孟 飛，周小華，袁耀佐*

1 江蘇省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，南京 210019;2 南京中醫(yī)藥大學(xué)，南京 210023；3 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局化學(xué)藥物雜質(zhì)譜研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京 210019

20 世紀(jì)40 年代氨基糖苷類抗生素被發(fā)現(xiàn)，隨后幾十年逐漸發(fā)展并應(yīng)用于臨床，用于治療各種各樣的感染。隨著臨床應(yīng)用研究發(fā)現(xiàn)各種氨基糖苷類抗生素存在不同程度的耳、腎毒性，導(dǎo)致該類抗生素的臨床應(yīng)用開(kāi)始減少。隨著耐多藥病原體的出現(xiàn)，此類抗生素又重新煥發(fā)了生機(jī)[1]。為保證其臨床應(yīng)用安全、合理、有效，將藥物分析與其結(jié)合可以有效實(shí)現(xiàn)質(zhì)量控制。早期對(duì)于氨基糖苷類抗生素的分析采用微生物鑒定、TLC 法，隨著高效液相色譜法的發(fā)展，新型檢測(cè)器開(kāi)始用于氨基糖苷類抗生素的檢測(cè)，例如蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）、脈沖安培檢測(cè)器（PAD）、電噴霧檢測(cè)器（CAD）等，由于篇幅原因，本研究不對(duì)質(zhì)譜進(jìn)行介紹，僅介紹新型水凝聚核粒子計(jì)數(shù)蒸發(fā)光檢測(cè)器（NQAD）在氨基糖苷類抗生素領(lǐng)域的應(yīng)用，為其質(zhì)量檢測(cè)提供新的思路。

1 氨基糖苷類抗生素概述

氨基糖苷類抗生素（aminoglycoside antibiotics，AGs）是由氨基糖分子與氨基環(huán)醇通過(guò)醚鍵連接而成的苷類抗生素，分為天然和半合成兩大類。天然來(lái)源的包括由鏈霉菌屬培養(yǎng)液中提取獲得的鏈霉素、卡那霉素、妥布霉素、新霉素、大觀霉素等，由小單孢菌屬培養(yǎng)液中提取獲得的慶大霉素、西索米星、小諾米星等，英文名稱后綴一般分別為-mycin和-micin。半合成的氨基糖苷類抗生素是由發(fā)酵來(lái)源的氨基糖苷類抗生素為前體，通過(guò)結(jié)構(gòu)改造而得到，主要有阿米卡星、奈替米星、依替米星、地貝卡星、阿貝卡星等[2，3]。

AGs 是一類臨床上治療細(xì)菌感染的重要抗生素，其具有抗菌譜廣、殺菌效果強(qiáng)等特點(diǎn)。AGs 的抗菌機(jī)制主要通過(guò)干擾細(xì)菌蛋白質(zhì)合成而發(fā)揮效果，包括抑制70S 始動(dòng)復(fù)合物形成、與30S 亞基蛋白結(jié)合，導(dǎo)致氨基酸錯(cuò)配和錯(cuò)誤蛋白產(chǎn)生、阻止終止密碼子與核蛋白蛋白體結(jié)合等多種方式[4，5]。臨床上，AGs 對(duì)包括需氧革蘭陰性桿菌、金黃葡萄球菌、沙門(mén)桿菌等多種致病菌導(dǎo)致的感染具有較好的效果，同時(shí)抗生素后效應(yīng)以及與β-內(nèi)酰胺類抗生素協(xié)同作用使得AGs 更具臨床價(jià)值。盡管氨基糖苷類抗生素有著耳、腎毒性，但對(duì)于治療革蘭陰性菌引起的感染有著顯著效果，在臨床上有很重要的作用[6]。

2 氨基糖苷類抗生素檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展

AGs 不含共軛結(jié)構(gòu)，多無(wú)紫外吸收，且具有極性強(qiáng)、揮發(fā)性差等特點(diǎn)，檢測(cè)相對(duì)困難。根據(jù)時(shí)間及其檢測(cè)能力、方法的變化可大致分為以下四個(gè)階段[3]：

第一階段：1970 年以前，微生物檢定法，主要用于評(píng)價(jià)產(chǎn)品的效價(jià)，既無(wú)組分控制也無(wú)有關(guān)物質(zhì)檢查。

第二階段：1970～1990 年，以“半定量法控制雜質(zhì)限度”為主，例如TLC 法，在柱層析等技術(shù)應(yīng)用前被廣泛用于抗生素相關(guān)物質(zhì)的限度控制。

第三階段：1990～2003 年，衍生化色譜聯(lián)用檢測(cè)技術(shù)“間接檢測(cè)”主成分純度。氨基糖苷類抗生素絕大部分沒(méi)有紫外吸收或者有很弱的末端紫外吸收，因此衍生化成為此類抗生素早期質(zhì)量控制常用技術(shù)，通過(guò)衍生化試劑與待測(cè)物發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生有紫外吸收的基團(tuán)。

第四階段：2003 年后，HPLC-非衍生化法“直接檢測(cè)”主成分和/或有關(guān)物質(zhì)。檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展使得包括HPLC-ELSD 和HPLC-PAD 等非衍生化檢測(cè)技術(shù)被用于AGs 組分和有關(guān)物質(zhì)的控制與評(píng)價(jià)，并逐漸成為主流選擇。隨著HPLC 法應(yīng)用范圍的擴(kuò)大以及檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步，檢測(cè)器的種類也越來(lái)越多，其靈敏度和重現(xiàn)性越來(lái)越好。新型氣溶膠檢測(cè)器如CAD、水凝聚核粒子計(jì)數(shù)蒸發(fā)光檢測(cè)器（NQAD）的出現(xiàn)，可以彌補(bǔ)ELSD 和PAD 的不足，為氨基糖苷類抗生素的檢測(cè)提供更多選擇性。

目前國(guó)內(nèi)外藥典中AGs 質(zhì)量控制的主要檢測(cè)手段包括微生物檢定、TLC、衍生化HPLC-UV、HPLC-ELSD、HPLC-PAD 等，見(jiàn)表1。

表1 氨基糖苷類抗生素在現(xiàn)行藥典中收載情況以及組分及/或有關(guān)物質(zhì)測(cè)定一覽[3]

2.1 微生物檢定法

微生物檢定法是利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散作用，采用量反應(yīng)平行線原理，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩者對(duì)接種的試驗(yàn)菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測(cè)定供試品效價(jià)，該方法被各國(guó)藥典廣泛采用于AGs 的含量測(cè)定。

微生物檢定法具有設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉、適于推廣使用等優(yōu)點(diǎn)，而且直觀地反映了樣品的抗菌能力，符合臨床治療要求。但一方面整個(gè)檢測(cè)存在周期長(zhǎng)且程序復(fù)雜、干擾因素多等缺點(diǎn)，另一方面微生物檢定法選擇性差，該方法反映的是藥物的總效價(jià)，不僅包括抗生素，其雜質(zhì)和副產(chǎn)物等有可能存在抗菌活性。因此該方法反映不出產(chǎn)品間的質(zhì)量差別，不能達(dá)到監(jiān)控藥品質(zhì)量的目的。

2.2 薄層色譜法（TLC）

薄層色譜法系將供試品溶液點(diǎn)于薄層板上，在展開(kāi)容器內(nèi)用展開(kāi)劑展開(kāi)，使供試品所含成分分離，所得色譜圖與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖對(duì)比，并可用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，用于鑒別、檢查或含量測(cè)定[7]。

該方法設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便快捷、結(jié)果直觀、兼具分離鑒定雙重功能等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于藥物分析[8]。但存在影響因素多，靈敏度差，定量困難等問(wèn)題，且薄層板的質(zhì)量、顯色劑用量、外界環(huán)境因素對(duì)層析行為的影響、操作技巧等均會(huì)影響色譜質(zhì)量，產(chǎn)生結(jié)果誤差。

2.3 衍生化HPLC-UV/FLD 法

由于氨基糖苷類抗生素結(jié)構(gòu)中缺少生色團(tuán)/助色團(tuán)和熒光團(tuán)，直接采用紫外檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器通常難以檢測(cè)，因此需要采用衍生化的方法為氨基糖苷類抗生素引入生色團(tuán)/助色團(tuán)和熒光團(tuán)，以利于檢測(cè)。衍生化HPLC-UV/FLD 法是利用氨基糖苷類抗生素結(jié)構(gòu)中的活潑基團(tuán)(如氨基、羰基)與衍生化試劑形成紫外區(qū)、使之有吸收或有熒光的官能團(tuán)，以便于紫外檢測(cè)或熒光檢測(cè)[9]。衍生化方法可分為柱前衍生和柱后衍生兩種。柱前衍生是將待測(cè)物與衍生化試劑進(jìn)行反應(yīng)，使待測(cè)物具有生色團(tuán)或熒光團(tuán)，其優(yōu)點(diǎn)是反應(yīng)條件、反應(yīng)時(shí)間以及衍生化試劑不受色譜條件的影響，同時(shí)柱前衍生也不需要多余的儀器設(shè)備；缺點(diǎn)是操作繁瑣，定量不準(zhǔn)確。柱后衍生是通過(guò)柱后衍生儀器將衍生化試劑與待測(cè)分析物在儀器中進(jìn)行反應(yīng)然后進(jìn)行檢測(cè)，優(yōu)點(diǎn)是減少人為誤差、操作簡(jiǎn)便，可以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化控制；缺點(diǎn)是需要額外的儀器設(shè)備，同時(shí)對(duì)于衍生化試劑也有限制[9-11]。在早期美國(guó)藥典、英國(guó)藥典、歐洲藥典、中國(guó)藥典中，衍生化方法一直有著重要作用。例如早期各國(guó)藥典通過(guò)衍生化方法對(duì)硫酸慶大霉素質(zhì)量進(jìn)行控制。2020 版《中國(guó)藥典》[7]采用衍生化方法對(duì)阿米卡星進(jìn)行質(zhì)量控制。由于硫酸依替米星沒(méi)有紫外吸收，張玫等[9]采用柱前衍生測(cè)定其含量，趙敬丹等[12]采用HPLC-FLD 法建立了硫酸卡那霉素注射液有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制方法。但是由于衍生化法操作復(fù)雜耗時(shí)；各種實(shí)驗(yàn)因素須進(jìn)行優(yōu)化研究;衍生條件難以控制，重復(fù)性低；衍生化反應(yīng)復(fù)雜，一種樣品可能產(chǎn)生多種衍生產(chǎn)物，且衍生試劑也會(huì)干擾檢測(cè)，從而無(wú)法明確判斷檢測(cè)到的雜質(zhì)的來(lái)源[13]。

2.4 HPLC-ELSD 法

ELSD 通常由3 部分組成，即霧化器、漂移管和光散色池。此類檢測(cè)器屬于質(zhì)量通用性檢測(cè)器，待測(cè)物質(zhì)不需要具備生色團(tuán)或螢光團(tuán)，它是根據(jù)待測(cè)物通過(guò)光散色池，激光照射待測(cè)物，則待測(cè)物對(duì)光進(jìn)行散射，通過(guò)檢測(cè)器將光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)。其檢測(cè)過(guò)程分為3 個(gè)步驟：霧化、蒸發(fā)、檢測(cè)。霧化階段：將色譜柱洗脫出來(lái)的液體通過(guò)氮?dú)膺M(jìn)行噴霧形成小液滴；蒸發(fā)階段：流動(dòng)相包裹待測(cè)物形成的小液滴通過(guò)漂移管，揮發(fā)性的流動(dòng)先被蒸發(fā)形成待測(cè)物小顆粒；檢測(cè)階段：待測(cè)物小顆粒通過(guò)激光對(duì)光進(jìn)行散射，檢測(cè)器將光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，從而記錄色譜圖。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是待測(cè)物不需要具有生色團(tuán)或熒光團(tuán)，缺點(diǎn)是其根據(jù)光的散射對(duì)待測(cè)物進(jìn)行檢測(cè)，不同的物質(zhì)具有不同的光散射強(qiáng)度，同時(shí)由于顆粒大小程度的不同，對(duì)光的散射程度也不一樣，這就導(dǎo)致不同物質(zhì)響應(yīng)不一樣。另外，對(duì)待測(cè)物和流動(dòng)相也有特殊要求，比如待測(cè)物需要具有不揮發(fā)性或半揮發(fā)性的性質(zhì)，流動(dòng)相要具有揮發(fā)性，這大大限制了流動(dòng)相的選擇，如果一些雜質(zhì)分離度達(dá)不到要求，可能需要添加一些離子對(duì)試劑，離子對(duì)試劑的選擇也要具有揮發(fā)性，導(dǎo)致選擇范圍變窄，又比如調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH，也要求酸或堿具有揮發(fā)性，同時(shí)酸堿的加入也會(huì)引起基線噪音變大；另外待測(cè)物峰面積與濃度不成線性關(guān)系，而是對(duì)數(shù)關(guān)系，使計(jì)算繁瑣[14-16]。2020 版《中國(guó)藥典》中大部分氨基糖苷類抗生素的質(zhì)量控制采用HPLCELSD 法。姚永青等[17]采用HPLC-ELSD 法對(duì)硫酸慶大霉素顆粒中的C 組分進(jìn)行研究；趙衛(wèi)等[18]采用HPLC-ELSD 法建立了硫酸依替米星氯化鈉注射液有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制方法；鞏麗萍等[19]采用HPLCELSD 法建立了注射用鹽酸大觀霉素含量和有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制方法；趙敬丹等[12]采用HPLC-ELSD法建立了硫酸卡那霉素注射液有關(guān)物質(zhì)質(zhì)量控制方法；Wang J 等[20]采用HPLC-ELSD 法建立了硫酸蛭菌素有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制方法，將蛭菌素與相關(guān)雜質(zhì)分離度良好，同時(shí)通過(guò)HPLC-MS 對(duì)相關(guān)雜質(zhì)進(jìn)行了表征；王金鳳等[21]采用HPLC-ELSD 法建立了硫酸卡那霉素注射液含量測(cè)定方法。此方法在《中國(guó)藥典》中發(fā)揮了巨大作用，隨著應(yīng)用的深入，一些問(wèn)題逐漸暴露出來(lái)，例如重復(fù)性及重現(xiàn)性不佳，其原因有儀器自身原因，如漂移管長(zhǎng)時(shí)間使用易產(chǎn)生污染，光源長(zhǎng)時(shí)間使用不穩(wěn)定，氣體流速不穩(wěn)定等；其次還有操作人員所致的人為誤差[3]。

2.5 HPLC-PAD 法

高效液相色譜-電化學(xué)法是根據(jù)電化學(xué)原理和物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行的，用于檢測(cè)在液相色譜中具有電活性的物質(zhì)，電化學(xué)檢測(cè)器有安培、極譜、庫(kù)侖和電導(dǎo)檢測(cè)器4 種，PAD 應(yīng)用較為廣泛，它是利用外加電壓，使待測(cè)物在電極表面發(fā)生氧化還原反應(yīng)，從而產(chǎn)生電流[22]。PAD 檢測(cè)器靈敏度高，專一性強(qiáng)，可用于沒(méi)有紫外吸收或不能發(fā)出熒光、但具有電活性的物質(zhì)的檢測(cè)，例如糖醛、氨基糖和氨基酸等。同時(shí)操作簡(jiǎn)單，對(duì)流動(dòng)相的揮發(fā)性沒(méi)有要求，成為繼HPLC-UV 及HPLC-ELSD 后應(yīng)用前景廣泛的檢測(cè)器之一，許多國(guó)家也越來(lái)越關(guān)注電化學(xué)檢測(cè)器法。2020 版《中國(guó)藥典》采用HPLC-PAD 法對(duì)依替米星進(jìn)行質(zhì)量控制，BP 2021 版有5 類氨基糖苷類抗生素采用HPLC-PAD 法進(jìn)行質(zhì)量控制，USP43-NF38 有3 類氨基糖苷類抗生素采用HPLC-PAD 進(jìn)行質(zhì)量控制。王琰等[24]使用四電位HPLC-PAD 法測(cè)定鹽酸大觀霉素及有關(guān)物質(zhì)；熊雯等[25]采用HPLCPAD 法測(cè)定硫酸慶大霉素氯化鈉注射液中慶大霉素C 組分及有關(guān)物質(zhì)；朱曉玥等[26]采用HPLC-PAD法測(cè)定硫酸依替米星氯化鈉注射液中有關(guān)物質(zhì)。電化學(xué)檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是只要流動(dòng)相不具有電化學(xué)活性即可，比ELSD 的流動(dòng)相選擇范圍更加大，PAD對(duì)于流動(dòng)相要求低，可根據(jù)需要添加酸堿鹽、離子對(duì)試劑、調(diào)節(jié)pH 值[23]；在檢測(cè)方面，相對(duì)于ELSD 有更高的靈敏度，更寬的線性范圍。電化學(xué)檢測(cè)器的缺點(diǎn)是重現(xiàn)性差，電極易污染氧化，例如早期各國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)采用三電位波形，這就導(dǎo)致電極易老化，當(dāng)沉積的分析物的反應(yīng)產(chǎn)物留在電極表面，采用相對(duì)較高電位來(lái)清理電極，這就導(dǎo)致金氧化物的形成，抑制進(jìn)一步的反應(yīng)，導(dǎo)致檢測(cè)器的靈敏度和精度隨著時(shí)間的推移變得較差[27]。為了克服這些缺點(diǎn)，Ding Y 等[28]采用脈沖安培檢測(cè)新霉素，并對(duì)四電位波形進(jìn)行優(yōu)化。目前大多數(shù)脈沖安培采用四電位波形，這將減少金的損失，從而防止金電極的緩慢衰退，并提高了長(zhǎng)期穩(wěn)定性和靈敏度。我國(guó)研究人員近年來(lái)嘗試?yán)盟碾娢坏腍PLC-PAD 對(duì)各類抗生素進(jìn)行檢測(cè)，建立符合我國(guó)藥典的檢測(cè)方法，并取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步。

2.6 HPLC-CAD 法

CAD 屬于氣溶膠檢測(cè)器的一類，檢測(cè)過(guò)程主要分為4 個(gè)部分：噴霧、蒸發(fā)、荷電、檢測(cè)。它的原理不同于其他類型的氣溶膠檢測(cè)器，主要是利用氮?dú)怆x子碰撞待測(cè)物質(zhì)，使其帶電并被監(jiān)測(cè)到。具體檢測(cè)原理如下：待檢測(cè)組分經(jīng)過(guò)色譜柱洗脫后進(jìn)入電噴霧檢測(cè)器，在霧化室通過(guò)氮?dú)鈬婌F形成小液滴，一些較大的液滴由于重力原因沉降經(jīng)廢液管流出，剩余的小液滴由流動(dòng)相包裹，通過(guò)干燥管時(shí)揮發(fā)性的流動(dòng)相會(huì)被蒸發(fā)掉，這時(shí)待測(cè)組分形成干燥的小顆粒并進(jìn)入采集器，采集器中的靜電檢測(cè)裝置采集所有的電荷，將其轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，從而可以看出所帶電荷越多，電信號(hào)越強(qiáng)，同時(shí)帶點(diǎn)顆粒表面積越大，其所帶電荷越多，響應(yīng)值就越高[29，30]。目前國(guó)內(nèi)外藥典還沒(méi)有收載HPLC-CAD 用于氨基糖苷類抗生素的質(zhì)量控制方法（見(jiàn)表1）。Long Z 等[31]采用HILIC和電噴霧檢測(cè)器建立了阿普霉素及其雜質(zhì)的分析方法；Joseph A 等[32]建立了HPLC-CAD 法測(cè)定藥膏中硫酸慶大霉素及其有關(guān)物質(zhì)的方法；Stypulkowska K 等[33]采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用電噴霧檢測(cè)器測(cè)定了新霉素及其相關(guān)物質(zhì)；Stypulkowska K 等[34]利用HPLC-CAD 法同時(shí)測(cè)定了林可霉素、大觀霉素及其雜質(zhì)；Holzgrabe U 等[35]利用HPLC-CAD 并結(jié)合TOF-MS 對(duì)硫酸鏈霉素中的雜質(zhì)進(jìn)行鑒別。CAD 具有靈敏度高，重現(xiàn)性良好的優(yōu)點(diǎn)，待測(cè)組分具有不揮發(fā)或者半揮發(fā)性質(zhì)即可，流動(dòng)相以及離子對(duì)試劑需要具有揮發(fā)性。但是CAD 也有其局限性，不能用于揮發(fā)性待測(cè)組分的檢測(cè)，同時(shí)待測(cè)組分的峰面積與濃度不成線性關(guān)系、信號(hào)與濃度動(dòng)態(tài)范圍較窄。

2.7 HPLC-NQAD 法

NQAD 全稱為水凝聚核粒子計(jì)數(shù)蒸發(fā)光檢測(cè)器，其屬于氣溶膠檢測(cè)器的一類。其核心元件為水凝聚核粒子計(jì)數(shù)器，檢測(cè)過(guò)程分為噴霧、汽化、凝結(jié)、檢測(cè)4 個(gè)過(guò)程，前兩個(gè)過(guò)程與ELSD 和CAD 有相似之處。第三個(gè)階段是NQAD 的核心階段，待測(cè)組分經(jīng)色譜柱洗脫流出霧化形成小液滴，通過(guò)汽化變成干燥的小顆粒，這個(gè)階段通過(guò)水蒸氣將干燥小顆粒包裹長(zhǎng)大到微米級(jí)別，通過(guò)激光脈沖計(jì)數(shù)器對(duì)待測(cè)物進(jìn)行定量。QAD 是一款質(zhì)量性檢測(cè)器，它的響性與待測(cè)組分的濃度呈正相關(guān)，與待測(cè)組分化學(xué)性質(zhì)無(wú)關(guān)，有較好的靈敏度，待測(cè)組分的峰面積與濃度成線性關(guān)系，這使得NQAD 計(jì)數(shù)更加簡(jiǎn)便，同時(shí)NQAD 操作簡(jiǎn)單，保養(yǎng)維護(hù)方便，靈敏度降低只需要更換“wick”即可。NQAD 屬于氣溶膠檢測(cè)器，待測(cè)組分需要具有不揮發(fā)或者半揮發(fā)性，流動(dòng)相要具有揮發(fā)性。目前NQAD 也已應(yīng)用在氨基糖苷類抗生素的檢測(cè)中。許明哲[11]利用NQAD 進(jìn)行了硫酸慶大霉素C 組分的測(cè)定，其分離效果良好；王金鳳等[21]比較了HPLC-ELSD 法和HPLC-NQAD 法測(cè)定注射用硫酸卡那霉素含量，通過(guò)比較兩款檢測(cè)器，發(fā)現(xiàn)ELSD 的線性范圍比NQAD 更寬，NQAD 在較低濃度范圍形成良好的線性關(guān)系，靈敏度比ELSD 更高。

3 小結(jié)

AGs 為臨床上最為常用的抗感染藥物之一，此類藥物大多數(shù)無(wú)紫外吸收,抗生素微生物檢定法、高效液相色譜衍生化法及ELSD、PAD 是當(dāng)前各國(guó)藥典和文獻(xiàn)報(bào)道中測(cè)定該類藥物含量和/或有關(guān)物質(zhì)的主要方法。檢測(cè)器作為HPLC 法的重要部分，其中最常用的檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、電噴霧檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器、安培檢測(cè)器、水凝聚核粒子計(jì)數(shù)檢測(cè)器等，檢測(cè)器的發(fā)展程度直接影響著HPLC 的技術(shù)進(jìn)步與發(fā)展速度。一般來(lái)說(shuō)，選擇性和靈敏度是檢測(cè)器最重要的兩個(gè)要素。紫外檢測(cè)器只能檢測(cè)在紫外區(qū)有吸收的物質(zhì)，而且實(shí)驗(yàn)所用流動(dòng)相在相應(yīng)區(qū)域無(wú)紫外吸收[36，37]。熒光檢測(cè)器只適用于能夠產(chǎn)生熒光的物質(zhì)，對(duì)溶劑的純度、pH 值、樣品濃度、檢測(cè)溫度等有很高的選擇性[38]。流動(dòng)相中溶解的氧氣及溫度對(duì)電化學(xué)檢測(cè)器檢測(cè)干擾較大。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器不能用非揮發(fā)的緩沖鹽及表面活性劑，流動(dòng)相中有機(jī)成分高時(shí)信號(hào)則可能被假性放大十幾倍，影響定量分析[15，16]。示差折光檢測(cè)器一般不能用于梯度洗脫[39]。電噴霧檢測(cè)器的響應(yīng)會(huì)受流動(dòng)相組成的影響，特別在梯度洗脫時(shí)，流動(dòng)相中有機(jī)相比例上升、響應(yīng)增大會(huì)影響分析[40，41]。但水凝聚核粒子計(jì)數(shù)檢測(cè)器彌補(bǔ)這一不足，最大限度兼顧檢測(cè)器的適用性和選擇性，它是通用型、高靈敏度檢測(cè)器，適用于幾乎所有物質(zhì)（揮發(fā)性物質(zhì)除外）的檢測(cè)，線性范圍寬且信號(hào)響應(yīng)具有質(zhì)量一致性，這種獨(dú)特的性質(zhì)可開(kāi)拓液相色譜的新領(lǐng)域。