汪全民 吳江亭 余司華

目前已確定的Rh 血型抗原有55 種［1］,Rh 血型系統(tǒng)抗原具有較強的免疫原性,臨床意義最大的是5 種抗原,其免疫原性強弱順序為D＞E＞C＞c＞e［2］。國內(nèi)臨床輸血前對紅細(xì)胞要求ABO、RhD 血型常規(guī)檢測,其他血型抗原未作要求。近年來,本地區(qū)因Rh(C)、Rh(c)、Rh(E)、Rh(e)血型抗原非同型輸注,造成臨床免疫性輸血問題屢有發(fā)生,其中產(chǎn)生Rh 血型不規(guī)則抗體最為多見,特別是需要多次輸血的患者,為其選擇Rh 表型一致或相容的血液進行輸注,可以減少不規(guī)則抗體的產(chǎn)生,避免后期配血困難。因此,臨床輸血治療中僅僅滿足ABO 與RhD 血型匹配輸注是遠遠不夠的,不能完全避免輸血相關(guān)免疫反應(yīng)和新生兒溶血病等情況的發(fā)生［3-6］。為此,本血站對占比大的RhD陽性獻血者進行表型抗原檢測,分析本地區(qū)獻血人群Rh 表型分布規(guī)律,建立獻血者Rh 表型數(shù)據(jù)庫,特別是稀有表型庫,以提高精準(zhǔn)輸血的水平,保障臨床輸血安全。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021 年11 月～2022 年4 月RhD陽性獻血者10034 例作為調(diào)查對象,無重復(fù)獻血者,年齡18～60 歲,男4962 例,女5072 例,每位獻血者留取EDTA-K2抗凝血3 ml。

1.2 試劑與儀器 血型定型試劑免疫球蛋白M(IgM)抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e 和抗體特異性鑒定普細(xì)胞(上海血液生物醫(yī)藥股份有限公司)。檢測設(shè)備：貝克曼庫爾特PK7300 全自動血型檢測儀。

1.3 檢測方法 微量板鹽水法檢測獻血者Rh(D)、Rh(C)、Rh(c)、Rh(E)、Rh(e)血型,依據(jù)設(shè)備使用說明書,將被檢紅細(xì)胞稀釋成1.7%的濃度,抗血清使用生理鹽水按1:8 的比例稀釋,各加25 μl 至梯度微量板中混勻,30℃靜止1 h 后判讀結(jié)果,可疑結(jié)果使用鹽水試管法進行確認(rèn),每批實驗設(shè)置3 個質(zhì)控樣本與常規(guī)標(biāo)本一同檢測(質(zhì)控樣本表型為ccdee、CCDee、ccDEE)。數(shù)據(jù)的錄入與檢索采用Microsoft Office Excel 軟件。

1.4 觀察指標(biāo) 分析RhD 陽性獻血者Rh 表型ABO血型分布情況、Rh 抗原分布情況以及不同Rh 表型輸血相容頻率,分析Rh 血型不規(guī)則抗體陽性受血者情況。

2 結(jié)果

2.1 RhD 陽性獻血者Rh 表型ABO 血型分布情況10034 例RhD 陽性獻血者檢出8 種表型,占比由高到低 為CCDee(46.98%)、CcDEe(33.84%)、CcDee(8.72%)、ccDEE(5.88%)、ccDEe(3.14%)、CCDEe(0.92%)、CcDEE(0.27%)、ccDee(0.25%),未檢出CCDEE 表 型。見表1。

表1 RhD 陽性獻血者Rh 表型ABO 血型分布情況［n(%)］

2.2 RhD 陽性獻血者Rh 抗原分布情況 RhD 陽性獻血者Rh 抗原陽性率由高到低為e(93.85%)＞C(90.73%)＞c(52.10%)＞E(44.05%)。見表2。

表2 RhD 陽性獻血者Rh 抗原分布情況［n(%)］

2.3 RhD 陽性獻血者不同Rh 表型輸血相容頻率 根據(jù)本地區(qū)獻血者Rh 表型分布頻率,應(yīng)用表型相容性原理計算血液相容性頻率,不同Rh 表型輸血相容性頻率由高到低分別為CcDEe(100.00%)＞CcDee(55.95%)＞C CDEe(47.90%)＞CCDee(46.98%)＞ccDEe(9.27%)＞CcDEE(6.15%)＞ccDEE(5.88%)＞ccDee(0.25%)＞CCDEE(0)。見表3。

表3 RhD 陽性獻血者不同Rh 表型輸血相容頻率(%)

2.4 2 例Rh 血型不規(guī)則抗體陽性受血者情況 2022 年1～4 月,本血站輸血研究室接收患者疑難配血2 例,受血者1,女,年齡56 歲,臨床診斷急性骨髓纖維化,有輸血史和妊娠史,經(jīng)不規(guī)則抗體鑒定為抗-E 和抗-Lea,該患者在3個月內(nèi)共配血3次；受血者2,男,年齡75歲,臨床診斷肝癌和消化道出血,有輸血史,經(jīng)不規(guī)則抗體鑒定為抗-Ce。從Rh 表型庫中調(diào)出與2 例患者Rh 表型一致的血樣進行交叉配血,主側(cè)在鹽水、聚凝胺和抗人球蛋白介質(zhì)中均未發(fā)生凝集及溶血現(xiàn)象,臨床醫(yī)院反饋患者紅細(xì)胞計數(shù)明顯升高,未發(fā)生輸血不良反應(yīng)。見表4。

表4 2 例Rh 血型不規(guī)則抗體陽性受血者情況

3 討論

根據(jù)紅細(xì)胞是否存在D 抗原分為RhD 陽性和RhD陰性［7,8］,本次調(diào)查的獻血者均為RhD 陽性,理論上RhD 陽性表型共有9 種,本次調(diào)查的10034 例獻血者檢 出8 種(CCDee、CcDEe、CcDee、ccDEE、ccDEe、CCDEe、CcDEE、ccDee),未檢出CCDEE 表 型,可 能與篩查人數(shù)較少有關(guān)。據(jù)趙娜等［7］報道,贛州地區(qū)篩查Rh 表型4133 例獻血者檢出2 例CCDEE 表型,說明本地區(qū)CCDEE 表型極其罕見,屬于稀有血型。本次研究結(jié)果顯示,10034 例RhD 陽性獻血者檢出8 種表型,占比由高到低為CCDee(46.98%)、CcDEe(33.84%)、CcDee(8.72%)、ccDEE(5.88%)、ccDEe(3.14%)、CCDEe(0.92%)、CcDEE(0.27%)、ccDee(0.25%),未檢出CCDEE 表型。與向敏等［8］報道北京地區(qū)RhD 陽性獻血者Rh 表型分布規(guī)律一致,除低頻率CcDEE 和ccDee表現(xiàn)外,Rh 表型在ABO 血型中的分布頻率與總體分布頻率保持一致,CCDee 和CcDee 表型頻率合計占55.70%,有利于精準(zhǔn)輸血和電子配血的施行。

Rh 血型系統(tǒng)不規(guī)則抗體是引起遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的主要原因［9-11］,患者往往通過輸注自身抗原缺乏的陽性紅細(xì)胞或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生,因Rh 血型抗原(C、c、E、e)免疫原性較強,產(chǎn)生不規(guī)則抗體的風(fēng)險較大［12-14］。本研究結(jié)果顯示,RhD 陽性獻血者Rh 抗原陽性率由高到低為e(93.85%)＞C(90.73%)＞c(52.10%)＞E(44.05%)。RhE 和Rhc 抗原陽性頻率大約為50%,當(dāng)相應(yīng)抗原陰性的患者輸血時輸注陽性紅細(xì)胞的幾率同樣占到50%,是否產(chǎn)生抗E 和抗c 抗體取決于抗原的免疫原性和輸血次數(shù)。RhC 和Rhe 抗原陽性分布頻率均＞90%,雖然從人群分布頻率上考慮,輸血風(fēng)險要＜RhEc血型,但此類患者一旦產(chǎn)生抗C 或抗e 抗體,極難找到相容的血液,因此,表型為ccEE 的輸血患者,因RhCe抗原陽性率極高,多次輸血的患者應(yīng)考慮同表型輸注。本實驗室遇到的受血者2 即為ccDEE 表型,有輸血史,經(jīng)本實驗室抗體鑒定存在抗Ce 抗體,而本地區(qū)ccDEE表型分布頻率只有5.88%,按照以往工作方法盲篩該表型血液,將大大增加患者的篩血費用和配血時間,建立Rh 表型庫后可直接從庫存血液中調(diào)出該表型血樣進行交叉配血,從而為臨床患者及時輸血節(jié)約寶貴時間。

根據(jù)Rh 表型輸血相容性原理［15,16］,計算本地區(qū)臨床患者不同表型在獻血人群中找到相容性血液的幾率,研究結(jié)果顯示,CcDee 和CCDEe 表型在獻血人群中的分布頻率只有8.72%和0.92%,但其輸血相容性幾率卻能達到55.95%和47.90%,對于存在這兩種表型的患者,在獻血人群中找到表型一致的血液將變得十分困難,但要找到輸血相容性血液卻很容易,且并不存在輸血風(fēng)險。然而,對于ccDEe(9.27%)、CcDEE(6.15%)、ccDEE(5.88%)3 種表型輸血相容頻率均＜10%,要找到表型相容的血液極為困難,皆因RhC 和Rhe 抗原在人群中的分布頻率極高有關(guān)［17］,若要避免陽性紅細(xì)胞的不匹配輸血,需要醫(yī)院輸血科和血站相互協(xié)助,建立基于信息共享的Rh 表型數(shù)據(jù)庫,提高不同表型血液的利用率。ccDee 表型的分布頻率和輸血相容頻率只有0.25%,屬于稀有血型,采供血機構(gòu)檢出該表型血液時可按RhD 陰性血液進行管理,在血源充足的情況下,RhD 陰性獻血者ccee 表型頻率較高,可輸注ccdee 表型的血液,滿足特殊患者的用血需求。而對稀有表型CCDEE 本地區(qū)未檢出,只能通過中國稀有血型庫找到相合的血液或自身輸血予以解決［18-20］。

綜上所述,僅僅滿足ABO 和RhD 血型抗原匹配輸血,并不能完全避免其他血型不合的同種免疫,大部分不規(guī)則抗體源自Rh 血型系統(tǒng),足以說明Rh 抗原不匹配輸血將嚴(yán)重影響臨床輸血的安全性和有效性,采供血機構(gòu)建立獻血者Rh 表型數(shù)據(jù)庫并持續(xù)更新,一方面,有利于已經(jīng)產(chǎn)生Rh 血型不規(guī)則抗體的患者快速檢索相合的血液,特別是稀有表型的用血需求；另一方面,配合醫(yī)院輸血科實行精準(zhǔn)輸血和電子配血,降低患者不規(guī)則抗體的發(fā)生率,對獻血人群中分布頻率極少的Rh 表型,血站可以優(yōu)化血源管理,常規(guī)儲存一定比例的稀有表型血液,保障臨床用血安全。