng)險(xiǎn)尚未完全確定，需要進(jìn)一步研究。在減毒活疫苗的免疫研究中，動(dòng)物模型、劑量、注射次數(shù)和其他參數(shù)各不相同，因此很難進(jìn)行直接比較。不能完全排除豬中的減毒菌株在人類中未完全減毒的可能性。感染豬群多是感染了多種豬鏈球菌菌株或血清型的，需要疫苗提供強(qiáng)烈交叉保護(hù)，以充分控制感染。亞單位疫苗夠抵抗異源血清型菌株的感染，亞單位疫苗也是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。