姚逸安，胡情情，俞可心，胡馨予，余 榮，王仕明，管 峰*

（1.中國計(jì)量大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，浙江杭州 310018；2.百歐康（中國）銷售有限公司，浙江杭州 310000；3.浙江臨安羅塘大灣里湖羊羊場(chǎng)，浙江臨安 310018）

湖羊原產(chǎn)于我國太湖流域，具有適應(yīng)南方濕熱氣候、繁殖力高等優(yōu)點(diǎn)，種群平均產(chǎn)羔數(shù)達(dá)270%以上且為多胎FecB基因純合體[1]。但在生產(chǎn)過程中，窩產(chǎn)羔數(shù)3 羔以上時(shí)容易出現(xiàn)母羊泌乳量不足和弱羔等問題，弱羔早期免疫力低下容易感染疾病，輕則影響生長發(fā)育，嚴(yán)重可能導(dǎo)致死亡，同時(shí)由于弱羔需要人工代乳或寄養(yǎng)，人力成本大大增加[2-3]。在疾病預(yù)防的傳統(tǒng)方法中常使用抗生素，但其造成的藥物殘留、耐藥性等問題已經(jīng)給人類健康和公共衛(wèi)生安全帶來了隱患。隨著我國飼料中全面禁止添加抗生素，研發(fā)可替代抗生素的飼料添加劑成為養(yǎng)羊業(yè)中保障羔羊健康生長亟待解決的問題。

微生態(tài)制劑（Microecological Preparation）是一類由益生菌等微生物經(jīng)過加工制成的生物制品，一般被分為益生菌（Probiotics）、益生元（Prebiotics）和合生元（Synbiotic）三類[4-6]。由于微生態(tài)制劑可提高畜禽生長性能與機(jī)體免疫力，并具有無殘留、無毒副作用、不產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛運(yùn)用于動(dòng)物生產(chǎn)中[7]。微生態(tài)制劑可通過調(diào)節(jié)優(yōu)化綿羊瘤胃和腸道菌群的平衡以提升機(jī)體免疫力，降低羔羊腹瀉率和死亡率，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)吸收，從而提高生產(chǎn)性能[8]。但復(fù)合微生態(tài)制劑的最佳劑量以及對(duì)于產(chǎn)羔數(shù)不同的湖羊羔羊的應(yīng)用效果尚無報(bào)道。本試驗(yàn)旨在研究不同劑量新型微生態(tài)制劑對(duì)不同窩產(chǎn)羔數(shù)湖羊羔羊的生長性能、血液蛋白指標(biāo)的影響，探索復(fù)合微生態(tài)制劑的最佳劑量并為多胎羔羊的育肥提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 微生態(tài)制劑（商品名“犢益康”，每支60 mL，膏劑）由青島正泰聯(lián)合營養(yǎng)科技有限公司提供，其益生元主要包括牛初乳精華、中鏈甘油三酯、微量元素、維生素等，益生菌主要包括地衣芽孢桿菌（≥3.7×1010CFU/kg）、枯草芽孢桿菌（≥3.7×1010CFU/kg）、屎腸球菌（≥6.0×1010CFU/kg）。湖羊羔羊由浙江省臨安市羅塘大灣里湖羊養(yǎng)殖場(chǎng)提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取2020 年9 月出生的湖羊羔羊共110只，隨機(jī)分為3 組。低、高劑量組每只羔羊出生后2 h內(nèi)分別一次性灌服微生態(tài)制劑5、10 mL，對(duì)照組羔羊出生后不飼喂。在同期內(nèi)出生的羔羊隨機(jī)分組，1 窩羔羊在同一組，各組初生重?zé)o顯著差異，組內(nèi)（羔羊耳標(biāo)丟失則不再計(jì)入分組分析）按照胎產(chǎn)羔數(shù)分為單羔群、雙羔群、多羔群（≥3 羔），單羔在各組均少于5 只，未做群體分析，樣本信息見表1。分組后進(jìn)行打耳標(biāo)、稱重等相同操作。所有羔羊按照羊場(chǎng)常規(guī)過程飼養(yǎng)，試驗(yàn)期180 d。

1.3 飼養(yǎng)管理 按照羊場(chǎng)一般飼養(yǎng)方式，羔羊斷奶前和母羊同圈飼養(yǎng)，特別弱小羔羊由人工補(bǔ)喂牛初乳，每次約200 mL，一般3～10 次后直至正常采食。羔羊約30日齡后開始補(bǔ)飼羔羊顆粒料（主要成分為脫脂奶粉、牛奶、乳糖、乳清粉、食鹽、礦物質(zhì)、微量元素和維生素），體重約為20 kg 時(shí)斷奶，斷奶后公母分欄飼養(yǎng)。飼養(yǎng)期間所有羔羊自由采食。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 體重 所有試驗(yàn)羔羊出生后記錄羔羊初生重、胎產(chǎn)羔數(shù)，分別于15、30、60、180 日齡進(jìn)行空腹稱重；計(jì)算每只羔羊體重增重、平均日增重和相對(duì)生長率，相對(duì)生長率的計(jì)算參考陳新丹等[9]的計(jì)算方法。

1.4.2 血液蛋白指標(biāo) 分別于出生后2 h（初生）、2 日齡和10 日齡從對(duì)照組、低劑量組、高劑量組中隨機(jī)各抽取5 只羔羊進(jìn)行血液采集。羔羊晨飼前頸靜脈采血約1.0 mL，收集于含肝素的真空采血管中，低溫（0～4℃）保存帶回實(shí)驗(yàn)室，3 500 r/min 離心10 min 分離血清，采用全自動(dòng)生化分析儀（IDEXX Catalyst One，美國）測(cè)定血液中總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）和球蛋白（GLOB）含量，計(jì)算白蛋白/球蛋白（A/G）。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用Excel 2019 進(jìn)行整理，SPSS 20.0 進(jìn)行差異顯著性分析，對(duì)體重?cái)?shù)據(jù)采用單因變量多因素方差分析，血液蛋白指標(biāo)數(shù)據(jù)采用方差分析，LSD 法進(jìn)行多重比較，P＜0.05 代表差異顯著。群體樣本≤5 時(shí)不進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對(duì)比分析，試驗(yàn)結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)羔羊增重的影響 單因變量多因素方差分析表明，試驗(yàn)處理與組內(nèi)分群交互作用不顯著，以劑量水平為主效應(yīng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析各分類的對(duì)照組、低劑量組和高劑量組之間的初生重、180 日齡重、總增重和平均日增重均差異不顯著（表1）。由圖1 可知，羔羊180 日齡重、總增重和平均日增重均與初生重正相關(guān)（P＜0.01）。由表1 可知，多羔群和與公羔群中高劑量組的羔羊初生重均低于對(duì)照組（P＞0.05），180 日齡重、總增重、平均日增重均高于對(duì)照組（P＞0.05）。微生態(tài)制劑對(duì)羔羊的總體增重性能影響不顯著，口服10 mL微生態(tài)制劑在多羔群和公羔群中效果較好。

圖1 180 日齡重（A）、總增重（B）、平均日增重（C）隨初生重變化的散點(diǎn)圖

表1 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)羔羊增重的影響

2.3 微生態(tài)制劑對(duì)羔羊各階段相對(duì)生長率的影響 如表2 所示，雙羔群中對(duì)照組在0～15 日齡的相對(duì)生長率高于低劑量組（P＜0.05），低劑量組在15～30 日齡的相對(duì)生長率高于高劑量組（P＜0.05），其余各分類群中各組羔羊相對(duì)生長率在0～15 和15～30 日齡差異均不顯著。各分類群中低、高劑量組在30～60 日齡的相對(duì)生長率高于對(duì)照組（P＞0.05）。60～180 日齡，總樣本中高劑量組的相對(duì)生長率高于對(duì)照組（P＜0.05），雙羔群中高劑量組的相對(duì)生長率高于對(duì)照組和低劑量組（P＜0.05），其余各分類群中試驗(yàn)組的羔羊相對(duì)生長率均高于對(duì)照組（P＞0.05）。微生態(tài)制劑可能在羔羊斷奶后對(duì)其生長性能有促進(jìn)作用，但效果不顯著。

表2 微生態(tài)制劑對(duì)羔羊各階段相對(duì)生長率的影響 %

2.4 微生態(tài)制劑對(duì)羔羊血液蛋白指標(biāo)的影響 由表3 可知，羔羊初生時(shí)，各組羔羊血液TP、ALB、GLOB 以及A/G 的指標(biāo)均無顯著差異，A/G 均接近1.0。高劑量組2、10 日齡時(shí)血液TP、GLOB 含量均高于對(duì)照組（P＜0.05），且2 日齡時(shí)高于低劑量組（P＜0.05）；A/G 均低于對(duì)照組（P＜0.05）；低劑量組各時(shí)期血液中TP、GLOB 含量均高于對(duì)照組（P＞0.05），A/G 均低于對(duì)照組（P＞0.05）。血液中ALB 含量在各組間以及不同時(shí)間差異均不顯著。

由表3 可知，高劑量組2 日齡羔羊血液中TP、GLOB 含量較初生時(shí)分別提高了58.47% 和93.97%（P＜0.05），10日齡時(shí)TP、GLOB含量低于2日齡（P＜0.05），但仍高于初生時(shí)（P＜0.05）；高劑量組2、10 日齡時(shí)ALB 含量均高于初生時(shí)（P＜0.05）。低劑量組2、10 日齡時(shí)TP、GLOB 含量均高于初生時(shí)（P＜0.05），且2 日齡含量最高；10 日齡ALB 含量高于出初生時(shí)（P＜0.05）。對(duì)照組10 日齡時(shí)TP、ALB 含量高于初生時(shí)（P＜0.05），其余指標(biāo)隨時(shí)間變化差異不顯著。

表3 微生態(tài)制劑對(duì)羔羊血液蛋白指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 微生態(tài)制劑對(duì)綿羊生長發(fā)育的影響 羔羊出生至斷奶前的胃部結(jié)構(gòu)、主要菌群和消化物會(huì)發(fā)生很大變化[10]。微生態(tài)制劑中的益生菌及其代謝產(chǎn)物進(jìn)入消化道后，通過補(bǔ)充優(yōu)勢(shì)菌群、拮抗病原微生物、促進(jìn)分泌消化酶等多種方式改善腸胃環(huán)境，提高羔羊?qū)I養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力，進(jìn)而提高生長發(fā)育性能[11-13]。郭云霞等[14]研究表明，羊源微生態(tài)制劑可以提早綿羊羔羊的斷奶日齡并顯著提高羔羊平均日增重，降低羔羊腹瀉發(fā)病率和死亡率。Soren 等[15]研究則發(fā)現(xiàn)，添加酵母和乳酸桿菌對(duì)羔羊的體重和平均日增重沒有影響?？梢?，微生態(tài)制劑的作用效果可能受到其使用劑量和菌種搭配的影響。與傳統(tǒng)的液體和固態(tài)粉末微生態(tài)制劑相比，本試驗(yàn)使用的新型微生態(tài)制劑為乳膏劑，具有儲(chǔ)存期長、使用簡(jiǎn)易精確等優(yōu)點(diǎn)[16]。本研究結(jié)果表明，在羔羊出生2 h 內(nèi)以灌服5、10 mL 復(fù)合微生態(tài)制劑有利于改善羔羊胃內(nèi)菌群結(jié)構(gòu)和數(shù)量，提高消化能力，促進(jìn)生長發(fā)育，但不能顯著提高湖羊羔羊的生長性能；試驗(yàn)組全部群體在30～60、60～180 日齡相對(duì)生長率均高于對(duì)照組。一方面，微生態(tài)制劑的使用效果可能受到使用時(shí)間的影響。本研究中所采用的芽孢桿菌、乳酸菌主要以分解復(fù)雜化合物、產(chǎn)生維生素、促進(jìn)腸道絨毛生長等機(jī)制，促進(jìn)動(dòng)物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收以提升生產(chǎn)性能[17-18]，而羔羊哺乳期消化物以簡(jiǎn)單碳水化合物為主，同時(shí)母乳中所含的IgA 可能導(dǎo)致部分益生菌難以在腸道定植或發(fā)揮效用[10,19]。隨著羔羊斷奶以及日糧的改變，出生時(shí)灌服的微生態(tài)制劑的促生長效果逐漸減弱，總體生長情況無差異，但在后期試驗(yàn)組相對(duì)生長率較高，說明微生態(tài)制劑可能對(duì)斷奶后的生長強(qiáng)度具有促進(jìn)效果。另一方面，微生態(tài)制劑中含有的維生素和微量元素等物質(zhì)對(duì)羔羊健康生長具有重要意義，但本試驗(yàn)飼喂周期短，難以對(duì)生長性能產(chǎn)生持續(xù)性影響，同時(shí)微生態(tài)制劑中各種成分的相互拮抗也可能引起使用效果的差異。從羔羊的總體生長狀況來看，10 mL 復(fù)合微生態(tài)制劑組多羔群和公羔群的生長效果最佳，這可能與多羔群在羔羊出生時(shí)數(shù)量多，相對(duì)于單羔和雙羔羔羊體重輕、體質(zhì)弱等因素有關(guān)。也有研究表明，微生態(tài)制劑的使用效果存在性別差異[20]。復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)胎產(chǎn)羔數(shù)不同的湖羊羔羊的作用效果以及最佳飼喂劑量仍需要進(jìn)一步研究。

3.2 微生態(tài)制劑對(duì)羔羊血液蛋白指標(biāo)的影響 動(dòng)物血液中各類蛋白質(zhì)含量的變化是衡量機(jī)體代謝狀況和免疫能力的重要指標(biāo)。血清TP 主要由ALB 和GLOB 組成，其含量可直接反映動(dòng)物的生長發(fā)育和健康狀況。ALB作為營養(yǎng)物質(zhì)的載體其含量高低可直接反映動(dòng)物的營養(yǎng)攝入情況，GLOB 主要由免疫器官分泌的抗體組成，在體液免疫過程中發(fā)揮重要作用[21]。微生態(tài)制劑可通過多種作用方式提高動(dòng)物血液中各類蛋白質(zhì)的含量，進(jìn)一步影響機(jī)體免疫能力。研究表明，補(bǔ)飼微生態(tài)制劑可以有效提高羔羊血液中IgA 和IgG 濃度，還能提高IL-6含量以及細(xì)胞因子的水平[22-23]，顯著降低羔羊腹瀉率并提高存活率[24]。Devyatkin 等[25]研究表明，飼料中添加益生菌制劑可以顯著提高羔羊血液中TP、ALB、GLOB 含量，降低血液膽紅素和膽固醇水平，提高殺菌和吞噬指數(shù)。Yang 等[26]研究表明，綿羊口服重組枯草芽孢桿菌有助于促進(jìn)綿羊外周血單核細(xì)胞增殖，顯著提高血液中IgG 和IgA 含量，有效降低綿羊受寄生蟲感染的機(jī)率。

哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)的發(fā)育存在于生命的各個(gè)階段，腸道菌群對(duì)于早期免疫系統(tǒng)的影響尤為重要，尤其是在出生前和出生后的短時(shí)間內(nèi)[27]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，灌服5、10 mL 復(fù)合微生態(tài)制劑均可以不同程度地促進(jìn)羔羊血液中GLOB、TP 含量，降低A/G，ALB 含量變化則不受微生態(tài)制劑影響，10 mL 灌服效果持續(xù)至10 日齡仍與對(duì)照組差異顯著，說明微生態(tài)制劑有效提高了羔羊生長初期的體液免疫水平。何韻秋等[12]研究也表明，顆粒化混合日糧中添加復(fù)合益生菌制劑可顯著提高湖羊血清TP 和GLOB 濃度，降低A/G，與本研究中微生態(tài)制劑對(duì)湖羊血液蛋白指標(biāo)影響的結(jié)果一致；而各個(gè)時(shí)期試驗(yàn)組羔羊血液中作為營養(yǎng)物質(zhì)載體的ALB 含量較對(duì)照組無顯著差異，也與本試驗(yàn)中各組羔羊生長性能差異不顯著的結(jié)果一致。益生菌通過刺激羔羊腸道，加強(qiáng)羔羊?qū)Τ跞楹臀⑸鷳B(tài)制劑中所含蛋白質(zhì)的吸收能力，從而增加血液中ALB、GLOB 含量；同時(shí)微生態(tài)制劑中所含的益生菌、益生元可作為抗原或免疫系統(tǒng)激活劑等成分參與宿主的免疫反應(yīng)，刺激腸道黏膜系統(tǒng)的發(fā)育和成熟，進(jìn)一步提高羔羊免疫力[28-29]。總體來說，口服10 mL 復(fù)合微生態(tài)制劑可顯著提升羔羊血液中GLOB含量，對(duì)羔羊早期免疫力的構(gòu)建具有重要意義。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，飼喂10 mL 復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)湖羊窩產(chǎn)多胎羔羊的生長具有一定促進(jìn)作用，尤其對(duì)公羔與窩產(chǎn)3 羔及以上時(shí)效果更佳，但效果并不顯著；同時(shí)能顯著提升羔羊血液中TP 和GLOB 含量，降低A/G，提高羔羊血液蛋白指標(biāo)。