張東東，孫 玉，李婧伊，阮德清，陳凱先, 3，李醫(yī)明，王 瑞*

板藍(lán)根乙醇提取物化學(xué)成分及其抑制一氧化氮釋放活性研究

張東東1, 2，孫 玉1，李婧伊2，阮德清2，陳凱先2, 3，李醫(yī)明2，王 瑞2*

1. 陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712046 2. 上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，上海 201203 3. 中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所，上海 201203

研究板藍(lán)根的化學(xué)成分及其抑制一氧化氮（NO）釋放活性。采用硅膠、反相ODS C18、葡聚糖凝膠、半制備液相等色譜技術(shù)分離純化，結(jié)合理化性質(zhì)，NMR、MS等波譜數(shù)據(jù)解析結(jié)構(gòu)，CCK-8法測(cè)定化合物抑制NO釋放活性。從板藍(lán)根中共分離鑒定了17個(gè)化合物，分別為(7,8,7′,8′)-3,4,3′,4′-tetramethoxy-9,7- dihydroxy-8.8′,7..9′-lignan（1）、(?)-(7,7′,8,8′)-4-β--吡喃葡萄糖基-4′-羥基-3,3′,5′-三甲氧基-7,9′:7′,9-雙環(huán)氧木脂烷（2）、liballinol（3）、2-amino-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propane-1,3-diol（4）、對(duì)羥基苯丙醇（5）、3-甲氧基-4-羥基苯丙醇（6）、3-羥基-1-(3-甲氧基-4-羥基-苯基)-丙基-1-酮（7）、3,4,5-三甲氧基肉桂酸（8）、()-4-(3,4)-3,4-dihydroxy-2,6,6- trimethylcyclohex-1-en-1-yl)but-3-en-2-one（9）、對(duì)羥基苯甲醛（10）、香草酸（11）、3,4-二羥基苯乙酸（12）、苯甲酰胺（13）、苯乙酰胺（14）、-焦谷氨酸（15）、-焦谷氨酸甲酯（16）和(4,5)-5-hydroxyhexan-4-olide（17）。化合物7和8具有抑制NO釋放活性，半數(shù)抑制濃度（median inhibition concentration，IC50）值分別為98.5、58.3 μmol/L?；衔?為新天然產(chǎn)物，化合物1～4、9、12～17為首次從板藍(lán)根中分離鑒定，化合物7和8表現(xiàn)出抑制NO釋放活性。

板藍(lán)根；菘藍(lán)；一氧化氮抑制活性；苯丙素；苯甲酸衍生物；3,4,5-三甲氧基肉桂酸

板藍(lán)根是十字花科（Cruciferae）菘藍(lán)屬L.植物菘藍(lán)Fort.的干燥根[1]，主產(chǎn)于我國(guó)北方地區(qū)。其味苦性寒，具有清熱解毒、涼血利咽等功效，常治療流行性感冒、流行性腮腺炎、流行性乙型肝炎等疾病[2-5]。近年來(lái)板藍(lán)根備受國(guó)際青睞，2019年板藍(lán)根國(guó)際質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布，進(jìn)一步促進(jìn)了其國(guó)際化，也展現(xiàn)出板藍(lán)根優(yōu)越的市場(chǎng)前景和研究?jī)r(jià)值。對(duì)板藍(lán)根近40年的文獻(xiàn)綜述研究發(fā)現(xiàn)，雖然已經(jīng)有300多個(gè)化合物及其相關(guān)的藥理活性被報(bào)道，但是相比于板藍(lán)根復(fù)雜的化學(xué)成分和廣泛的藥理活性，這些研究基礎(chǔ)并不足以闡明板藍(lán)根的藥效物質(zhì)。為進(jìn)一步科學(xué)開發(fā)利用板藍(lán)根資源，本實(shí)驗(yàn)在前期的研究基礎(chǔ)上[5-15]，繼續(xù)對(duì)其80%乙醇提取物進(jìn)行系統(tǒng)分離純化，通過(guò)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)共鑒定了17個(gè)化合物，分別為(7,8,7′,8′)- 3,4,3′,4′-tetramethoxy-9,7-dihydroxy-8.8′,7..9′-lignan（1）、(?)-(7,7′,8,8′)-4-β--吡喃葡萄糖基-4′-羥基-3,3′,5′-三甲氧基-7,9′:7′,9-雙環(huán)氧木脂烷[(?)-(7,7′,8,8′)-4-β--glucopyranosyloxy-3,3′,5′- trimethoxy-7,9′:7′,9-diepoxy-lignane，2]、liballinol（3）、2-amino-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl) propane-1,3-diol（4）、對(duì)羥基苯丙醇（-hydroxyl benzyl propanol，5）、3-甲氧基-4-羥基苯丙醇（3-methoxy-4-hydroxyphenylpropanol，6）、3-羥基- 1-(3-甲氧基-4-羥基-苯基)-丙基-1-酮（4-β-hydroxy- propiovanillone，7）、3,4,5-三甲氧基肉桂酸（3,4,5- trimethoxy-cinnammic acid，8）、()-4-(3,4)-3,4- dihydroxy-2,6,6-trimethylcyclohex-1-en-1-yl) but-3- en-2-one（9）、對(duì)羥基苯甲醛（-hydroxy- benzaldehyde，10）、香草酸（vanillic acid，11）、3,4-二羥基苯乙酸（3,4-dihydroxyphenylacetic acid，12）、苯甲酰胺（benzamide，13）、苯乙酰胺（phenylacetamide，14）、-焦谷氨酸（- pyroglutamate，15）、-焦谷氨酸甲酯（methyl-- pyroglutamate，16）和(4,5)-5-hydroxyhexan- 4-olide（17）。其中，化合物9為新天然產(chǎn)物，化合物1～4、9、12～17為首次從板藍(lán)根中分離鑒定。一氧化氮（NO）抑制活性結(jié)果顯示，化合物7和8具有抑制NO釋放活性。

1 儀器與材料

Bruker Avance 400核磁共振儀（德國(guó) Bruker公司）；BT 125D型電子分析夭平（德國(guó)賽多利斯有限公司）；1260Infinity II半制備液相、1260Infinity分析液相（美國(guó)安捷倫科技有限公司）；CAPCELLPAK半制備色譜柱（250 mm×10 mm，5 μm），資生堂（中國(guó)）投資有限公司；乙腈和甲醇（阿達(dá)瑪斯試劑有限公司，HPLC純）；葡聚糖凝膠LH-20（美國(guó)GE公司）；反相ODS C18柱填料（日本島津公司）；Multiskan go 酶標(biāo)儀（美國(guó)賽默飛公司）；Thermo HERH細(xì)胞培養(yǎng)箱（美國(guó)賽默飛公司）；氨基胍鹽酸鹽（Sigma公司）。

板藍(lán)根藥材于2017年7月采自黑龍江省大慶市，經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)王瑞教授鑒定為十字花科松藍(lán)屬植物松藍(lán)Fort. 的干燥根，標(biāo)本（20170716SL）保存于上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)教研室。

2 提取與分離

干燥的板藍(lán)根藥材45 kg，經(jīng)80%乙醇加熱回流提取3次，減壓回收乙醇，分別用石油醚、二氯甲烷、正丁醇萃取，得到石油酰部位20 g、二氯甲烷部位170 g、正丁醇部位800 g。二氯甲烷部位（l70 g）經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（100∶0～10∶1）得到11個(gè)組分（F1～F11）。F3（16 g）經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（100∶1～100∶5）系統(tǒng)洗脫，得到F3-1～F3-6，6個(gè)組分。F3-5（2.9 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物7（4.5 mg）和8（3.6 mg）。F3-6（1.7 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物9（4.0 mg）；F4（14 g）經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（100∶1～100∶5）系統(tǒng)洗脫，得到F4-1～F4-5，5個(gè)組分。F4-4（0.8 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，合并相同流分后，再經(jīng)SP-HPLC（乙腈-水 22∶78）洗脫，得到化合物3（2.8 mg，R＝18.6 min）。F4-5（2.3 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物14（5.4 mg）；F7（5 g）經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（100∶5～100∶10）系統(tǒng)洗脫，得到F7-1～F7-4，4個(gè)組分。F7-2（3.1 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到F7-2-1～F7-2-4，4個(gè)組分，F(xiàn)7-2-3（0.4 g）經(jīng)SP-HPLC（乙腈-水28∶72）洗脫，得到化合物5（4.9 mg，R＝24.2 min）和6（2.5 mg，R＝32.1 min）；F8（4 g）經(jīng)ODS C18柱色譜，乙腈（10%、30%、60%）洗脫，得到3個(gè)組分F8-1～F8-3。F8-3（2.7 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到F8-3-1～F8-3-3，3個(gè)組分，F(xiàn)8-3-2（0.5 g）經(jīng)SP-HPLC（乙腈-水15∶85）洗脫，得到化合物10（4.4 mg，R＝9.4 min）和11（5.2 mg，R＝17.3 min）；F9（6 g）經(jīng)ODS C18柱色譜，乙腈（10%、30%、50%、70%）洗脫，得到F9-1～F9-4，4個(gè)組分。F9-4（3.6 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到4個(gè)組分F9-4-1～F9-4-4。F9-4-4（0.8 g）經(jīng)SP-HPLC（乙腈-水18∶82）洗脫，得到化合物12（2.3 mg，R＝9.2 min）；F10（6 g）經(jīng)ODS C18柱色譜，乙腈（10%、20%、40%、60%）洗脫，得到4個(gè)組分F10-1～F10-4。F10-2（0.2 g）經(jīng)SP-HPLC（乙腈-水21∶79）洗脫，得到化合物2（4.6 mg，R＝25.1 min）。F10-4（3.6 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物1（2.8 mg）；F11（9 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜甲醇-水（1∶1）洗脫，得到F11-1～F11-8，8個(gè)組分。F11-5（0.3 g）經(jīng)SP-HPLC（乙腈-水25∶75）洗脫，得到化合物4（9.4 mg，R＝14.9 min）。F11-7（0.4 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜甲醇-水（1∶1）洗脫，得到化合物17（6.7 mg）；F13（87 g）經(jīng)ODS C18柱色譜，乙腈（10%、30%、50%、70%）洗脫，得到F13-1～F13-4，4個(gè)組分。F13-4（10.5 g）經(jīng)葡聚糖凝膠色譜二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物13（3.1 mg）；F14（22 g）經(jīng)ODS C18柱色譜，乙腈（10%、30%、50%、70%）洗脫，得到F14-1～F14-4，4個(gè)組分。F14-3（3.2 g）經(jīng)ODS C18柱色譜，乙腈（10%、30%、50%、70%）洗脫，得到F14-3-1～F14-3-4，4個(gè)組分。F14-3-3（0.9 g）經(jīng)SP-HPLC（乙腈-水32∶68）洗脫，得到化合物15（5.6 mg，R＝10.3 min）和16（2.7 mg，R＝13.9 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無(wú)定形粉末，ESI-MS/: 405 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 6.88 (1H, d,= 1.3 Hz, H-2), 6.91 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 6.84 (1H, dd,= 1.3, 8.0 Hz, H-6), 4.55 (1H, d,= 7.3 Hz, H-7), 2.37 (1H, m, H-8), 3.10 (2H, m, H-9), 6.84 (1H, d,= 1.3 Hz, H-2′), 6.84 (1H, d,= 7.7 Hz, H-5′), 6.74 (1H, dd,= 1.3, 7.7 Hz, H-6′), 4.33 (1H, dd,= 3.4, 8.1 Hz, H-7′), 1.73 (1H, m, H-8′), 3.72 (2H, overlapped, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 137.3 (C-1), 110.1 (C-2), 148.9 (C-3), 148.1 (C-4), 111.7 (C-5), 118.6 (C-6), 83.2 (C-7), 49.7 (C-8), 60.7 (C-9), 135.7 (C-1′), 110.5 (C-2′), 148.8 (C-3′), 148.1 (C-4′), 119.2 (C-5′), 111.5 (C-6′), 74.1 (C-7′), 52.4 (C-8′), 69.9 (C-9′), 55.8 (3-OCH3), 55.7 (3′-OCH3), 55.9 (4-OCH3), 55.8 (4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[16]，化合物1鑒定為(7,8,7′,8′)- 3,4,3′,4′-tetramethoxy-9,7-dihydroxy-8.8′,7..9′-lignan。

化合物2：無(wú)色膠狀物，ESI-MS: 551 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 6.88 (1H, d,= 1.3 Hz, H-2), 6.71 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5), 6.74 (1H, dd,= 1.3, 8.1 Hz, H-6), 4.65 (1H, d,= 4.6 Hz, H-7), 3.04 (1H, overlapped, H-8), 4.15 (1H, m, H-9a), 3.76 (1H, overlapped, H-9b), 6.65 (2H, s, H-2′, 6′), 4.60 (1H, d,= 4.8 Hz, H-7′), 3.04 (1H, overlapped, H-8′), 4.15 (1H, m, H-9′a), 3.76 (1H, overlapped, H-9′b), 4.88 (1H, m, H-1′′), 3.17～3.11 (4H, m, H-2′′～5′′), 3.60 (1H, d,= 11.3 Hz, H-6′′a), 3.40 (1H, m, H-6′′b), 3.76 (9H, s, 3, 3′, 5′-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 137.6 (C-1), 110.9 (C-2), 148.0 (C-3), 146.4 (C-4), 115.6 (C-5), 119.1 (C-6), 85.6 (C-7), 54.2 (C-8), 71.7 (C-9), 132.6 (C-1′), 104.7 (C-2′), 153.1 (C-3′), 134.2 (C-4′), 153.1 (C-5′), 104.7 (C-6′), 85.6 (C-7′), 54.0 (C-8′), 71.5 (C-9′), 103.2 (C-1′′), 74.6 (C-2′′), 77.0 (C-3′′), 70.4 (C-4′′), 77.7 (C-5′′), 61.4 (C-6′′), 56.1 (3-OCH3), 56.9 (3′, 5′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[17]，化合物2鑒定為(?)-(7,7′,8,8′)-4-β--吡喃葡萄糖基- 4′-羥基-3,3′,5′-三甲氧基-7,9′:7′,9-雙環(huán)氧木脂烷。

化合物3：白色粉末，ESI-MS/: 299 [M＋H]+。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.18 (4H, d,= 8.6, H-2, 2′, 6, 6′), 6.75 (4H, d,= 8.6 Hz, H-3, 3′, 5, 5′), 4.68 (2H, d,= 4.2 Hz, H-7, 7′), 3.11 (2H, m, H-8, 8′), 3.81 (2H, dd,= 8.7, 3.9 Hz, H-9a, 9a′), 4.19 (2H, dd,= 8.7, 2.2 Hz, H-9b, 9b′)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 133.1 (C-1, 1′), 128.8 (C-2, 2′, 6, 6′), 116.3 (C-3, 3′, 5, 5′), 158.3 (C-4, 4′), 87.4 (C-7, 7′), 55.3 (C-8, 8′), 72.5 (C-9, 9′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[18]，故鑒定化合物3為liballinol。

化合物4：白色無(wú)定形粉末，ESI-MS: 212 [M－H]－。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 6.89 (1H, d,= 1.5 Hz, H-2), 6.74 (1H, dd,= 1.5, 8.0 Hz, H-6), 6.72 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 4.60 (1H, d,= 4.1 Hz, H-7), 4.10 (1H, m, H-9a), 3.76 (3H, s, OCH3), 3.70 (1H, dd,= 3.4, 9.1 Hz, H-9b), 3.39 (2H, brs, NH2), 3.03 (1H, dd,= 2.0, 4.2 Hz, H-8)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 132.2 (C-1), 110.4 (C-2), 147.6 (C-3), 146.0 (C-4), 115.2 (C-5), 118.7 (C-6), 85.2 (C-7), 53.6 (C-8), 70.9 (C-9), 55.6 (OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[19]，故化合物4鑒定為2-amino-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl) propane-1,3- diol。以上數(shù)據(jù)通過(guò)DEPT 135、HSQC、HMBC和1H-1H COSY譜圖進(jìn)行歸屬驗(yàn)證。

化合物5：白色粉末，ESI-MS/: 151 [M－H]?。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 6.96 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2, 6), 6.65 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3, 5), 3.39 (2H, t,= 6.5 Hz, H-9), 2.48 (2H, t,= 6.5 Hz, H-7), 1.65 (2H, m, H-8)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 155.2 (C-4), 132.2 (C-1), 129.1 (C-2, 6), 115.0 (C-3, 5), 60.1 (C-9), 34.7 (C-8), 30.8 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[20]，化合物5鑒定為對(duì)羥基苯丙醇。

化合物6：白色粉末，ESI-MS/: 183 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 6.74 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2), 6.68 (1H, d,7.9 Hz, H-5), 6.58 (1H, dd,= 7.9, 1.8 Hz, H-6), 3.76 (3H, s, 3-OCH3), 3.41 (2H, t,= 6.5 Hz, H-9), 2.52 (2H, t,= 7.3 Hz, H-7), 1.68 (2H, m, H-8)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 133.0 (C-1), 112.5 (C-2), 147.4 (C-3), 144.4 (C-4), 115.3 (C-5), 120.3 (C-6), 31.3 (C-7), 34.7 (C-8), 60.2 (C-9), 55.5 (OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[21]，化合物6鑒定為3-甲氧基-4-羥基苯丙醇。

化合物7：無(wú)定形白色粉末，ESI-MS: 195 [M－H]?。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 7.44 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 7.51 (1H, dd,= 8.2, 2.0 Hz, H-6′), 6.86 (1H, d,= 8.2 Hz, H-5′), 3.82 (3H, s, OCH3), 3.81 (1H, m, H-2a), 3.05 (1H, m, H-2b), 3.74 (2H, t,= 6.2 Hz, H-3)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 197.3 (C-1), 40.9 (C-2), 57.2 (C-3), 128.9 (C-1′), 111.0 (C-2′), 147.5 (C-3′), 151.6 (C-4′), 114.9 (C-5′), 123.1 (C-6′), 55.6 (3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[22]，化合物7鑒定為3-羥基- 1-(3-甲氧基-4-羥基-苯基)-丙基-1-酮。

化合物8：無(wú)色針狀結(jié)晶（甲醇），ESI-MS: 237 [M－H]?。1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.59 (1H, d,= 15.9 Hz, H-7), 6.91 (2H, s, H-2, 6), 6.37 (1H, d,= 15.9 Hz, H-8), 3.88 (6H, s, 3, 5-OCH3), 3.77 (3H, s, 4-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 126.5 (C-1), 107.1 (C-2, 6), 149.7 (C-3, 5), 140.3 (C-4), 147.3 (C-7), 115.6 (C-8), 169.8 (C-9), 52.2 (3, 5-OCH3), 57.0 (4-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[23]，化合物8鑒定為3,4,5-三甲氧基肉桂酸。

化合物9：白色粉末，ESI-MS/: 387 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 1.76 (1H, dd,= 3.1, 12.4 Hz, H-2a), 2.26 (1H, dd,= 12.4, 12.4 Hz H-2b), 3.63 (1H, ddd,= 12.4, 3.8, 3.4 Hz, H-3), 3.74 (1H, d,= 3.4 Hz, H-4), 7.15 (1H, d,= 16.4 Hz, H-7), 6.03 (1H, d,= 16.4 Hz, H-8), 2.27 (3H, s, H-10), 1.80 (3H, s, H-11), 1.06 (3H, s, H-12), 1.01 (3H, s, H-13)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 36.8 (C-1), 41.5 (C-2), 65.8 (C-3), 71.0 (C-4), 134.0 (C-5), 138.0 (C-6), 142.4 (C-7), 133.3 (C-8), 198.4 (C-9), 27.6 (C-10), 20.2 (C-11), 27.8 (C-12), 30.2 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[24]，化合物9鑒定為()-4-(3,4)-3,4-dihydroxy-2,6,6-trimethyl- cyclohex-1-en-1-yl)but-3-en-2-one。

化合物10：白色粉末，ESI-MS/: 123 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 9.79 (1H, s, COH), 7.75 (2H, d,= 8.5 Hz, H-2, 6), 6.79 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3, 5), 10.63 (1H, brs, OH)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 128.9 (C-1), 136.1 (C-2, 6), 116.3 (C-3, 5), 163.8 (C-4), 191.4 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[25]，化合物10鑒定為對(duì)羥基苯甲醛。

化合物11：白色粉末，ESI-MS/: 169 [M＋H]+。1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.15 (1H, brs, COOH), 7.44 (1H, overlapped, H-2), 6.79 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5), 6.79 (1H, overlapped, H-6), 3.81 (3H, s, OCH3), 10.13 (1H, brs, OH)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 122.3 (C-1), 115.5 (C-2), 147.6 (C-3), 151.5 (C-4), 113.2 (C-5), 123.9 (C-6), 167.8 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[26]，化合物11鑒定為香草酸。

化合物12：白色粉末，ESI-MS/: 169 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 6.66 (1H, d,= 2.2 Hz, H-2), 6.56 (1H, d,= 8.3 Hz, H-5), 6.61 (1H, dd,= 8.3, 2.2 Hz, H-6), 2.16 (2H, s, H-7), 8.94 (1H, brs, OH), 10.07 (1H, brs, OH)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 127.3 (C-1), 109.8 (C-2), 135.9 (C-3), 152.7 (C-4), 112.8 (C-5), 113.7 (C-6), 36.6 (C-7), 176.6 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[27-28]，化合物12鑒定為3,4-二羥基苯乙酸。

化合物13：白色粉末，ESI-MS/: 122 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 7.43 (2H, m, H-2, 6), 7.88 (2H, m, H-3, 5), 7.51 (1H, m, H-4), 8.02 (1H, brs, NH), 7.41 (1H, brs, NH)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 131.3 (C-1), 127.5 (C-2, 6), 128.3 (C-3, 5), 134.3 (C-4), 168.0 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[29]，化合物13鑒定為苯甲酰胺。

化合物14：白色粉末，ESI-MS/: 136 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 7.26 (2H, m, H-2, 6), 7.28 (2H, m, H-3, 5), 7.20 (1H, m, H-4), 6.91 (1H, brs, NH), 7.51 (1H, brs, NH), 3.18 (2H, s, H-7)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 126.7 (C-1), 128.6 (C-2, 6), 129.5 (C-3, 5), 136.9 (C-4), 42.7 (C-7), 172.8 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[29]，化合物14鑒定為苯乙酰胺。

化合物15：白色粉末，ESI-MS/: 130 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 7.93 (1H, brs, NH), 4.08 (1H, dd,= 4.2, 9.0 Hz, H-2), 2.10 (1H, m, H-3a), 2.35 (1H, m, H-3b), 1.96 (1H, m, H-4a), 2.13 (1H, m, H-4b)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 52.5 (C-2), 24.9 (C-3), 29.3 (C-4), 180.0 (C-5), 174.9 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[30]，化合物15鑒定為-焦谷氨酸。

化合物16：白色粉末，ESI-MS/: 144 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 8.00 (1H, brs, NH), 4.18 (1H, dd,= 4.2, 9.0 Hz, H-2), 2.11 (1H, m, H-3a), 2.34 (1H, m, H-3b), 1.96 (1H, m, H-4a), 2.12 (1H, m, H-4b), 3.67 (3H, s, OCH3)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 52.3 (C-2), 25.1 (C-3), 29.5 (C-4), 177.5 (C-5), 173.8 (C-6), 55.1 (OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[31]，化合物16鑒定為-焦谷氨酸甲酯。

化合物17：白色粉末，ESI-MS/: 131 [M＋H]+。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.44 (2H, m, H-2), 1.95 (1H, m, H-3a), 2.14 (1H, m, H-3b), 4.30 (1H, m, H-4), 3.62 (1H, m, H-5), 1.08 (3H, d,= 4.2 Hz, H-6)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 177.9 (C-1), 28.7 (C-2), 23.9 (C-3), 84.0 (C-4), 68.2 (C-5), 19.4 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[32]，化合物17鑒定為(4,5)-5-hydroxyhexan-4-olide。

4 NO抑制活性測(cè)定

參考課題組前期文獻(xiàn)報(bào)道[6-8]，化合物1～17采用CCK8法測(cè)定其NO抑制活性，實(shí)驗(yàn)方法分別設(shè)置空白組（FBS）、脂多糖（LPS）組（LPS 1 μg/mL）、LPS（1 μg/mL）＋陽(yáng)性藥氨基胍鹽酸鹽（0.1、1、5、25、50、100 μmol/L）組和LPS（1 μg/mL）＋化合物1～17（0.1、1、5、25、50、100 μmol/L）組，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，IC50取平均值。結(jié)果顯示，化合物7和8具有抑制活性，IC50值分別為（98.5±6.4）和（58.3±2.8）μmol/L，其余化合物的IC50值均＞100 μmol/L，陽(yáng)性藥氨基胍鹽酸鹽IC50值為（22.7±0.4）μmol/L。

5 討論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)系統(tǒng)分離純化得到了17個(gè)化合物，其中11個(gè)為首次從板藍(lán)根中報(bào)道，進(jìn)一步豐富了其化學(xué)成分，但NO抑制活性結(jié)果顯示僅化合物7和8具有溫和的抑制活性。因此，關(guān)于其抗炎作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)仍需要大量系統(tǒng)的研究工作來(lái)支撐。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Chemical constitutes from alcohol extract ofand their nitric oxide inhibitory activities

ZHANG Dong-dong1, 2, SUN Yu1, LI Jing-yi2, RUAN De-qing2, CHEN Kai-xian2, 3, LI Yi-ming2, WANG Rui2

1. School of Pharmacy, Shaanxi University of Chinese Medicine, Xianyang 712046, China 2. School of Pharmacy, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China 3. Shanghai Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Science, Shanghai 201203, China

To study the chemical constitutes from the alcohol extract ofroots and their nitric oxide inhibitory activities.The chemical components were isolated and purified by silica gel, ODS C18gel, sephadex LH-20 and semi preparative-HPLC chromatographic techniques while the structures were deduced by NMR and MS spectral data analysis, the NO inhibitory activities were tested by CCK-8 methods.Seventeen compounds were obtained and elucidated as (7,8,7′,8′)-3,4,3′,4′-tetramethoxy-9,7-dihydroxy-8.8′,7..9′-lignan (1), (?)-(7,7′,8,8′)-4-β--glucopyranosyloxy-3,3′,5′- trimethoxy-7,9′:7′,9-diepoxy-lignane (2), liballinol (3), 2-amino-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propane-1,3-diol (4),-hydroxyl benzyl propanol (5), 3-methoxy-4-hydroxyphenylpropanol (6), 4-β-hydroxypropiovanillone (7), 3,4,5-trimethoxy-cinnammic acid (8), ()-4-(3,4)-3,4-dihydroxy-2,6,6-trimethylcyclohex-1-en-1-yl)but-3-en-2-one (9),-hydroxybenzaldehyde (10), vanillic acid (11), 3,4-dihydroxyphenylacetic acid (12), benzamide (13), phenylacetamide (14),-pyroglutamate (15), methyl--pyroglutamate (16), and (4,5)-5-hydroxyhexan-4-olide (17). Compounds 7 and 8 exhibited NO inhibitory activities with IC50values of 98.5 and 58.3 μmol/L, respectively.Compound 9 was a new natural product, compounds 1—4, 9 and 12—17 were isolated fromroot for the first time, compounds 7 and 8 showed NO inhibitory activities.

;Fort.; nitric oxide inhibitory activities; phenylpropanine; benzoic acid derivatives; 3,4,5- trimethoxy-cinnammic acid

R284.1

A

0253 - 2670(2022)07 - 1943 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.07.003

2021-08-15

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81573571）；國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81673570）；上海市進(jìn)一步加快中醫(yī)藥傳承創(chuàng)新發(fā)展三年行動(dòng)計(jì)劃項(xiàng)目 [ZY(2021-2023)-0215]；陜西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)科創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（2019-YL12）

張東東，男，博士，講師，主要從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究。Tel: (029)38185165 E-mail: zhangnatprod@163.com

王 瑞，女，教授，博士生導(dǎo)師。Tel: (021)51322181 E-mail: wr@shutcm.edu.cn

[責(zé)任編輯 王文倩]