肖小武，周志強(qiáng)，付輝政，郎淑琴，吳旻昱

1.江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330044

常通舒顆粒是用于習(xí)慣性便秘，老年性便秘及產(chǎn)后便秘的常用藥，臨床療效顯著，由何首烏、當(dāng)歸、赤芍、火麻仁、桑葚五味藥組成［1-2］。方中當(dāng)歸為臣藥，具有補(bǔ)血活血，潤腸通便等功效，現(xiàn)代研究表明當(dāng)歸主要含有有機(jī)酸、多糖類、黃酮類、揮發(fā)油類化合物及其他成分［3-4］。當(dāng)歸收載于《中國藥典》2020 年版一部［5］，規(guī)定其含揮發(fā)油不得少于0.4%。當(dāng)歸揮發(fā)油中含量最高的成分為藁本內(nèi)酯，且《中國藥典》2020 年版一部對(duì)當(dāng)歸流浸膏中的藁本內(nèi)酯進(jìn)行了定性鑒別［5］。現(xiàn)行的常通舒顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)缺乏對(duì)當(dāng)歸藥味質(zhì)量控制項(xiàng)目，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制技術(shù)較低，難以保證產(chǎn)品質(zhì)量和臨床療效。目前對(duì)常通舒顆粒的質(zhì)量控制技術(shù)研究報(bào)道較少［6-8］，故本試驗(yàn)參考相關(guān)研究［9-10］，以當(dāng)歸中指標(biāo)成分藁本內(nèi)酯為考察指標(biāo)，研究建立GC 法對(duì)常通舒顆粒中的藁本內(nèi)酯進(jìn)行測(cè)定，以期為常通舒顆粒的制造生產(chǎn)、質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供參考。

1 儀器與試藥

美國安捷倫8890 型氣相色譜儀（配置7693型自動(dòng)進(jìn)樣器、FID 檢測(cè)器），瑞士賽多利斯BT25S 型十萬分之一電子天平。藁本內(nèi)酯對(duì)照品購自中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)為111859-201906，純度以100% 計(jì)。試驗(yàn)用常通舒顆粒樣品分別為長春英平藥業(yè)有限公司（S1: 批號(hào)20190902）和貴州威門藥業(yè)股份有限公司（S2：批號(hào)200601，S3:批號(hào)200701，S4:批號(hào)210901，S5:批號(hào)211001，S6:批號(hào)211101）。陰性樣品為照常通舒顆粒生產(chǎn)工藝制備缺當(dāng)歸的陰性樣品。無水乙醇為分析純，

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取藁本內(nèi)酯對(duì)照品15.12 mg，置10 mL量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，作為對(duì)照品母液；再精密量取上述對(duì)照品母液1 mL，置10 mL 量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備

取樣品內(nèi)容物，研細(xì)，取約10.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇25 mL，密塞，稱定重量，靜置過夜后超聲處理15 min，放冷，用無水乙醇補(bǔ)足減失重量，取上清液，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 陰性樣品溶液的制備

取陰性樣品，照“2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法同法制成陰性樣品溶液。

2.4 色譜條件

以Agilent HP-5（30 m×0.32 mm×0.25 μm）為色譜柱；以高純氮?dú)鉃檩d氣，柱流速為2.5 mL/min；進(jìn)樣體積為1 μL，進(jìn)樣分流比為1∶1；進(jìn)樣口溫度為250 ℃，柱箱采取程序升溫：最初溫度為50 ℃（保留0.5 min），然后以6 ℃/min 的速率升至130 ℃（保留0.5 min），再以10 ℃/min 的速率升至260 ℃；檢測(cè)器為FID，檢測(cè)器溫度為280 ℃。結(jié)果供試品溶液中藁本內(nèi)酯分離度良好，且陰性無干擾。對(duì)照品、供試品和陰性對(duì)照溶液色譜圖見圖1。

圖1 各溶液HPLC色譜圖：A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性樣品

2.5 線性關(guān)系考察

精密量取“2.1”項(xiàng)下制備的對(duì)照品母液1、1、1、2 mL 分別置于50、20、10、10 mL 的量瓶中，依次用無水乙醇稀釋至刻度。分別取上述4 個(gè)濃度的對(duì)照品溶液以及對(duì)照品母液進(jìn)樣測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)、以測(cè)得峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果藁本內(nèi)酯的回歸方程為Y=2.341 6X+3.102 7，r=0.999 9。表明藁本內(nèi)酯在30.24～1 512.00 μg/mL 的濃度范圍內(nèi)呈較好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，按“2.4”項(xiàng)下方法連續(xù)進(jìn)樣6 次，測(cè)定峰面積。結(jié)果藁本內(nèi)酯峰面積的RSD 為1.27%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品（S1），按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4”條件下24 h 內(nèi)分別于每隔4 h 進(jìn)樣測(cè)定峰面積，結(jié)果藁本內(nèi)酯的峰面積的RSD 為0.89%，見表1，表明藁本內(nèi)酯在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

表1 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品（S1），按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6 份，按上述“2.4”條件進(jìn)行分析測(cè)定，藁本內(nèi)酯平均含量為304.55 μg/g，RSD 為1.92%（n=6），結(jié)果表明此方法重復(fù)性較好，見表2。

表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取樣品（S1）6份，每份約5.0g，精密稱定，各精密加入藁本內(nèi)酯對(duì)照品溶液(濃度60.48 μg/mL)，每份25 mL，按“2.2”項(xiàng)下方法除不加無水乙醇外同法制備供試品溶液，按上述“2.4”條件進(jìn)行分析測(cè)定，平均回收率為95.77%，RSD 為1.3%。結(jié)果表明方法準(zhǔn)確可靠，見表3。

表3 藁本內(nèi)酯回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.10 樣品的測(cè)定

按照擬定的方法對(duì)6 批樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表4。

表4 樣品的測(cè)定結(jié)果（n=4）

3 討論

3.1 前處理方式的選擇

本試驗(yàn)考察了超聲、回流、揮發(fā)油提取三種提取方式，但因藁本內(nèi)酯在高溫下不穩(wěn)定，回流、揮發(fā)油提取以及超聲時(shí)間過長均存在熱分解而損失，因此最終采用先冷浸后超聲的提取方式。此外，本試驗(yàn)還考察了甲醇、無水乙醇、乙酸乙酯以及石油醚四種提取溶劑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無水乙醇的提取率最高，故試驗(yàn)最終采用無水乙醇為提取溶劑。

3.2 分析方法的確定

本實(shí)驗(yàn)最初考察了液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，但常通舒顆粒處方藥味較多，成分復(fù)雜且大部分為極性較強(qiáng)、不易揮發(fā)的組分，對(duì)測(cè)定存在較大的干擾，故本試驗(yàn)最終選擇了干擾較小的毛細(xì)管氣相色譜進(jìn)行測(cè)定。

3.3 樣品結(jié)果分析

從結(jié)果可知，藁本內(nèi)酯的含量在不同生產(chǎn)企業(yè)間相差較大，且同企業(yè)不同批次間含量差異也較大。分析其原因?yàn)槌Ｍㄊ骖w粒的生產(chǎn)工藝為水煎醇沉，藁本內(nèi)酯受熱不穩(wěn)定且易揮發(fā)造成藁本內(nèi)酯的損耗，提示生產(chǎn)企業(yè)需控制生產(chǎn)工藝參數(shù)，保證常舒通顆粒產(chǎn)品的批間一致性。