張 邦，王瑞華，朱龍龍，顏 顏，王 軍，王占彬*

（1.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南洛陽(yáng) 471003；2.禾佳農(nóng)業(yè)科技有限公司，河南宜陽(yáng) 471600）

我國(guó)蛋白飼料原料以豆粕、菜粕、苜蓿等草本飼料為主，且對(duì)進(jìn)口原料依存度很高。2016 年全國(guó)大豆進(jìn)口量約為8 400 萬(wàn)t，2020 年超過(guò)1 億t[1-2]。國(guó)務(wù)院頒布的《關(guān)于促進(jìn)畜牧業(yè)高質(zhì)量發(fā)展的意見(jiàn)》中指出要健全飼草供應(yīng)體系，開(kāi)發(fā)利用雜交構(gòu)樹(shù)、飼料桑等新飼草資源。雜交構(gòu)樹(shù)在營(yíng)養(yǎng)期適時(shí)收割，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富，能值和粗蛋白質(zhì)含量等均可與傳統(tǒng)飼料相媲美[3]。構(gòu)樹(shù)也是一種傳統(tǒng)中草藥，含有多種黃酮類(lèi)化合物、生物堿和多糖等活性成分，具有抗菌、增強(qiáng)免疫力、延緩衰老等藥理活性[4-5]。我國(guó)大面積的丘陵山地具有充足的開(kāi)發(fā)構(gòu)樹(shù)資源的潛力[6-8]。宋博等[9]研究發(fā)現(xiàn)，在育肥豬飼糧中添加10%全株發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)育肥豬生產(chǎn)性能無(wú)顯著影響，可以提高肌肉中游離氨基酸和肌內(nèi)脂肪含量，改善肉品質(zhì)。鄧銘等[10]研究表明，將發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料用于斷奶仔豬可顯著降低仔豬腹瀉率，且無(wú)不利影響。向凌云等[11]使用30%雜交構(gòu)樹(shù)飼料替代肉兔飼糧中的花生秧與花生殼，顯著提高了肉兔平均日增重，也顯著降低了肉兔發(fā)病率與死亡率。構(gòu)樹(shù)葉經(jīng)發(fā)酵后所含的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)較發(fā)酵前有不同程度提高，但對(duì)肉兔的研究鮮有報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在研究發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔生長(zhǎng)發(fā)育的影響，為發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料在肉兔養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取體重接近的30 日齡斷奶伊普呂幼兔144 只，隨機(jī)分為4 組，每組6 個(gè)重，每重復(fù)只，每籠3 只兔。試驗(yàn)于夏季在義馬市金地牧業(yè)科技有限公司開(kāi)展。對(duì)照組飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，參照NRC（1994）營(yíng)養(yǎng)需要配制顆粒飼糧。試驗(yàn)組分別添加3%、6%、9%發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料。在第2 茬雜交構(gòu)樹(shù)生長(zhǎng)至1.2 m，離地30 cm 收割枝葉。添加適量發(fā)酵益生菌（乳酸菌2×1010CFU/g）和酶制劑（纖維素酶、甘露聚糖酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶11 000 U/g）按比例混合加工，打包裝袋密封發(fā)酵20 d。益生菌與酶制劑均為洛陽(yáng)市洛丹生物科技有限公司產(chǎn)品。發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料（洛陽(yáng)禾佳農(nóng)牧有限公司）營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1（重復(fù)測(cè)定3 次取其均值），飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表2。預(yù)試期7 d，正試期28 d。

表1 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料化學(xué)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

表2 飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2 飼養(yǎng)管理 幼兔飼養(yǎng)于同一兔舍，采用歐式籠同層飼養(yǎng)，按照每個(gè)籠幼兔平均體重的8%定量飼喂，每只兔每隔3 d 增加10 g。自由飲水，免疫程序按常規(guī)進(jìn)行。每天清掃兔舍，定期清洗飲水管道和糞盤(pán)。

1.3 生產(chǎn)性能 在試驗(yàn)第1、28 天按重復(fù)進(jìn)行空腹稱(chēng)重，并統(tǒng)計(jì)死淘情況，計(jì)算平均日增重、平均日采食量、耗料增重比、死亡率和腹瀉率。

1.4 屠宰性能 在試驗(yàn)結(jié)束前12 h 對(duì)肉兔停料不停水。每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇1 只兔共24 只屠宰，耳緣靜脈注射空氣致死。記錄活體重、全凈膛重、半凈膛重、心臟、肝臟、腎臟、肺臟、脾臟等重量，并計(jì)算全凈膛率、半凈膛率和器官指數(shù)。

全凈膛率=全凈膛重/活體重×100%

半凈膛率=（全凈膛重+心臟+肝臟+腎臟+肺臟）/活體重×100%

器官指數(shù)=（器官重量/體重）×100%

1.5 肉品質(zhì) 屠宰完成后采集背腰最長(zhǎng)肌取2 cm×1 cm×1 cm 肉樣背腰最長(zhǎng)肌樣品，去除結(jié)締組織，測(cè)定質(zhì)量m1（g）置于自封袋內(nèi)，密封懸掛于在4℃冰箱內(nèi)，24 h后將肉樣取出，濾紙吸干樣品表面水分后稱(chēng)重m2（g），計(jì)算24 h 滴水損失。48 h 滴水損失測(cè)定方法相同。滴水損失的計(jì)算公式：

滴水損失=100%×（m1-m2）)/ m1

采用便攜式手持專(zhuān)用pH 計(jì)（pH-STAR，德國(guó)）測(cè)背腰最長(zhǎng)肌第5 肋骨處的pH，將探頭插入肌肉3 mm 讀數(shù)，讀數(shù)穩(wěn)定5 s 后記錄pH，每個(gè)肉樣測(cè)定3次不同位置。分別記錄pH45min與pH24h的數(shù)值。

用日本產(chǎn)CR-10 型號(hào)便攜式色差儀，利用CIELab 輸出模式，在兔宰后45 min 時(shí)在背最長(zhǎng)肌第5 腰椎處橫斷面表面切開(kāi)3 個(gè)切面記錄數(shù)值，分別求平均值，得出亮度值（L*）、紅色度值（a*）和黃色度值（b*）。

1.6 血液生化指標(biāo) 在屠宰試驗(yàn)當(dāng)天，進(jìn)行心臟采血，3 500 r/min 離心取得血清于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｓ萌詣?dòng)生化分析儀（庫(kù)貝爾 IMagic-V7，中國(guó)）測(cè)定血清中的葡萄糖（GLU）、尿素氮（BUN）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、甘油三酯（TG）、膽固醇（CHO）、葡萄糖（GLU）、血鈣（Ca）與血磷（IP）含量及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）活性。

1.7 腸道形態(tài) 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束，每個(gè)重復(fù)選1 只試驗(yàn)兔，剖開(kāi)腹腔后，分離小腸，于空腸中段采集3 cm 左右，用生理鹽水洗滌內(nèi)容物后，放置于多聚甲醛中固定48 h，經(jīng)過(guò)修整、脫水、透明、浸蠟和包埋，采用旋轉(zhuǎn)切片機(jī)進(jìn)行連續(xù)切片，然后使用蘇木素-伊紅（H-E）染液染色并封片。在各個(gè)切片中選取5 個(gè)較為完整的絨毛，在電子顯微鏡下測(cè)量絨毛高度和隱窩深度，并計(jì)算其絨隱比。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 22 統(tǒng)計(jì)軟件的ANOVA 程序進(jìn)行單因素方差分析，組間差異用Duncan's 法進(jìn)行多重比較。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。設(shè)定P＜0.05 為差異顯著，P＜0.01 為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔生產(chǎn)性能的影響 如表3 所示，試驗(yàn)肉兔初始體重差異不顯著，構(gòu)樹(shù)組生產(chǎn)性能與對(duì)照組無(wú)顯著差異。

表3 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔生產(chǎn)性能的影響

2.2 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔屠宰性能和器官指數(shù)的影響由表4 可見(jiàn)，構(gòu)樹(shù)組全凈膛重、半凈膛重、全凈膛率、半凈膛率與對(duì)照組均無(wú)顯著差異；且肉兔各項(xiàng)器官指數(shù)與對(duì)照組無(wú)顯著差異。

表4 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔屠宰性能和器官指數(shù)的影響

2.3 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔背腰最長(zhǎng)肌肉品質(zhì)的影響 如表5 所示，6%、9%構(gòu)樹(shù)組兔肉亮度均高于對(duì)照組、3%構(gòu)樹(shù)組（P＜0.05）；3%、6% 構(gòu)樹(shù)組滴水損失24 h 均低于對(duì)照組（P＜0.05），9%構(gòu)樹(shù)組低于對(duì)照組和3%、6%構(gòu)樹(shù)組（P＜0.01）；構(gòu)樹(shù)組兔肉的pH、紅度與黃度與對(duì)照組無(wú)顯著差異。

表5 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔背腰最長(zhǎng)肌肉品質(zhì)的影響

2.4 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔血液生化指標(biāo)的影響 由表6所示，構(gòu)樹(shù)組TP 和ALB 含量高于對(duì)照組（P＜0.01）；9%構(gòu)樹(shù)組GLO 含量、6% 和9% 構(gòu)樹(shù)組GLU 含量均高于對(duì)照組（P＜0.05）；6%和9%構(gòu)樹(shù)組IP 含量高于對(duì)照組、3%構(gòu)樹(shù)組（P＜0.01）；各組其他指標(biāo)無(wú)顯著差異。

表6 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔血液生化指標(biāo)的影響

2.5 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔腸道形態(tài)的影響 由表7 和圖1 可知，9%構(gòu)樹(shù)組腸道絨毛高度高于對(duì)照組（P＜0.05）；構(gòu)樹(shù)組腸道隱窩深度和絨隱比與對(duì)照組無(wú)顯著差異。

圖1 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔腸道形態(tài)的影響（9×）

表7 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔腸道形態(tài)的影響

3 討 論

3.1 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)斷奶幼兔生長(zhǎng)性能的影響 幼兔因其機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)快，消化系統(tǒng)發(fā)育不能及時(shí)完善，導(dǎo)致胃酸和消化酶分泌不足，進(jìn)而引起腹瀉最終面臨死亡，是肉兔生產(chǎn)中常見(jiàn)的難題[12]。構(gòu)樹(shù)飼料經(jīng)發(fā)酵過(guò)后，產(chǎn)生多種芳香類(lèi)的物質(zhì)[13]，可降解構(gòu)樹(shù)中所含的一些抗?fàn)I養(yǎng)因子，還會(huì)產(chǎn)生乳酸菌等有益菌，刺激幼兔采食促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收[14]。一定量的構(gòu)樹(shù)飼料可以提升兔的胃容積，促進(jìn)腸道發(fā)育，并在消化過(guò)程中增強(qiáng)消化器官蠕動(dòng)，增加消化液的分泌[15]。而本試驗(yàn)中構(gòu)樹(shù)組肉兔平均末重和平均日增重較對(duì)照組均有所增加，但其生產(chǎn)性能無(wú)顯著變化，這可能與限飼有關(guān)，肉兔的腹瀉率和死亡率在飼喂發(fā)酵構(gòu)樹(shù)后有所改善，但并未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異。鄧銘等[10]和Chen 等[16]均報(bào)道，構(gòu)樹(shù)飼料可以顯著降低斷奶仔豬腹瀉率，因此肉兔在自由采食模式下可能產(chǎn)生顯著效果。在育肥豬飼糧中添加10%發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料不產(chǎn)生負(fù)面影響[7,17]，而生長(zhǎng)豬飼糧中發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料比例達(dá)到20% 時(shí)就會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響[18]。本試驗(yàn)中，發(fā)酵構(gòu)樹(shù)添加量最高比例為9%，并未對(duì)肉兔的生長(zhǎng)性能造成負(fù)面影響。此外，發(fā)酵構(gòu)樹(shù)來(lái)源、飼喂方式以及添加量不同都會(huì)產(chǎn)生不同影響。相對(duì)豆粕或魚(yú)粉而言，木本植物飼料提供的粗蛋白質(zhì)成本比較低廉。因此，在小型草食動(dòng)物的飼料原料選擇上，構(gòu)樹(shù)飼料具有很好的發(fā)展?jié)摿Γ陲曃拱l(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料時(shí)，根據(jù)實(shí)際條件確定適宜飼喂方式與飼用量，才能更好地發(fā)揮發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料的優(yōu)勢(shì)。

3.2 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔屠宰性能、器官指數(shù)與肉品質(zhì)的影響 屠宰性能是衡量肉兔生產(chǎn)性能的重要指標(biāo)，可反映畜禽產(chǎn)肉率。本試驗(yàn)結(jié)果表明，發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔屠宰性能無(wú)顯著影響。張興等[19]研究也發(fā)現(xiàn)，使用30%發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料飼喂湘沙豬對(duì)其屠宰性能未見(jiàn)顯著差異。內(nèi)臟器官是機(jī)體生理功能的物質(zhì)基礎(chǔ)，其發(fā)育狀況可反映機(jī)體的器官能力。王小平等[20]研究發(fā)現(xiàn)，添加不同比例青貯構(gòu)樹(shù)飼料的各試驗(yàn)組間肉羊的心、肝、脾、肺、腎的器官指數(shù)無(wú)顯著變化。本試驗(yàn)中，發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔的心、肝、脾、肺和腎的器官指數(shù)也均無(wú)顯著影響。目前，有關(guān)發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔的屠宰性能和器官指數(shù)影響的研究不多，其可能存在的機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

肉品質(zhì)是畜禽生產(chǎn)中的重要經(jīng)濟(jì)性狀，其評(píng)價(jià)指標(biāo)包括肉色、系水力、pH 等[21]。熊羅英等[22]發(fā)現(xiàn)，在AA 肉仔雞飼糧中添加6.75%發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉仔雞的屠宰率無(wú)顯著影響，但可以顯著降低胸肌和腿肌的滴水損失，這表明發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料可以提高雞肉系水力和多汁性。本試驗(yàn)中，發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料顯著降低了肉兔背腰最長(zhǎng)肌的滴水損失。肌肉水分流失會(huì)帶走其中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、風(fēng)味物質(zhì)和血紅素等，對(duì)肉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、風(fēng)味和肉色造成損害[23]。相關(guān)研究表明，發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料可以提高育肥豬瘦肉率、降低背膘厚度、增加肉色和系水力，進(jìn)而改善豬肉質(zhì)量及風(fēng)味[17,24]。在反芻動(dòng)物中使用發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料也可顯著提高其屠宰率和肉品質(zhì)[25]。這可能是因?yàn)闃?gòu)樹(shù)中含有較多黃酮類(lèi)、葡萄糖苷類(lèi)、生物堿類(lèi)等活性成分，可減少自由基對(duì)肌肉蛋白的損傷，從而改善肉品質(zhì)[26]。因此，在肉兔飼養(yǎng)中使用發(fā)酵構(gòu)樹(shù)具有一定優(yōu)勢(shì)，但本次試驗(yàn)僅探索發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料使用的可行性，并未針對(duì)其肉品質(zhì)做詳細(xì)探究，后續(xù)可以深入研究。

3.3 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)肉兔血液生化指標(biāo)的影響 動(dòng)物血清生化各項(xiàng)指標(biāo)可反映動(dòng)物機(jī)體生理機(jī)能代謝狀況[27]。血清中BUN 含量減少，反映了機(jī)體對(duì)BUN 的沉積量增加，氮的利用率提高。AST 和ALT 活性可反映肝臟對(duì)蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝能力。本試驗(yàn)中，AST 和ALT 有所上升，可能因?yàn)榘l(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料中含有黃酮、糖苷類(lèi)等藥用成分能提高肝臟代謝能力[28-30]。TC 和TG含量能反映機(jī)體脂肪代謝情況[31]。本研究中，構(gòu)樹(shù)組TC 含量相較于對(duì)照組有一定減少，表明發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料具有有一定降血脂作用。有研究發(fā)現(xiàn)發(fā)酵桑葉飼喂蛋雞可以降低血脂[32]。而構(gòu)樹(shù)與桑樹(shù)中有類(lèi)似的生物堿等活性成分可以調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝。GLU 是細(xì)胞的能量來(lái)源和新陳代謝中間產(chǎn)物，是單胃動(dòng)物最直接的能量來(lái)源。本試驗(yàn)中，6% 構(gòu)樹(shù)組與9% 構(gòu)樹(shù)組GLU 含量極顯著高于對(duì)照組，表明發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)斷奶幼兔的能量代謝有顯著影響。TP 含量是衡量機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)吸收能力、利用能力以及機(jī)體免疫水平的指標(biāo)。動(dòng)物的代謝系統(tǒng)可以調(diào)控血漿蛋白質(zhì)、氨基酸和組織蛋白以保證內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)[33-34]。王玉田等[35]發(fā)現(xiàn)，飼喂含枯草芽孢桿菌等復(fù)合益生菌的發(fā)酵飼料能提高斷奶仔豬血清中TP 含量。本試驗(yàn)中，構(gòu)樹(shù)組血清中TP 含量極顯著高于對(duì)照組，這可能因?yàn)榘l(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料也含有較多種類(lèi)的益生菌，改善了幼兔腸道健康，進(jìn)而影響了蛋白的消化利用。在本試驗(yàn)中，6%構(gòu)樹(shù)組和9%構(gòu)樹(shù)組IP 含量極顯著高于對(duì)照組。血液中磷含量主要由腸道吸收，說(shuō)明發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料能促進(jìn)兔腸道上皮細(xì)胞的吸收[36]。以上結(jié)果表明，發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料具有一定提高幼兔小腸吸收能力的作用，具體機(jī)制有待探究。

3.4 發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料對(duì)腸道形態(tài)的影響 肉兔對(duì)飼糧中營(yíng)養(yǎng)成分吸收量，很大程度上依賴(lài)于腸道的發(fā)育情況。因此，腸道組織健康狀況是動(dòng)物機(jī)體能否最大程度消化吸收飼糧的關(guān)鍵。絨毛和隱窩是腸道重要的生理結(jié)構(gòu)，分別影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與腸道的接觸面積和腸絨毛上皮細(xì)胞的分泌功能[37]。絨毛高度可以直觀(guān)反映腸道吸收能力，隱窩深度為腸腺離黏膜表面的最近距離[38]。本試驗(yàn)中，9%構(gòu)樹(shù)組肉兔的空腸絨毛長(zhǎng)度顯著高于對(duì)照組，雖然3%構(gòu)樹(shù)組和6%構(gòu)樹(shù)組絨毛長(zhǎng)度沒(méi)有提高，但隱窩深度有一定降低，進(jìn)而提高了絨隱比。而飼喂玉米皮飼糧顯著提高了生長(zhǎng)肉兔十二指腸絨毛高度，改善了其腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，認(rèn)為可能是由于谷物麩皮類(lèi)飼料原料纖維組成結(jié)構(gòu)與基礎(chǔ)飼糧不同[39]；相關(guān)研究也表明，不同來(lái)源纖維，不同纖維成分均可影響兔腸道組織形態(tài)[40-41]。在生長(zhǎng)兔飼糧中使用不同來(lái)源的纖維飼料，對(duì)生長(zhǎng)肉兔的腸道發(fā)育會(huì)產(chǎn)生不同效果。相對(duì)于傳統(tǒng)草本飼料，發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料屬于木本飼料可能在小腸中停留更長(zhǎng)時(shí)間，進(jìn)而改善了腸道消化吸收能力。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，使用發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料可以提高兔肉背腰最長(zhǎng)肌亮度、降低其滴水損失，提高空腸絨隱比，且對(duì)血液生化指標(biāo)有一定提高作用，使用9%發(fā)酵構(gòu)樹(shù)飼料未見(jiàn)不良影響，可繼續(xù)探究其在實(shí)踐生產(chǎn)中的使用。